质粒qnr介导的肠杆菌科细菌对喹诺酮类药物耐药机制研究进展

质粒介导的喹诺酮类抗菌药物耐药是近10年来新发现的细菌耐药机制,主要由耐药基因qnr介导,可在肠杆菌科细菌中水平传播,引发的感染不易控制,使得院内感染大范围流行.本文就qnr的发现、来源、种类、作用机制、遗传背景、流行情况、与ESBLs的关系、检测方法和临床意义等方面进行综述.     

SOS应答对质粒介导的qnr耐药基因表达调控机制的研究进展

SOS应答是普遍存在于细菌中的一种低保真度的DNA修复方式。当细菌DNA受损时，大量的DNA单链堆积，SOS应答启动并诱导远距离基因表达参与DNA修复。此修复过程缺失了DNA复制的校正功能，因此SOS应答会大大增加细菌的基因突变频率从而使细菌能够更快的适应不利环境。另一方面，随着细菌耐药的日益严峻，qnr基因家族成为质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistanc PMQR)研究热点。有报道发现细菌的SOS应答会对菌株的qnr耐药水平造成明显的差异性，完整的SOS应答能够使菌株MIC成倍增加。由此可以怀疑SOS应答对qnr基因的表达存在相应的调控机制，但是相关机制尚未阐明。基于此本文就SOS应答机制和qnr耐药机制二者之间的关系进行试探性的综述。     

痰标本中质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在肺炎克雷伯菌中的分布特征及耐药分析

目的:了解从痰标本中分离出的肺炎克雷伯菌对16种抗菌药物的耐药性,以及研究由质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肺炎克雷伯菌中的存在情况。方法:用PCR及直接测序的方法对135株肺炎克雷伯菌进行qnr基因检测,并用K-B纸片法检测其对16种抗菌药物的体外抗菌活性。另外,用琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对左氧氟沙星的MIC值。结果:135株肺炎克雷伯菌中,9株(6.6%)检出qnr基因。阳性菌株均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnr阳性菌株对左氧氟沙星敏感。结论:肺炎克雷伯菌中存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr基因,qnr阳性菌株呈现多重耐药。临床工作中,应加强对耐药基因的监测,降低细菌耐药的发生。     

产超广谱β内酰胺酶阴沟肠杆菌qnr基因介导的喹诺酮类耐药机制研究

<正>国外阴沟肠杆菌qnr基因介导的喹诺酮类耐药机制的研究并不鲜见,但国内仅在上海、武汉和广东等地区发现有qnr基因的报道[1-3]。本课题研究分析了qnr基因在产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌中的流行率及其与喹诺酮类耐药     

肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

目的 研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PMQR)在肺炎克雷伯菌临床分离株上的分布情况,并对阳性菌株上染色体介导的喹诺酮类耐药机制进行分析.方法 细菌的鉴定和药敏采用Vitek-2 compact系统;采用PCR法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6')-Ib-cr和qepA的分布情况.对包含PMQR的细菌,采用E-试验测定环丙沙星的MIC大小,同时扩增测序分析染色体基因gyrA、gyrB、parC、parE的突变情况.结果 临床分离的67株肺炎克雷伯菌中,qnrS、qnrB、aac-(6')-Ib-cr、qepA的检出率分别为14.93%、2.99%、2.99%和16.42%.8株细菌同时包含qnr和qepA基因,其中2株qnr、qepA和aac-(6')-Ib-cr同时阳性.PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定(0.032～≥64μg/mL),其中8株(占61.54%)对环丙沙星高水平耐药(≥64μg/mL).比对结果显示,环丙沙星MIC≤0.5μg/mL的3株细菌几乎未见染色体的氨基酸序列改变;而环丙沙星MIC≥8μg/mL的菌株全部存在gyrA和parC编码氨基酸序列改变,且突变主要集中在gyrA 83位、87位和parC 80位上.所有PMQR阳性的肺炎克雷伯菌的gyrB和parE均未发现任何氨基酸序列突变.结论 临床分离的肺炎克雷伯菌上检测到qnr、aac-(6')-Ib-cr、qepA的分布与共存.PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定,但染色体机制仍是肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素耐药的主要机制,突变主要见于gyrA的83位、87位及parC的80位上.     

肠杆菌科细菌喹诺酮耐药基因qnrB的研究

目的 对2005年10月～2006年4月临床分离的120株肠杆菌科细菌检测qnrB的分布,同时研究qnr阳性菌株与blaSHV、bhtCTX-M或质粒型AmpC β-内酰胺酶基因的关系,为进一步研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PMQR)提供实验依据.方法 采用碱裂解变性法提纯质粒DNA,PCR法检测qnrA和qnrB的存在,接合实验验证qnr的转移性.扩增qnrB全序列、测序.对所有qnr阳性菌株,采用nitrocefin法检测qnr阳性菌产β-内酰胺酶情况,多重PCR法检测blaSHV、btaCTX-M及多种质粒型AmpC β-内酰胺酶基因.结果 120株肠杆菌科细菌中,qnrA和qnrB的检出率分别为30.8%与27.5%,其中13株细菌同时检出qnrA和qnrB;肠杆菌属、克雷伯菌属细菌及大肠埃希菌qnr的检出率分别为52.9%、59.3%和50.0%.17株细菌可扩增出681bp的全序列片段.测序结果显示,部分菌株包含qnrBl;另有4株细菌的qnrB序列相同,但与qnrB3相比存在3个位点核苷酸序列突变(201位A→T,271位T→G,498位G→A)而导致编码蛋白的氨基酸存在2个位点差异,为新的qnrB亚型(qnrB6),GenBank注册号为:EF520349.所有qnr阳性菌均可使nitrocefin纸片变红色.qnr阳性菌中,49株(89.1%)包含blaSHV或blaCTX-M;约70.0%可检测到质粒型AmpC相关的β-内酰胺酶基因,分别有18和16株细菌可扩增到blaDHA及blaEBC.结论 我院临床存在qnr阳性菌株的流行,发现一种新的qnrB亚型(qnrB6).     

SOS应答对质粒介导的qnr耐药基因表达调控机制的研究进展

SOS应答是普遍存在于细菌中的一种低保真度的DNA修复方式。当细菌DNA受损时，大量的DNA单链堆积，SOS应答启动并诱导远距离基因表达参与DNA修复。此修复过程缺失了DNA复制的校正功能，因此SOS应答会大大增加细菌的基因突变频率从而使细菌能够更快的适应不利环境。另一方面，随着细菌耐药的日益严峻，qnr基因家族成为质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistanc     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及qnr基因检测

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。     

天津地区大肠埃希菌临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究

目的 了解天津地区临床分离的大肠埃希菌中qnr,aac(6')-Ib-cr及gepA基因的流行情况,分析阳性菌株感染的微生物学及临床特征.方法 从天津某三甲医院收集环丙沙星耐药(CPLX,MIC 4gg/mL)的大肠埃希菌共75株,采用PCR法检测gnrA,gnrB,gnrS,aac(6')-Ib及gepA基因,对aac(6'),-Ib基因阳性菌株用Fok I酶切确认aac(6')-Ib-cr基因,接合试验验证qnr的转移性.所有阳性菌株用PCR法检测p-内酰胺酶基因,并收集阳性菌株感染患者临床资料进行分析.结果 75株环丙沙星耐药的大肠埃希菌中共有18株(24%)携带qnr基因和(或)aac(6)-Ib-cr基因,其中gnrB,gnrS和aac(6')-Ib-cr检出率分别为5.3%,4%和21.3%,未检出gnrA和gepA o 5株qnr阳性菌株均接合传递成功.18株gnr1aac(6')-1b-cr阳性的大肠埃希菌中均检测出R-内酸胺酶基因.阳性菌株对喹诺酮类和头孢菌素类药物高度耐药且主要来源于泌尿系感染,感染患者均为中老年人.结论 天津地区临床存在qnr和aac(6')-Ib-cr阳性菌株的流行,这是首次在天津发现qnr介导的喹诺酮类耐药.     

大肠埃希菌耐喹诺酮类抗菌药的相关耐药基因检测及耐药机制分析

目的 探讨大肠埃希菌耐喹诺酮类抗菌药的相关耐药基因检测及耐药机制.方法 选取我院尿液等排泄物和分泌物标本中分离出的150株大肠埃希菌株,应用纸片扩散法进行药敏试验,采用PCR技术检测qnr以及aac(6')-Ib-cr质粒基因的表达,并对PCR产物进行DNA测序分析.结果 150株大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药率均超过50％,20株菌检出阳性基因qnrB,qnrS以及aac(6')-Ib-cr的阳性率分别为12.20％、9.76％、13.41％,共有8株菌同时携带超过2种质粒基因,其对喹诺酮类药物均耐药,同时合并有其他类型抗菌药物的耐药情况,12株菌检出单个质粒基因,其中4株对喹诺酮类敏感.结论 大肠埃希菌的耐药情况十分严重,存在qnrB、qnrS、aac(6')-1b-cr流行,并存在两种及多种耐药基因共存于同一细菌中的现象,质粒介导的喹诺酮耐药基因数量与耐药种类数量呈正相关.     

质粒介导的喹诺酮类耐药机制研究进展

质粒介导的喹诺酮类抗菌药物的耐药是近十几年来新发现的一类细菌耐药机制,可在肠杆菌科细菌中水平传播,引起的感染不易控制,导致院内感染大范围流行.本文对质粒介导喹诺酮耐药基因的发现及种类、遗传背景、对喹诺酮类的作用机制及其临床意义等方面进行综述,为研究新型喹诺酮类抗菌药物及抗感染治疗中合理使用氟喹诺酮类抗菌药物提供依据.     

质粒介导的克雷伯菌耐喹诺酮类药物机制研究

目的了解华南地区qnr基因介导的克雷伯菌耐喹诺酮类药物的情况并研究其耐药机制。方法收集临床分离的克雷伯菌株共200株，其中产酸克雷伯菌6株。PCR方法筛查基因，琼脂稀释法测MIC，质粒结合试验，聚合酶链反应（PCR）通用引物扩增各组基因及测序。结果200株细菌中筛查到带qnr基因的菌株共2株（其中产酸克雷伯菌1株），均对环丙沙星敏感。进一步确证实验中证实2菌株都含qnr基因。2菌株经结合实验后在选择平板上都有菌生长，而且对环丙沙星的MIC值均有30倍以上的的提高。2株菌均有gyrA Ser83→Tyr突变，产酸克雷伯菌株有parC Ser80→Ile突变。2株菌质粒PCR扩增的qnr产物测序结果与NCBI中qnr基因比对吻合率达100％。结论华南地区已有质粒介导的耐喹诺酮类菌株存在，它们能够跨种属转移，值得临床医生重视。     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药作用的研究

目的研究铜绿假单胞茵对喹诺酮类药物的耐药性及其机制。方法收集、分离及鉴定从四川大学华西医院分离的27株铜绿假单胞茵,测定5种喹诺酮类药物的最低抑茵浓度（MIC）及碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）对喹诺酮类药物的体外抗茵活性。采用RT—PCR方法扩增铜绿假单胞茵外膜蛋白基因oprM,PCR方法扩增外排蛋白阻遏基因mexR、质粒qnr基因。结果5种喹诺酮类药物中没有一种对27株铜绿假单胞菌完全敏感,均出现了比较高的耐药水平,且具有交叉耐药性。CCCP能使部分耐药 细菌的MIC逆转。耐药菌株oprM基因在RNA水平上表达增加,mexR经DNA测序表明临床分离铜绿假单胞菌主动外排耐药株基因在编码66住氨基酸处发生了碱基突变oqnr基因经PCR扩增后电泳无条带显示,表明没有质粒介导的耐药产生。结论成都地区铜绿假单胞菌临床分离株对5种喹诺酮类药物呈现交叉耐药。主动外排是导致铜绿假单胞菌耐药性的重要因素。     

临床分离铜绿假单胞菌质粒介导的喹诺酮耐药机制研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中PMQR基因及ESBLs的分布情况,并对PMQR阳性菌株中染色体介导的喹诺酮耐药机制进行分析。方法采用琼脂稀释法测定菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性;PCR检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6’)-Ib-cr和qep A,对PMQR阳性菌株扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaPER,同时扩增测序分析染色体基因gyr A、gyr B、par C和par E的突变情况;接合转移试验验证PMQR与bla基因的转移性。结果 106株铜绿假单胞菌中,2株携带qnr S,1株携带qnr D,2株携带aac(6’)-Ib-cr。4株PMQR阳性菌株中有2株接合转移成功,qnr S1和blaTEM-1基因可以通过质粒共同转移。PMQR阳性菌株均在Gyr A亚基和/或Par C亚基存在氨基酸突变,其相应的接合子以及受体菌均未发现突变。结论临床分离的铜绿假单胞菌中存在qnr S、qnr D和aac(6’)-Ib-cr基因,PMQR与bla基因能共同转移,造成多重耐药的传播。     

3株含qnr基因肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的了解临床分离含qnr基因,(质粒介导的喹酮类耐药基因)肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性,NCCLS表型确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定、采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组、OXA-1组、OXA-2组、OXA-10组、PER-1、VEB-1β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-13组、OXA-1组全编码基因引物、I类整合酶基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行PFGE检测。结果3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,其中2株细菌同时产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶、1株同时产生TEM-1和OXA-30型广谱β-内酰胺酶,I类整合酶基因均为阳性;这些菌株对青霉素类、一代、二代、三代头孢菌素(头孢噻肟)以及多种喹诺酮类均显示耐药。3株菌株中有2株的PFGE谱型相同。结论临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌可同时产生CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶,引起多重耐药,并存在克隆传播,临床应加强检测。     

嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶及喹诺酮类耐药基因检测

目的 检测临床分离嗜麦芽寡养单胞菌耐药基因型并分析其与耐药表型的关系,从而为嗜麦芽寡养单胞菌感染的防治提供理论依据和对策.方法 对2005-2008年收集的102株嗜麦芽寡养单胞菌提取全基因组DNA,采用PCR方法检测β-内酰胺酶L1、L2型耐药基因和喹诺酮耐药基因qnr,分析耐药基因与耐药表型的关系.结果 102株嗜麦芽寡养单胞菌对临床常用抗菌药物耐药率以替卡西林/克拉维酸最高达到42.16％,其次为复方磺胺甲基异噁唑29.41％、氯霉素27.45％、头孢他啶22.55％,对米诺环素的耐药率最低11.76％.102株嗜麦芽寡养单胞菌L1基因阳性率76.47％,L2基因阳性率67.65％;其中L1和L2型基因共同阳性率56.86％;头孢他啶及替卡西林/克拉维酸耐药菌株均检测到L1和L2型基因.102株qnrX、qnrY和qnrZ的阳性率都是100％.结论 本地区嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶L1和L2酶检出率较高,喹诺酮耐药基因qnr阳性率达到100％,染色体上Qnr酶单独存在并不会导致对氟喹诺酮类药物高度耐药.     

对喹诺酮的耐药机制

药物的灭活、靶的变化和药物对细胞渗透性的降低都被认为是细菌对抗微生物剂可能的耐药机制。在革兰阳性细菌中,对喹诺酮的耐药机制包括DNA旋转酶的改变和可能的细菌膜渗透性的改变。尚未有报道细菌耐药机制是由于酶降解而导致喹诺酮失活的。也没有证明质粒介导的耐药性发生。Hirai等着重用近年来的发现从分子水平上说明耐喹诺酮的机制。     

肠杆菌科细菌质粒介导的喹诺酮耐药基因研究进展

继首个质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrAl之后,qnrB,qnrS,qnrC和qnrD等其他一些类似基因也相继被发现.另 外,两种质粒介导的喹诺酮耐药机制,即外排泵QepA和OqxAB以及氨基糖苷甲基转移酶Aac(6’)-Ib-cr陆续被报道.本文综述肠杆菌科细菌质粒介导的喹诺酮耐药基因研究进展.     

质粒介导的喹诺酮类的耐药性及其对抗措施

笔者对质粒介导的对喹诺酮类耐药机制的发现、耐药的分子机制、耐药质粒携带相关的整合子/转座子及多重耐药基因、质粒和染色体介导的耐药机制之间的相互作用、质粒介导的喹诺酮类耐药的重要性和细菌耐药性的对抗措施进行综述。     

质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株中超广谱β-内酰胺酶的研究进展

质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因是近年来新发现的细菌耐药机制,研究发现PMQR阳性菌株也往往对大部分β-内酰胺类抗菌药物耐药而表现为多药耐药,最主要的原因是该类细菌产生了能分解绝大多数β-内酰胺类药物的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).PMQR基因阳性菌株中ESBLs的发生率和主要型别在世界各地的报道各不相同,现就质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株中超广谱β-内酰胺酶的基本进展进行综述.