金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

低氧对人肺腺癌A549细胞生长的影响

目的：研究低氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549生长、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞技术观察低氧不同时间对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。采用免疫细胞化学方法检测bcl—2和caspase-3表达。采用半定量RT—PCR法分析低氧对细胞内缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的影响。结果：MTr结果显示低氧12、24、48h后，A549细胞生长受到抑制。流式细胞技术检测显示低氧12、24、48h后，G1／G0期的A549细胞增多，相应的S期细胞减少，同时A549细胞凋亡明显增多。免疫细胞化学结果显示随着低氧时间的延长，bcl-2表达减少，而easpase-3表达增加。RT—PCR检测HIF-1α mRNA的结果显示12、24、48h低氧组HIF-1α mRNA水平均较相应的常氧组增加（P〈0．05）。结论：低氧环境可抑制A549细胞增殖，使细胞周期阻滞于G。／G0期，并促进细胞凋亡，其作用可能是由于低氧环境影响HIF—1α mRNA水平及通过调节bcl—2和caspase-3的表达诱导细胞凋亡而实现。     

直流小电场对肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察应用直流电疗法对肺癌细胞凋亡的影响，研究直流小电场对于肺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法 应用体外直流小电场作用于肺腺癌细胞系A549，观察其对肺癌细胞凋亡和重要基因p53、Rb以及E2F1表达的影响。结果 直流小电场对肺癌细胞系A549有明显的诱导作用，200mV/mm和250mV/mm组癌细胞大量脱落，电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多（F=795.372,P=0.000）。电场组p53、Rb基因mRNA表达明显升高，E2F1基因mRNA表达明显下降。结论 直流小电场对肺癌细胞系A549具有明显的凋亡诱导作用并可能与p53、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

苦参碱对肺腺癌A549细胞CC10 mRNA表达的影响

目的:观察苦参碱对肺腺癌A549细胞生长、凋亡及其对CC10mRNA表达的影响。方法:肺腺癌A549细胞进行培养传代,按苦参碱药物作用浓度由低向高分为A、B、C、D、E组及对照组,培养72h后,MTT实验检测苦参碱对肺癌细胞生长抑制作用;Hoechst33258染色法观察苦参碱对A549细胞凋亡形态的影响,AnnexinV-PI双标法检测苦参碱对A549细胞凋亡率的影响,RT-PCR检测CC10mRNA的表达。结果:不同浓度的苦参碱均具有抑制肺癌A549细胞生长及诱导凋亡作用,A、B、C、D、E组及对照组A549细胞的生长抑制率及凋亡率分别为24.7%、5.12%,33.1%、8.36%,44.3%、10.81%,61.7%、17.10%,74.2%、25.67%及6.2%、3.06%,各组差异具有显著性(P<0.05)。各实验组CC10mRNA阳性表达率分别为1.03±0.07、0.87±0.03、0.74±0.04、0.62±0.06、0.49±0.04。结论:苦参碱抑制肺腺癌A549细胞生长及诱导细胞凋亡的作用可能与其促进CC10mRNA表达上调有关。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

直流小电场对肺癌细胞凋亡的诱导作用

目的观察应用直流电疗法对肺癌细胞凋亡的影响,研究直流小电场对于肺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法应用体外直流小电场作用于肺腺癌细胞系A549,观察其对肺癌细胞凋亡和重要基因p53、Rb以及E2F1表达的影响。结果直流小电场对肺癌细胞系A549有明显的诱导作用,200mV/mm和250mV/mm组癌细胞大量脱落,电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多(F=795.372,P=0.000)。电场组p53、Rb基因mRNA表达明显升高,E2F1基因mRNA表达明显下降。结论直流小电场对肺癌细胞系A549具有明显的凋亡诱导作用并可能与p53、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

缺氧诱导因子-1α对A549细胞株中生存素表达及其生物学特性的影响

目的观察非小细胞肺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对生存素转录的调控作用及对A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测生存素启动子序列与核蛋白结合的情况。EMSA实验分为阴性对照反应组、结合反应组、探针冷竞争反应组、突变探针的冷竞争反应组和特异性抗体反应组。应用脂质体将载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA HIF-1α质粒和阴性(错义链)、内参(β-肌动蛋白)微小RNA(miRNA)质粒转染A549细胞。转染分为未处理组(正常A549细胞)、HIF-1α沉默组(转染HIF-1αmiRNA质粒)、阴性对照组和内参组。杀稻瘟菌素筛选阳性克隆扩大培养;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法筛选出对A549细胞干扰效果最佳的miRNA HIF-1α干扰载体;常氧、缺氧条件下检测各组中HIF-1α、生存素在mRNA和蛋白水平的变化;用细胞计数法、流式细胞术和转移小室迁移试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移细胞数。结果 (1)γ-32P标记的生存素启动子序列-26^-9 bp与A549细胞核蛋白作用,该条带可与HIF-1α抗体结合产生特异性抗体结合条带;(2)常氧下HIF-1α沉默组的HIF-1α和生存素mRNA分别为0.313±0.051和0.060±0.008,明显低于未处理组的1.042±0.036和1.071±0.016(F=436.433,0.002,均P<0.05);HIF-1α和生存素的蛋白含量分别为0.559±0.051和0.051±0.003,未处理组分别是1.452±0.146和0.194±0.007,两组比较差异有统计学意义(F值为53.525和331.646,均P<0.05)。缺氧条件下HIF-1α沉默组中HIF-1α、生存素的mRNA和蛋白分别为0.604±0.040、0.394±0.018、0.997±0.026、0.172±0.006,明显受到抑制(mRNA的t值分别为7.809和-28.936,均P<0.01;蛋白的t值分别为13.523和-14.202,均P<0.01);常氧条件下,转染miRNA后A549细胞增殖(24 h为0.273±0.008)无明显变化,但迁移细胞数(30±6)比未处理组(121±17)减少;缺氧条件下,转染miRNA后,A549细胞生长速度(24 h为0.273±0.008)减慢,细胞体外的迁移细胞数(75±4)减少(均P<0.05)。结论 A549细胞中生存素核心启动子上存在HIF-1α结合位点;miRNA沉默A549细胞HIF-1α表达后,可有效下调生存素基因表达,常氧条件下仅抑制细胞迁移,缺氧条件下不仅促进细胞凋亡,还可抑制细胞增殖和迁移。     

紫杉醇耐药人肺腺癌细胞系的建立及生物学活性

目的：体外建立紫杉醇耐药人肺腺癌A549/TAX细胞系,并对其生物学特性进行研究.方法：采用逐步增加紫杉醇浓度结合低剂量持续诱导法,建立紫杉醇耐药人肺腺癌A549/TAX细胞系.MT T法描绘A549和A549/TAX细胞的生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期并比较经紫杉醇诱导24 h后A549和A549/TAX细胞平均凋亡率的差异;检测紫杉醇对A549/TAX细胞的半数抑制浓度、耐药系数（RI）及A549/TAX细胞对其他 5种化疗药物（顺铂、长春新碱、表阿霉素、足叶乙甙及吉西他滨）的交叉耐药谱;RT-PCR半定量分析A549/TAX细胞凋亡基因（bcl-2）及耐药基因（MDR1、LRP、GST-π）的mRNA表达.结果：A549/TAX细胞生长较亲本细胞快,S期细胞增多[（51.61±0.48）%],G1 期减少[（37.26±0.23）%],经紫杉醇（150 μmol/L）诱导前后平均凋亡率差异与A549细胞相比差异有显著性.A549/TAX细胞对紫杉醇、长春新碱、表阿霉素及足叶乙甙的RI分别为 21.3、12.91、5.88和4.79,而对顺铂（RI=1.06）和吉西他滨（RI=1.03）则无交叉耐药;A549/TAX细胞bcl-2、 MDR1、LRP mRNA的表达均较亲本细胞显著增高（P＜0.001）,GST-πmRNA未见表达.结论：成功建立了紫杉醇耐药A549/TAX细胞系,该细胞抗药性能明显、稳定,推测其多药耐药性与bcl-2、MDR1和LRP高表达有关.     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

β-谷甾醇对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究β-谷甾醇对A549细胞是否具有潜在的抗增殖和诱导凋亡作用。方法不同浓度β-谷甾醇处理人肺癌A549细胞24h后,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A549细胞周期分布及凋亡率的变化。结果β-谷甾醇以剂量依赖性方式明显抑制A549细胞的生长;流式结果表明β-谷甾醇使A549细胞阻滞在G2/M期,同时促使A549细胞凋亡率的增加。结论β-谷甾醇可诱导人肺腺癌A549细胞G2/M期细胞周期阻滞,并引起细胞凋亡性死亡。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感,不同性别孤独感发生率无差异性,不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）;随年级增加,孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970,P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题,老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童,以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。