金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠IFN-α表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠干扰素-α(IFN-α)表达的影响.方法:将BALB/c小鼠按RSV首次滴鼻至取标本时间分为三大组,每大组分别在RSV首次滴鼻后24,72,144 h后取支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法检测BALF中所含IFN-α浓度,观察金欣口服液对IFN-α表达的影响,利巴韦林为阳性对照.结果:RSV感染24 h后小鼠BALF中IFN-α的表达显著增高,其中金欣预防组(385.38±16.54) ng·L-1能上调IFN-α的表达(P＜0.01);RSV感染72 h后小鼠BALF中IFN-α上调作用仍较显著,但是较之于24 h时IFN-α的表达明显有所下降,其中金欣治疗组(131.41±6.96)ng·L-1和金欣预防组(32.83 ±4.77) ng·L-1组均能上调IFN-α的表达(P＜0.01),且金欣治疗组上调作用更为明显(P ＜0.01);RSV感染144 h后小鼠BALF中IFN-α的表达量显著减少(P＜0.01),金欣治疗组(14.21 0.80) ng·L-1下调IFN-α表达(P＜0.01).结论:在RSV感染早期,金欣口服液预防组和治疗组能显著上调BALB/c小鼠IFN-α的表达;随着感染时间延长,IFN-α表达下降,金欣口服液能进一步下调其表达水平,以促进机体恢复.     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用

目的通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达。结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4﹑TAK1蛋白表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4﹑TAK1表达明显下调(P<0.01);金欣组蛋白表达量最低,与利巴韦林组相比,P<0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P<0.01。结论金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠RIG-I信号传导通路的影响

目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中RIG-I信号传导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液灌胃给药进行干预,于首次滴鼻后24 h、72 h、144 h取各组小鼠肺组织,Real time RT-PCR分别检测RSV-M、RIG-I、IPS-I和IFN-β在mRNA水平的表达情况,Western Blot检测RIG-I和IPS-I在蛋白水平上的表达情况。结果:RSV感染24 h和72 h后,其肺组织中RIG-I、IPS-I和IFN-β的表达均较正常组显著升高,金欣口服液不同剂量组RIG-I、IPS-I和IFN-β表达较RSV组明显下调;144 h后,RIG-I、IPS-I和IFN-β表达量显著下调,金欣口服液不同剂量组能上调RIG-I、IPS-I和IFN-β的低表达。结论:RSV能诱导RIG-1信号传导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而金欣口服液能通过调控RIG-1信号通路从而调节IFN-β的表达。     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用

目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制。方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化;激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平;ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制。结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P0.01,P0.05),且效果优于利巴韦林组(P0.01,P0.05)。结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

白藜芦醇对RSV感染BALB/c小鼠肺泡灌洗液TNF-α,IL-1β,IL-6表达的调控趋势

目的:研究白藜芦醇(Res)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠肺泡灌洗液(BALF)不同时间点肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)表达的调控趋势。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,白藜芦醇灌胃给药进行干预,并于首次滴鼻后24,72,144 h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测其中TNF-α,IL-1β,IL-6含量变化及Res的干预效果。结果:RSV感染BALB/c小鼠24 h后,BALF中TNF-α,IL-1β,IL-6表达较正常组均明显升高(P<0.01),而Res组TNF-α(P<0.01),IL-1β(P<0.05),IL-6(P<0.01)表达较RSV组明显下调;RSV感染BALB/c小鼠72 h后,BALF中TNF-α(P<0.05),IL-1β(P<0.01),IL-6(P<0.01)表达较正常组高,但TNF-α,IL-1β,IL-6总体表达量较24 h组下降趋势明显,Res组IL-1β,IL-6表达较RSV感染组降低(P<0.05),而TNF-α表达与RSV感染组比较无显著性差异;RSV感染BALB/c小鼠144 h后,BALF中IL-1β(P<0.01),IL-6(P<0.05)表达较正常组高,而TNF-α表达较正常组无差异,Res组TNF-α,IL-1β,IL-6表达与RSV感染组比较无显著性差异。结论:白藜芦醇能显著抑制RSV感染BALB/c小鼠早期肺泡灌洗液内炎性细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的过度表达,且随着感染时间的延长,能使TNF-α,IL-1β,IL-6的表达维持在相对较低的水平。     

金欣口服液对RSV感染大鼠Ⅰ型干扰素及SOCS1/3表达的影响

目的:通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3(suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3)蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制。方法:SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组(3.3,9.9,29.7 g·kg~(-1)),预防组(提前2 d ig金欣口服液中剂量),利巴韦林组(24.5 g·kg~(-1)),每组10只,除正常组外,滴鼻感染24 h造模,给药组每天给药2次,连续给药3 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量明显升高(P0.05,P0.01),模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组(P0.05),预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组(P0.01),金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组(P0.05),金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组(P0.05),金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组(P0.05),金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组(P0.01)。结论:金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠Ⅰ型干扰素(IFN)-α/β表达的影响。方法:采用细胞培养、动物实验、ELISA(酶标记免疫吸附测定)法检测大鼠体内IFN-I表达量的变化。结果:金欣口服液预防组和中剂量组IFN-α表达量高于模型组(P<0.05);金欣口服液高、中剂量组IFN-β表达量高于模型组(P<0.05)。结论:金欣口服液抗RSV的机制可能与其通过上调RSV感染宿主体内Ⅰ型干扰素的表达,从而发挥Ⅰ型干扰素的抗病毒效应有关。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1表达的调控作用

目的研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1不同时间点的表达趋势的调控作用。方法 75只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组和金欣等效剂量组,每组15只。每组分干预方式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,每种干预方式5只小鼠。RSV滴鼻感染BALB/c小鼠制备动物模型,予相应干预方式处理后处死取肺组织。Real time PCR分别检测RSV-M、SOCS1和IFN-β在mRNA水平的表达情况,并采用Western blotting检测SOCS1在蛋白水平上的表达情况。结果与正常组比较,模型组干预方式Ⅰ、ⅡSOCS1、IFN-βmRNA表达及SOCS1蛋白表达升高(P<0.01),干预方式Ⅲ时IFN-βmRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,金欣高、等效剂量组3种干预方式RSV-M mRNA表达均降低(均P<0.01),金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅲ及金欣等效剂量3种干预方式SOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅱ及金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),而金欣高剂量组和等效剂量组干预方式ⅢIFN-βmRNA的表达升高(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ及金欣等效剂量组的3种干预方式SOCS1蛋白表达明显降低,金欣高剂量组干预方式ⅢSOCS1蛋白表达升高。与金欣高剂量组比较,金欣等效剂量组干预方式Ⅰ、ⅡRSVM mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠSOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),但干预方式Ⅱ、ⅢIFN-βmRNA的表达升高(均P<0.01);金欣等效剂量组3种干预方式SOCS1蛋白表达降低。结论金欣口服液等效剂量组在不同时间点均能抑制RSV感染BALB/c小鼠肺组织中SOCS1的表达,该调控作用可能与促进Ⅰ型干扰素表达从而发挥抗RSV作用有一定关系。     

金欣浓缩液保留灌肠对呼吸道合胞病毒感染模型大鼠TNF-α、SIgA的影响

目的探讨中药复方金欣浓缩液保留灌肠治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制。方法将56只SD大鼠随机分为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量组及预先给药组,利巴韦林组,每组8只。金欣高、中、低剂量组在大鼠RSV滴鼻3天后分别以0.50g/ml、0.99g/ml、1.98g/ml保留灌肠给药30min,利巴韦林组予以利巴韦林颗粒剂(1g/ml)灌胃。预先给药组在大鼠RSV滴鼻第1天的同时保留灌肠,剂量及操作方法均同金欣中剂量组。各组均每天给药2次,每次1ml/100g,预先给药组连续给药10天,其余各组连续给药7天。测定各组大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)及支气管肺泡灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的含量。结果与模型组及金欣低剂量组相比,预先给药组、金欣中剂量组TNF-α水平显著增高(P<0.05或P<0.01);金欣各用药组和利巴韦林组TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组及利巴韦林组相比,预先给药组及金欣高、中剂量组的SIgA含量均显著增高(P<0.01);金欣高剂量组SIgA含量亦明显高于预先给药组及金欣中、低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论金欣浓缩液保留灌肠后可能通过增加RSV感染幼年SD模型大鼠的TNF-α、SIgA的分泌量,发挥抗病毒作用,且存在一定的量效关系。     

金欣口服液对RSV感染大鼠I型干扰素及SOCS1/3表达的影响

目的：通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3（suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3）蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制。方法：SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组（3.3,9.9,29.7g·kg^-1）,预防组（提前2dig金欣口服液中剂量）,利巴韦林组（24.5g·kg^-1）,每组10只,除正常组外,滴鼻感染24h造模,给药组每天给药2次,连续给药3d。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测RSV感染大鼠体内I型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量的变化,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理学变化。结果：与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量明显升高（P<0.05,P<0.01）,模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组（P<0.05）,预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.01）,金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组（P<0.05）,金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组（P<0.01）。结论：金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内I型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

金欣口服液对RSV肺炎尿液代谢物的影响

目的探讨金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的可能作用机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分为正常组、RSV肺炎模型组、金欣口服液组,每组16只。RSV肺炎模型组和金欣口服液组小鼠用RSV悬液滴鼻感染小鼠建立RSV肺炎模型。金欣口服液组予金欣口服液27.6 g/(kg·d)灌胃,正常组和RSV肺炎模型组小鼠给予等量的生理盐水灌胃。连续灌胃至第4天每组处死5只小鼠进行病理学检查,其他小鼠于第6天分别收集尿液,运用GC-MS检测尿液中所含有的代谢物及其相对含量的变化。结果RSV肺炎模型组小鼠肺脏可见间质多灶性炎性浸润,肺泡壁轻度充血,明显增厚。金欣口服液组小鼠肺部炎症较RSV肺炎模型组小鼠肺部炎症明显减轻。RSV肺炎小鼠的尿液中共测得38种代谢产物,其中乳酸、甘氨酸、棕榈酸、硬脂酸为差异性代谢产物,RSV肺炎模型组乳酸、甘氨酸、硬脂酸、棕榈酸相对含量明显高于正常组和金欣口服液组(P0.05)。结论金欣口服液可能通过调节体内能量代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢治疗RSV肺炎。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎大鼠模型TNF-α、分泌型IgA的影响

目的：探讨中药复方金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎模型幼年大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的影响。方法：将56只幼年大鼠随机分为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量组及预先给药组,西药利巴韦林组,共7组。RSV滴鼻3天后灌胃给药,连续用药7天后处死。ELISA法测定各组大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的水平。结果：模型各组血清TNF-a及黏膜SIgA的含量表达水平均高于正常组（P〈0.01）。与模型组相比,金欣高剂量、中剂量组血清TNF-a明显增高（均P〈0.01）,差异具有统计学意义,且金欣高剂量组与利巴韦林组比较有显著性差异（P〈0.01）;金欣预先给药组、高剂量组的支气管肺泡及小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液中SIgA的表达均增高,差异具有统计学意义。其中预先给药组与高剂量组的支气管肺泡及高剂量组的小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液与利巴韦林组比较有显著性差异（分别为P〈0.01、P〈0.05）。结论：金欣口服液可增加RSV肺炎模型幼年大鼠TNF-α、SIgA的分泌,并且存在一定的量效关系,是治疗RSV感染的有效方剂。     

基于血浆代谢组学分析金欣口服液治疗小鼠RSV肺炎的作用机制

目的:通过GC-MS技术分析BALB/c小鼠血浆内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,首次滴鼻2 h后予金欣口服液(剂量27.6 g·kg-1·d-1)灌胃治疗,连续滴鼻3 d后各组处死5只小鼠取肺组织行组织病理学检查,连续给药7 d后采集各组小鼠的血浆,运用GC-MS检测(m/z 50~500)血浆内源性代谢物及其相对含量的变化,分析其可能参与的代谢通路。结果:RSV肺炎小鼠的血浆中共测得32种内源性代谢产物,其中乳酸、尿素、谷氨酰胺、葡萄糖、花生四烯酸和1,5-脱水山梨醇为差异代谢产物,主要与花生四烯酸、谷氨酰胺、丙酮酸的代谢通路有关。结论:金欣口服液治疗RSV肺炎可能与调节RSV感染导致的代谢紊乱相关。     

紫金龙乙醇组分对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:研究紫金龙乙醇组分(AVEC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的影响。方法:用脂多糖(10μg·L-1)刺激生长良好的RAW 264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度AVEC对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量。结果:AVEC在低于400 mg·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白对照组相比,LPS可以明显诱导RAW 264.7细胞分泌炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.01);与模型组相比,100~400 mg·L-1的AVEC可明显下调LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.05,P<0.01),并呈现良好的剂量依赖关系。结论:AVEC可以抑制脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子TNF-α,IL-6和NO有关。     

金欣口服液对RSV感染人胚肺成纤维细胞细胞凋亡的研究

目的:探讨细胞凋亡在RSV肺炎发病中的作用以及金欣口服液干预RSV感染的可能机制。方法:体外建立呼吸道合胞病毒A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组。采用流式细胞术检测其对感染细胞不同时间点的总凋亡率、早期凋亡率。结果:RSV感染12、24h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均低于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组12、24h的总凋亡率、早期凋亡率均高于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但增加的程度不同,12、24h HELF细胞的总凋亡率和24h早期凋亡率依次排序是空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组;12h早期凋亡率依次排序是利巴韦林组、空白血清组和金欣口服液组。RSV感染48、72、96h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均高于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组48、72、96h的总凋亡率均高于病毒对照组(P<0.05)、48h早期凋亡率无变化(P>0.05),72、96h早期凋亡率低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05);利巴韦林组、金欣口服液组48、72、96h总凋亡率、早期凋亡率均低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但降低的程度不同,排序依次是金欣口服液组、利巴韦林组、空白血清组(P<0.05)。结论:金欣口服液直接或间接调控细胞凋亡,实现阻止RSV感染早期抑制细胞凋亡、感染后期促进凋亡的作用,从而阻止病毒在细胞内的进一步复制和清除,这可能是金欣口服液抗RSV病毒的作用机制之一。     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡的影响

目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期不同时点凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的影响。结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞12、24h后凋亡率均低于细胞对照组(P<0.05),Bcl-2/Bax比例逐步上调,金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于病毒组(P<0.05)。结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散。     

板蓝根活性部位对细胞凋亡和RAW264.7表达IL-10、TNF-α的影响

目的探讨板蓝根活性部位对Hep-2、Hela、U937、Jukart细胞的细胞凋亡和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7表达细胞因子IL-10、TNF-α的影响。方法 0.5 g/L板蓝根活性部位作用于Hep-2、Hela、U937、Jukart 24 h,经PI染色,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响;100TCID50的单纯疱疹病毒(HSV-1)作用于U937,0.5 g/L药物处理24 h,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响。ELISA检测1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物对LPS处理小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7后IL-10、TNF-α表达的影响。结果①0.5 g/L板蓝根活性部位作用24 h对Hep-2、Hela、Jukart、U937细胞凋亡无明显影响,但HSV-1感染U937后药物抗病毒组较病毒组的细胞凋亡率由9.72%下降至6.71%,差异有统计学意义(P<0.01);药物作用于Hela细胞时引起其G1期阻滞(从68.76%延长至74.77%),S期缩短(从31.22%降至21.62%),与正常Hela细胞组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPS刺激1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物组细胞凋亡率分别为19.35%、28.14%、7.52%,明显低于LPS模型组(70.42%),差异有统计学意义(P<0.01)。与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组细胞凋亡率上升(由5.81%升至15.03%),差异有统计学意义(P<0.01),而0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组无明显促进细胞凋亡的效应。与LPS刺激0.5 g/L、0.25 g/L药物组比较,0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组的细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组RAW264.7G1、S期缩短,G2期延长,差异有统计学意义(P<0.01);0.5 g/L药物对照组细胞G1期延长,S期缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。③LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组IL-10、TNF-α明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组IL-10降低,1 g/L药物对照组TNF-α升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与LPS模型组比较,LPS 1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L IL-10刺激药物组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论板蓝根活性部位抑制HSV-1和LPS引起U937、RAW264.7的细胞凋亡,并24 h时下调LPS作用后RAW264.7的IL-10表达。     

从TH1/TH2细胞平衡角度探讨清肺口服液对感染RSV小鼠内T-bet、GATA3水平的影响

目的:从TH1/TH2细胞平衡角度观察清肺口服液对感染RSV肺炎小鼠肺组织内T-bet、GATA3及IL-12的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将45只BABL/c小鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,利巴韦林组,清肺(3.4 g/mL)组,清肺(10.2 g/mL)组。每组9只,用RSV(Long株)病毒予小鼠滴鼻造模,病毒激发24 h后,分给药72 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,及肺细胞中RT-PCR检测T-bet和GATA3蛋白表达水平,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞IL-4和INF-γ表达含量。结果:小鼠模型组与各给药组小鼠肺组织均有T-bet和IL-12(P<0.05,P<0.01)显著升高,GATA3显著降低。结论:清肺口服液具有调节TH1/TH2平衡,并对于感染rsv小鼠体内T-bet及IL-12细胞因子具有明显提升作用,而对GATA3则有明显抑制效果,从而进一步证明了清肺口服液治疗RSV病毒性肺炎有效性。     

麦冬不同提取部位对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:研究麦冬各提取物组对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7中炎症介质的影响,进而找出该药的抗炎有效部位群。方法:采用回流提取及有机溶剂萃取的方法制备麦冬总提取物及不同提取部位。各提取部位分别作用于RAW264.7巨噬细胞后,使用MTS法检测细胞活力;并对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应模型采用不同部位的麦冬提取物和LPS(脂多糖)进行药物干预24 h后,采用Griess法测定NO的分泌量;采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α的含量。结果:麦冬各提取物组都能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的分泌(P0.05),以及TNF-α的表达(P0.01),并呈现出良好的剂量依赖性。与其他组相比,其中水提取部位对NO分泌的抑制作用最突出,正丁醇提取部位对TNF-α表达的抑制作用最突出。结论:麦冬各提取物组可通过抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的分泌与TNF-α的表达,从而发挥抗炎作用,试验结果表明麦冬水与正丁醇提取部位对炎症因子的抑制作用最强。     

基于GC-MS的金欣口服液对RSV肺炎小鼠脾脏代谢物的调控作用

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠脾脏组织中内源性代谢物的变化,探讨金欣口服液治疗RSV肺炎可能的作用机制。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,给予金欣口服液(27.6 g/kg)干预治疗,连续治疗7 d后处死小鼠,取脾脏组织,经甲醇提取后,先后予甲氧胺吡啶和BSTFA以肟化和衍生化,然后运用GC-MS检测脾脏中所含有的代谢物及其相对量的变化。结果 RSV肺炎小鼠的脾脏中共鉴定出35种代谢产物,其中L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖为具有显著性差异的代谢物(P0.05),与之相关的代谢通路为D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢。结论金欣口服液可以调节RSV肺炎小鼠脾脏的免疫功能,可能与氨基酸代谢有关。