京尼平苷酸对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用及滑膜细胞凋亡机制研究

目的:研究京尼平苷酸(GA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠抗炎作用,探讨GA对AA大鼠滑膜细胞增殖影响的可能凋亡机制.方法:Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,200,100,50 mg·kg~(-1) GA组和0.75 mg·kg~(-1)甲氨蝶呤(MTX)组,右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂后第19天给药,治疗4周,测定足肿胀指标和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)水平.培养AA大鼠滑膜细胞给予GA(1,2,4μmol·L~(-1))和4μmol·L~(-1) MTX处理,MTT法检测细胞增殖,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞率,RT-PCR法检测Bcl-2和Bax基因mRNA表达水平.结果:200,100mg·kg~(-1) GA可以明显降低足肿胀度和关节炎指数(P＜0.05或P＜0.01),肿胀抑制率分别为25.4%,21.37%,并抑制血清中TNF-αIL-1β水平(P＜0.05),TNF-α抑制率为34.61%,28%,IL-1β抑制率为29.05%,21.65%.GA(1～4μmol·L~(-1))处理AA大鼠滑膜细胞5 d,明显抑制细胞增殖.流式细胞仪检测显示1,2,4μmol·L~(-1) GA组凋亡率分别为15.8%,24.3%,40.7%(P＜0.01).RT-PCR结果显示,不同浓度GA明显抑制Bcl-2 mRNA表达,而促进Ba)(mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:京尼平苷酸可抑制AA大鼠继发性炎症,降低血清TNF-α,IL-1β水平,体外可抑制AA大鼠滑膜细胞增殖及诱导细胞凋亡,作用机制与其下调Bcl-2和上调Bax基因mRNA表达有关.     

复方苦参注射液联合表柔比星对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:探究复方苦参注射液、表柔比星及两药联合应用对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为空白对照组、复方苦参注射液60μl/ml组、表柔比星4.6μmol/L组及联合给药(复方苦参注射液60μl/ml+表柔比星4.6μmol/L)组。CCK-8法观察膀胱癌T24细胞增殖,流式细胞术检测膀胱癌T24细胞凋亡,蛋白免疫印迹实验检测膀胱癌T24细胞凋亡关键蛋白的表达情况。结果:与空白对照组相比,复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能显著抑制膀胱癌T24细胞增殖(P<0.01),且联合用药能起到协同增效作用(P<0.01)。复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能显著诱导膀胱癌细胞凋亡(P<0.01),两药联合使用促进凋亡作用更加明显(P<0.01)。复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能下调膀胱癌细胞凋亡相关蛋白pro-Caspase 3和Bcl-2的表达(P<0.05),上调Cleaved PARP、Bax和Cleaved-Caspase 3蛋白的表达(P<0.05),降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05),联合用药作用更加明显(P<0.05)。结论:复方苦参注射液与表柔比星能够抑制膀胱癌细胞增殖,促进膀胱癌细胞凋亡,两药联合应用起到协同增效作用。     

黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的:研究黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:将SW480细胞设为空白对照组、黄芩苷组(浓度分别为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L),采用MTT比色法检测SW480细胞增殖的活性,AO/EB荧光染色观察黄芩苷对SW480细胞凋亡的影响,WesternBlotting法检测凋亡蛋白Bcl-2caspase3以及caspase9表达水平。结果:①黄芩苷对SW480细胞增殖的影响:与空白对照组比较25μmol/L黄芩苷组SW480细胞增殖活性在48、72h均显著下降,50μmol/L、100μmol/L黄芩苷组SW480细胞增殖活性在24、48、72h均显著下降;②黄芩苷对SW480细胞凋亡的影响:25μmol/L黄芩苷组处理后的SW480细胞可见细胞核呈现固缩状或圆珠状的早期凋亡细胞,50μmol/L、100μmol/L黄芩苷组处理后的SW480细胞可见桔红色荧光并呈现出固缩状的晚期凋亡细胞及正常结果并着桔红色荧光的坏死细胞,黄芩苷引起SW480细胞死亡具有量效关系;③黄芩苷对凋亡蛋白Bcl-2caspase3以及caspase9表达水平的影响:与空白对照组比较,25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L黄芩苷组caspase3及caspase9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论:黄芩苷能够有效抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径相关。     

珍珠梅黄酮纳米粒诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌Hep G-2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法观察不同时间(24,48,72h)、不同浓度(50,100,200μmol/L)的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)的增殖抑制作用;利用光学、荧光和透射电子显微镜观察Hep G-2细胞凋亡,并应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 MTT法检测细胞增殖抑制结果显示:不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)均有不同程度的抑制作用,对人肝癌Hep G-2细胞抑制最明显;形态学检测结果显示:珠梅黄酮纳米粒干预Hep G-2细胞48 h后,细胞出现明显的凋亡;流式细胞术检测阴性对照组、5-Fu阳性对照组及不同浓度珍珠梅黄酮纳米粒干预组(50,100μmol/L)凋亡率分别为为4.9%,89.6%,50.0%,86.2%。结论珠梅黄酮纳米粒可以抑制人肝癌Hep G-2生长并诱导其凋亡。     

土荆芥挥发油诱导人肝癌SMMC-7721细胞Caspase依赖性凋亡

目的:探讨土荆芥挥发油对人肝癌SMMC-7721细胞和人正常肝LO2细胞的抑制作用及体外抗肿瘤机制。方法:MTT法检测细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪分析细胞周期;显微镜下观察细胞形态变化及凋亡效应;Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:土荆芥挥发油对细胞增殖的抑制作用均呈浓度和时间依赖性(P0.05),24、48、72 h处理其对SMMC-7721细胞的IC50均小于LO2细胞(P0.05);土荆芥挥发油阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期;形态学观察表明细胞皱缩,粘附性降低;细胞核着橘红色,呈固缩状等晚期凋亡特征;细胞凋亡率呈浓度依赖性升高(P0.05),加入Caspase抑制剂,土荆芥挥发油100μg/m L组晚期凋亡率显著降低(P0.01)。结论:土荆芥挥发油能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,其机制可能与阻滞细胞周期,诱导细胞发生Caspase依赖性凋亡有关。     

木犀草素抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的研究

目的研究木犀草素(Luteolin,Lu)对人胃癌BGC-823细胞增殖的体外抑制作用及其机制。方法 DPPH法测定Lu抗氧化活性;MTT法测定Lu对BGC-823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期分布影响及诱导凋亡的作用;倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果 Lu清除自由基的能力与其浓度呈正相关(r2=0.979);5,10,20,40μmol/L的Lu作用48 h后对BGC-823细胞增殖抑制率分别为5.08%,7.09%,25.27%和53.77%,半数抑制浓度(IC50)为(37.88±5.81)μmol/L;Lu以浓度依赖性阻滞细胞周期在G2/M期,且S期细胞比例呈下降趋势。40μmol/L的Lu作用72 h后,BGC-823细胞凋亡率显著增高(P<0.01);镜下观察发现经Lu处理后细胞固缩并伴随细胞膜破裂的现象。结论 Lu在体外对人胃癌BGC-823细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;抗氧化、改变细胞周期及诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的机制。     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞,分为二甲基亚砜组和槲皮素组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理。培养48 h后,使用流式细胞仪检测2组细胞凋亡情况,运用腺病毒双荧光载体mRFP-GFP-LC3转染技术检测2组人骨肉瘤MG-63细胞自噬情况。另取人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,采用Transwell侵袭小室试验检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素处理后的细胞侵袭能力。结果 与二甲基亚砜组比较,槲皮素组MG-63细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均明显增高(P均<0.05),MG-63活细胞率明显降低(P<0.05),MG-63细胞自噬水平明显上调(P<0.05)。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L槲皮素处理后的穿膜细胞数分别为空白对照组的(86.48±5.02)%,(70.02±4.93)%和(42.87±4.62)%,呈浓度依赖性降低,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 槲皮素可诱导骨肉瘤MG-...     

熊去氧胆酸促进肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞分为0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,各组分别加入0、5、10μmol/L UDCA药液干预24 h。24 h后采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,倒置光学显微镜观察HepG2细胞的数量、形态变化,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率和线粒体下降的膜电位,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA相对表达量,Western blot检测Bcl-2蛋白相对表达水平。结果 与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05),且UDCA药物浓度越高抑制率越强;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞数量减少,细胞脱落变圆,悬浮细胞相对增加;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞凋亡率均增加(P均<0.05),线粒体下降的膜电位均增加(P均<0.05);与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组Hep...     

蛇葡萄素钠诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和对CyclinD1表达的影响

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)对人肝癌HepG2细胞株的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:应用MTT法测定AMP-Na对HepG2细胞的抑制作用,并计算IC50值;流式细胞术检测AMP-Na的诱导凋亡作用和对细胞周期的影响;实时荧光定量PCR检测AMP-Na对HepG2细胞CyclinD1基因mRNA的表达影响。结果:MTT检测结果表明,AMP-Na显著抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应,药物作用24h、48h、72h IC50值分别为226μg/ml、67μg/ml和34μg/ml。流式细胞仪检测表明100μg/ml AMP-Na作用于细胞48 h、72 h凋亡率分别为31.9%、34.0%;可使G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,有明显的G1期阻滞作用;实时荧光定量PCR检测AMP-Na 100μg/ml作用HepG2细胞48 h、72 h后,用药组CyclinD1 mRNA表达分别是对照组的0.551和0.524倍,二者均有显著性差异(P0.05)。结论:AMP-Na对肝癌HepG2细胞有抗肿瘤效果,其机理可能通过降低细胞周期调节关键的CyclinD1的表达,使细胞停滞于G1期,诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

MTT法检测没食子酸对两种细胞的体外毒性

目的:探讨抗肿瘤单体没食子酸(GA)对体外培养的正常人肝细胞株LO2和肝癌细胞株SMMC-7721的毒性。方法:采用MTT实验分析GA对LO2和SMMC-7721的增殖抑制作用。结果:GA作用24h、48h、72h后,用药组均出现了不同程度的增殖抑制。结论:抗肿瘤单体GA对LO2和SMMC-7721细胞均有一定的毒性,表现为增殖抑制作用,作用早期(24h)对LO2的抑制大于对SMMC-7721的抑制,连续作用后(48h、72h),对SMMC-7721细胞的损伤明显超过对LO2的抑制。     

桑皮素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨桑皮素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及其凋亡诱导作用。方法用10、15、20μmol/L桑皮素作用Hela细胞24 h后,在扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜下观察细胞形态学变化;利用MTT法检测桑皮素对Hela细胞的增殖的影响;应用Hoechst单染实验检测Hela细胞的凋亡情况;采用qRT⁃PCR和Western blot检测Bax、Bcl⁃2 mRNA及蛋白的表达。结果桑皮素(2.5、5、7.5、10、15、20、25μmol/L)处理Hela细胞24、48 h,能明显的抑制Hela细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。桑皮素(10、15、20μmol/L)处理Hela细胞24 h,细胞呈现早期凋亡。与0μmol/L桑皮素组比较,桑皮素(10、15、20μmol/L)能显著上调Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05),下调Bcl⁃2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论桑皮素通过上调Bax表达和下调Bcl⁃2表达,从而诱导Hela细胞发生凋亡。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷体外诱导NB4-R1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨葛根总黄酮联合三氧化二砷(As2O3)对维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖及凋亡的影响。方法:采用葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)联合As2O3(1μmol/L)处理NB4-R1细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果:(1)一定浓度葛根总黄酮对NB4-R1细胞生长有抑制效应,呈剂量和时间依赖性,相同条件下,葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3对NB-R1细胞抗增殖作用强于单用葛根总黄酮,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)及葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3处理NB4-R1细胞48 h后,早期凋亡率呈浓度依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)瑞氏染色,在光镜下观察到葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,且联用组较单药组明显。(4)流式细胞术检测细胞周期变化发现葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用可影响细胞进程,表现为S期细胞增多,葛根总黄酮+As2O3联用组比各单用葛根总黄酮组Sub-G1增加更为明显。(5)Western blottimg结果显示葛根总黄酮可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2表达。结论:低浓度葛根总黄酮体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μmol/L As2O3具有协同作用;其诱导凋亡作用机制可能为阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK通路。     

茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖作用的影响

目的研究茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法测定茶氨酸不同浓度不同时间对Hela细胞增殖活性的影响;荧光显微镜观察Hela细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果茶氨酸对Hela细胞具有显著增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;荧光显微镜观察发现茶氨酸处理组的Hela细胞有典型的凋亡特征;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,茶氨酸处理后的Hela细胞的凋亡率显著增加(P<0.01)。结论茶氨酸对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用,且其与诱导Hela细胞凋亡有关。     

小檗碱对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗碱对胃癌细胞系SGC7901的抑制作用及相关机制。方法:采用MTT的方法观察不同浓度小檗碱对SGC7901细胞的24h和48h抑制率,并计算24h和48h的50%抑制浓度(IC50)值;采用流式细胞技术检测不同浓度小檗碱作用48h后胃癌细胞系SGC7901凋亡的发生率和细胞周期的变化。结果:小檗碱对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用呈现出时间和剂量依赖性。24h和48h IC50分别为74.16、36.84μmol/L。1μmol/L至120μmol/L浓度梯度的小檗碱干预48h后,SGC7901凋亡率发生率逐渐增加。其中5、10、25、50、75、120μmol/L与对照组比较有统计学差异(P0.05),120μmol/L时凋亡发生率达到35.43%;5、25、75μmol/L浓度的小檗碱作用后,SGC7901胃癌细胞G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P0.05),而S期细胞比例则随浓度增加呈现出下降趋势,其中25、75μmol/L浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),对G2/M期细胞,各组比例变化无明显差别。结论:小檗碱对胃癌细胞系SGC7901具有时间和浓度依赖性的抑制作用,抑制作用与阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制DNA合成和诱导凋亡有关。     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

姜黄素对血管瘤内皮细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的调控

目的:研究姜黄素对血管瘤内皮细胞凋亡的影响。方法:在培养液体系中加入不同浓度的姜黄素进行不同时间长度的诱导,以MTT法检测细胞增殖,流式细胞术,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blotting分析Bcl-2和Caspase-9蛋白表达。结果:1～50μmol/姜黄素均能抑制血管瘤内皮细胞增殖。5、10、50μmol/L姜黄素作用细胞4天后的凋亡率分别为(11.98±2.13)%、(17.96±1.25)%、(26.86±2.08)%,与对照组(4.03±1.16)%比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。姜黄素浓度越高,诱导凋亡作用越明显,呈明显的剂量依赖效应。50μmol/L姜黄素作用细胞1、2、3、4天后的凋亡率分别为(6.93±1.06)%、(10.15±1.35)%、(17.21±2.06)%、(26.83±2.02)%,与对照组(3.98±1.03)%比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。姜黄素作用时间越长,抑制血管瘤内皮细胞增殖作用和诱导凋亡的作用也越明显,呈明显的时间依赖效应。同时姜黄素浓度越大、作用时间越长,血管瘤内皮细胞细胞中Bcl-2蛋白的表达明显减少,而Caspase-9蛋白的表达明显增加。结论:姜黄素能够抑制血管瘤内皮细胞增殖、诱导血管瘤内皮细胞发生凋亡,并呈时间和剂量依赖效应,可能是通过下调凋亡抑制基因bcl-2表达,上调Caspase-9表达而实现的。     

慈菇消脂丸含药血清对非酒精性脂肪肝细胞模型Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响

目的探讨慈菇消脂丸含药血清对游离脂肪酸(FFA)混合物诱导的HepG2细胞非酒精性脂肪肝病模型凋亡相关蛋白Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响。方法以HepG2细胞为研究对象,实验随机分为正常组(10%胎牛血清),模型组(500μmol/L FFA),中药低、中、高剂量组(500μmol/L FFA+2%、4%、6%含药血清),阳性药组(500μmol/L FFA+20μmol/L SP600125)。实验时间为24 h,实验结束后,用油红O染色镜下观察细胞浆内变化。流式细胞术检测细胞凋亡率。实时荧光定量PCR和Western Blot法检测Caspase-8、FasL、pc-Jun mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞凋亡率增加(P<0.01),Caspase-8、FasL、p-c-Jun蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组及阳性药组细胞凋亡率均下降(P<0.05),除中药低剂量组对FasL蛋白表达及中药中剂量组对Fasl mRNA表达无影响外,其余各组Caspase-8、FasL、p-c-Jun mRNA及Caspase-8、p-c-Jun蛋白表达均下降(P<0.05)。结论慈菇消脂丸可以改善HepG2细胞脂肪变及凋亡,与下调Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达相关。     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3 细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。