四逆汤类方不同工艺及配伍提取物对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:观察四逆汤类方不同工艺、不同配伍提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:采用小鼠脾淋巴细胞为实验模型,MTT比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性。结果:与对照组比较,四逆汤类方乙醚提取物均有刺激脾淋巴细胞增殖的作用,与FGC1(四逆汤)组比较,FGR1(人参四逆汤)组作用显著低于FGC1组,四逆汤类方的乙醚提取物样品中,四逆汤的活性最强。四逆汤类方的氯仿提取物中,除FGB2(白通汤)组外,其它各组均无刺激脾淋巴细胞增殖的作用。四逆汤类方的水提取物,FGC3(四逆汤)和FGB3(白通汤)组有刺激脾淋巴细胞增殖作用。结论:四逆汤类方乙醚、氯仿和水提取物能刺激淋巴细胞增殖活性,醚提乙取物的活性较强,四逆汤类方的乙醚提取物样品中,四逆汤的活性最强。     

附子和硫磺及其配伍对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠肾功能影响分析

目的:研究附子和硫磺及其配伍干姜对腺嘌呤所致小鼠慢性肾衰的疗效。方法:将雄性小鼠随机分为对照组(C)、模型组(M)、硫磺附子组(SF)、附子干姜组(FG)和硫磺附子干姜组(SFG)。后4组小鼠隔天灌胃给予腺嘌呤持续4周,给药组从第2周起灌胃给予相应药物即硫磺、附子和附子干姜水煎剂。记录小鼠一般情况,测定小鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、肾组织谷胱甘肽(GSH)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、丙二醛(MDA)含量。结果:SF组、FG组和SFG组小鼠生化指标有一定改善,血清肌酐、尿素氮降低,肾组织GSH降低,MDA和γ-GT升高,其中SFG组小鼠各指标最接近于对照组。结论:附子和硫磺配伍干姜后对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠肾功能有显著改善作用。     

四逆汤及不同组方配伍对大鼠心肌缺血影响的对比研究

目的研究四逆汤及其不同组方配伍对垂体后叶素(Pit)所致大鼠心肌缺血模型的影响。方法建立大鼠心肌缺血模型,观察四逆汤、附子甘草合煎液、附子干姜合煎液、甘草干姜合煎液、附子单煎液、干姜单煎液、甘草单煎液对大鼠心肌梗死范围、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸的影响。结果四逆汤组、附子甘草组、附子干姜组、附子组能显著减少心肌梗死范围(P0.01)、减少心肌MDA、乳酸释放(P0.05、0.01)、降低血清LDH、CK、AST水平(P0.05、0.01);四逆汤组、附子干姜组能提高心肌SOD活性(P0.05);四逆汤组能显著提高心肌GSH-Px活性(P0.01);四逆汤组在心肌LDH水平上低于附子组(P0.05)。结论对大鼠缺血心肌的保护程度依次为四逆汤组附子干姜组附子甘草组附子组,从药效的角度揭示了四逆汤配伍的科学性,体现了四逆汤遣方用药之精准。     

四逆汤提取物对家免血管内皮细胞释放PGI2的影响

目的:观察四逆汤及配伍药提取物对内皮细胞释放PGI2的影响:。方法采用家兔血管内皮细胞培养1,25I标记6-酮-PGF1α浓度的放射免疫方法,在低氧条件下,测定内皮细胞释放的前列环素代谢产物6-酮-PGF1α(6-keto-PGF1α)的含量。结果:与对照组比较,四逆汤、附子、甘草、干姜、附子配甘草、附子配干姜提取物12.5μg/ml和25μg/ml均能显著提高6-keto-PGF1α的含量,除甘草25μg/ml剂量组和附子配干姜组外,其它组6-keto-PGF1α的含量显著低于四逆汤组。单体提取物在10μg/ml剂量,与附子配伍的干姜单体中附子+5-羟基-1-(3-甲氧基4-羟基苯基)癸酮-3、附子+5-羟基-1-(3-甲氧基苯基)癸酮-3组作用较强。与干姜配伍的附子单体中干姜+苯甲酰中乌头碱、干姜+总脂肪酸酯生物碱组作用显著。结论:在病理状态下,四逆汤及配伍药提取物对内皮细胞释放PGI2表现出良好的配伍增效关系,与干姜有协同增效作用成分是从附子中提取的苯甲酰中乌头碱和总脂肪酸酯生物碱,与附子有协同作用的成分是从干姜中提取癸烷和癸酮。揭示了四逆汤配伍规律的药效作用物质基础。     

附子不同配伍对SD正常大鼠和阳虚模型大鼠心脏毒性作用的实验研究

目的:在前期研究的基础上,选用附子的经典配伍药对(附子配伍干姜、附子配伍白芍)研究其对SD正常大鼠和阳虚模型大鼠心脏毒性作用的差异,以期为中医辨证毒理学假说提供一定的理论支持。方法:64只大鼠随机分为8组,空白对照组(A组),阳虚模型组(B组),附子给药组(C组),附子模型给药组(D组),附子芍药给药组(E组),附子芍药模型给药组(F组),附子干姜给药组(G组),附子干姜模型给药组(H组)每组8只,观察用药前后各组大鼠一般状态、体重、心脏系数及相关生化指标、病理学改变的影响,比较各组之间大鼠毒性反应的不同。结果:正常大鼠肌注醋酸泼尼松后均出现心脏毒性反应,造模成功。阳虚模型大鼠给药后附子给药组、附子干姜给药组毒性反应降低,且附子干姜配伍优于附子单独给药;附子白芍给药组LDH、CK含量仍高于空白对照组。结论:不同证候的动物模型附子的毒性反应存在差异,附子药物的毒性与证候以及配伍密切相关。     

海木氯仿提取物对糖尿病小鼠血糖血脂的影响

目的研究海木氯仿提取物的降血糖、降血脂作用。方法采用腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型。检测小鼠血糖(GLU)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性等生化指标。结果与空白对照组比较,低、中、高剂量海木氯仿提取物组的GLU、TC、TG、LDL-C含量显著降低、HDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01);中、高剂量组的血清SOD活性显著提高、MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论海木氯仿提取物对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠具有显著的降血糖、降血脂作用。     

附子与干姜不同比例配伍对急性心衰大鼠神经激素释放的影响

目的考察附子干姜不同比例配伍前后对急性心衰大鼠神经激素释放的影响。方法建立戊巴比妥钠致大鼠急性心衰动物模型,用ELISA法测定急性心衰大鼠血浆氨基末端脑钠肽原(NT-pro BNP)、心钠素(ANP)、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)含量。结果附子干姜配伍后均可降低急性心衰大鼠血浆NT-pro BNP、心钠素(ANP)、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的含量,其中附子干姜配伍后作用明显优于附子组,尤以附子干姜1∶1组作用最强。结论附子干姜配伍能够调控急性心衰大鼠部分神经激素的释放,从而延缓急性心衰的发展。     

黄芪莪术配伍药物血清对胃癌MKN45细胞增殖和分化的影响

目的:观察黄芪、莪术配伍药物血清对人胃癌细胞株MKN45增殖和分化的影响,比较中药配伍和单味药应用的不同,为益气活血方法治疗胃癌提供实验依据。方法:通过中药血清药理学方法制备黄芪、莪术配伍药物血清,采用MTT法检测药物血清对MKN45细胞的增殖抑制率;酶标仪测定分化标志酶AKP、LDH的活性。结果:MTT法实验中,莪术组作用48h后对细胞的抑制作用与正常组相比有显著意义(P<0.01),作用72h,莪术组、配伍组对细胞增殖仍有抑制作用,与正常组相比有显著意义(P<0.01),且配伍组在24h、48h、72h均对MKN45细胞增殖维持稳定的抑制率。通过酶标仪检测,配伍组作用的MKN45细胞AKP、LDH活性表达均明显降低,与正常组相比有显著意义(P<0.05),配伍组与黄芪组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪、莪术配伍药物血清能够抑制胃癌MKN45细胞增殖并诱导其分化,与单味药应用相比具有增效、疗效稳定优势,提示益气活血法是中医药治疗胃癌的有效治则治法。     

四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法：培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg／mL的四逆汤类方提取物预处理，进行缺氧／复氧损伤后，比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：与对照组比较，附子、干姜配葱白提取物(EAGO)，附子、干姜配甘草提取物(EAGL)，附子、干姜配胆汁提取物(EAGB)，附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性，与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异。EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性，与EAG组比较差异显著。EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量，与FAG组比较差异显著。结论：四逆汤类方均可以提高缺氧／复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性，降低上清液中乳酸脱氢酶活性。四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用。提示四逆汤类方对缺氧／复氧损伤的心肌细胞均有保护作用。     

干姜与附子配伍减毒的物质基础探讨

目的探讨干姜与附子共煎减小附子毒性的有效部位及其机理。方法取干姜的水提物及醋酸乙酯、氯仿和石油醚的提取物分别与附子共煎,取各种煎液进行小鼠口服给药的急性毒性实验及用HPLC法测定煎液中乌头碱,次乌头碱的含量。结果干姜与附子合煎有减小附子毒性的作用,但共煎液中的乌头碱含量增加,次乌头碱含量减小。干姜的氯仿提取物及石油醚提取物与附子共煎可明显减小附子的毒性,同时煎液中乌头碱含量明显减小。尤其是石油醚提取物同时使次乌头碱的煎出量也明显减小。干姜的醋酸乙酯提取物与附子共煎,可明显减小附子的毒性,但煎液中的乌头碱、次乌头碱含量均增加。干姜的水提物与附子共煎毒性略增大,乌头碱与次乌头碱的煎出量略有增加。结论干姜与附子共煎有减轻附子毒性作用。干姜中的氯仿、石油醚提取物可能通过减少乌头碱等有毒物质的煎出量而减小附子的毒性,干姜中的醋酸乙酯提取物可能具有同附子中的有毒生物碱发生某种结合而抑制其吸收的作用,也可能具有吸收后在体内发挥拮抗附子所含有毒生物碱毒性作用。     

BrdU-ELISA法测定四逆汤及组方药提取物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察四逆汤(SNT)及组方药提取物对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法和Brdu—ELISA法观察药物对离体大鼠VSMC增殖的影响。结果 BrdU—ELISA法结果表明四逆汤总提取物(EST)对VSMC的BrdU掺入DNA没有显著影响，而MTT测定表明：EST可以提高VSMC的脱氢酶活性。甘草(LE)、附子(AE)、干姜(GE)、甘草加附子(LAE)、干姜加附子(AGE)提取物显著提高VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。结论 EST可以增加VSMC的脱氢酶活性，但对VSMC的BrdU掺入DNA的水平无影响。而其他组方药提取物可以增加VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。     

基于析因设计探讨附子与人参、黄芪、干姜的交互关系

目的：考察中药附子、人参、黄芪、干姜干预阿霉素（ADR）心脏毒性损伤模型大鼠的效应机制,分析附子与人参、黄芪、干姜的交互关系。方法：将72 只大鼠随机分为9 组,每组8 只。除正常组外,各组大鼠按2.5 mg·kg-1 体重剂量腹腔注射阿霉素,每周1 次,连续4 周,累计10 mg·kg-1。附子、干姜组按1.75 g·kg-1,人参、黄芪组按0.875 g·kg-1,参附、芪附组按2.625 g·kg-1,姜附组按3.5 g·kg-1 体重剂量灌胃水煎液,每日1 次,连续4 周。测定超氧化物歧化酶（SOD）,肌钙蛋白（CTn）、细胞色素C（CytC）,心肌线粒体Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 等指标,关联密切指标计算综合评分,对各项指标及综合指标进行药物组间单因素方差分析及药物间交互作用分析的析因设计方差分析。结果：模型组与正常组比较,各项指标差异均有统计学意义（P<0.05）。附子、人参、黄芪、干姜对各项指标均有不同程度影响,附子与人参、黄芪、干姜的交互作用（除Bax 外）均有统计学意义。结论：中药附子、人参、黄芪、干姜对ADR 模型大鼠心脏均具有一定的保护作用,附子与人参、黄芪、干姜配伍均能提升单一用药的效果。     

附子及附子、干姜配伍对H2O2导致心肌细胞损伤的抗氧化作用

目的 观察附子及附子、干姜配伍对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化作用.方法 取1～3 d乳鼠的心肌细胞,常规培养,观察心肌细胞形态学,以免疫组化进行心肌细胞纯度鉴定.实验分为对照组、模型组、附子水煎液组20 mg/mL,附子干姜水煎液组20 mg/mL,预处理2h后,用1 mmol/LH2O2氧化损伤2h,检测培养液中心肌细胞跳动频率,丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）活性.结果 与模型组相比,用附子水煎液和附子干姜水煎液预处理后的心肌细胞跳动频率增加（P＜0.01）,附子干姜水煎液组SOD活性明显提高（P＜0.01）.结论 附子干姜水煎液对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有一定的保护作用.     

四逆汤及其组分配伍对心力衰竭大鼠血流动力学的影响

目的研究四逆汤及其组分配伍对心力衰竭（HF）大鼠血流动力学的影响.方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、地高辛组、四逆汤组、附子组、附子配干姜组和附子配甘草组,采用尾静脉注射盐酸阿霉素（4 mg/kg）法建立HF大鼠模型,造模当天开始灌胃给药,连续给药12 d,然后采用导管法检测大鼠心率、左室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压力（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）和左心室内压最大下降速率（-dp/dtmin）.结果与正常组比较,模型组心率、LVSP、＋dp/dtmax、-dp/dtmin均明显下降（P＜0.01）;与模型组比较,地高辛组、四逆汤组、附子配干姜组和附子配甘草组大鼠心率均显著增快（P＜0.05或P＜0.01）,地高辛组、四逆汤组LVSP、＋dp/dtmax、-dp/dtmin明显增加（P＜0.05或P＜0.01）,附子配干姜组LVSP和＋dp/dtmax明显提高（P＜0.05或P＜0.01）.结论附子配伍干姜、甘草后能够部分改善心衰大鼠的心功能,四逆汤全方对HF大鼠血流动力学指标的改善作用最全面.     

郑钦安“阴盛格阳”论学术思想发挥

阴盛格阳,清代名医郑钦安先生认为是阴盛阳衰或脱阳证,针对真阳衰微、阴邪内盛之病理,治疗上善于抓住阳虚证的本质,针对阳虚之上、中、下的不同,采用扶阳药物而重用大辛大热之药姜、桂、附等。     

附子干姜配伍对阿霉素致大鼠慢性心衰的治疗作用

目的 观察附子于姜配伍治疗阿霉素（ADR）致慢性心衰的作用,并探讨其作用机理.方法 采用盐酸ADR腹腔注射方法,建立慢性心力衰竭大鼠模型,将SD大鼠随机分为6组：对照组,模型组,附子高、低剂量组（3.3,1.65 g/kg）,附子干姜（1∶1）高、低剂量组（6.7,3.3 g/kg）.采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中去甲肾上腺素（NE）、内皮素-1（ET-1）和心脏组织中Na^＋-K^＋-ATPase的活性,运用蛋白免疫印迹杂交法（Western Blot）检测心脏组织蛋白Junctophilin-2 （JP2）的蛋白表达.结果 与模型组比较,附子和附子干姜配伍血清中NE及ET-1含量显著降低,心脏组织中Na^＋-K^＋-ATPase含量及JP2的蛋白表达显著升高,其中附子干姜（1∶1）高剂量组作用更显著（P＜0.01）.结论 附子与附子干姜（1∶1）配伍对ADR致慢性心衰的作用,可能与其增加心脏组织Na^＋-K^＋-ATPase活性,上调Junctophilin-2 （JP2）的蛋白表达有关.     

低氧条件下四逆汤及组方药提取物对大鼠血管内皮细胞释放PGI2,TXA2和NO的影响

目的 :观察四逆汤提取物 (DRE)及其组方药提取物对低氧条件下大鼠血管内皮细胞释放血栓素A₂(TXA₂ )、前列环素 (PGI₂ )和一氧化氮 (NO)的影响。方法 :低氧处理的大鼠血管内皮细胞经四逆汤及其组方药提取物作用后 ,取条件培养液 ,采用放射免疫法及Griess反应测定培养液中的PGI₂ ,TXA₂ 和NO的代谢产物 6 酮 前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α) ,血栓素B₂ (TXB₂ )及亚硝酸盐 (NO₂ -)含量。结果 :与对照组比较 ,DRE、甘草提取物 (LE)、干姜提取物 (GE)、附子提取物 (AE)、甘草加附子提取物 (ALE)、干姜加附子提取物 (AGE)可以显著增加低氧处理的大鼠血管内皮细胞培养液中 6-keto-PGF_1α的含量及 6-keto-PGF_1α/TXB₂ 的比值 ,但对TXB₂ 的含量没有显著影响。DRE组对 6-keto-PGF_1α含量的影响显著高于LE ,GE ,AE ,ALE ,AGE组。DRE组对 6-keto-PGF_1α/TXB₂ 比值的影响显著高于GE ,AE ,ALE组。与对照组比较 ,DRE ,LE ,GE ,AE ,AGE ,ALE组显著提高血管内皮细胞培养液中NO₂^-的含量。DRE的药理作用显著高于GE ,AE ,ALE组。结论 :四逆汤提取物增加低氧处理的大鼠血管内皮细胞培养液中NO ,PGI₂含量及PGI₂ /TXA₂ 的比值。四逆汤提取物的药理作用强于组方药提取物。     

五种中药与附子配伍前后有效成分含量的变化

目的：研究白芍、人参、干姜、甘草、大黄与附子各炮制品配伍前后有效成分含量的变化。方法：以芍药苷、人参皂苷、辣椒素、甘草酸单铵盐、大黄素为对照品,采用HPLC法测定,对比白芍、人参、干姜、甘草、大黄与附子配伍前后其有效成分的含量变化。结果：配伍后诸药有效成分含量明显低于药材单煎液。结论：附子与白芍、人参、干姜、甘草、大黄配伍后,附子毒性降低,与其配伍的五味中药药材中的有效成分亦有变化。     

五种中药与附子配伍前后有效成分含量的变化

目的：研究白芍、人参、干姜、甘草、大黄与附予各炮制品配伍前后有效成分含量的变化。方法：以芍药苷、人参皂苷、辣椒素、甘草酸单铵盐、大黄素为对照品，采用HPLC法测定，对比白芍、人参、干姜、甘草、大黄与附子配伍前后其有效成分的含量变化。结果：配伍后诸药有效成分含量明显低于药材单煎液。结论：附子与白芍、人参、干姜、甘草、大黄配伍后，附子毒性降低，与其配伍的五味中药药材中的有效成分亦有变化。