益气活血中药复方对CVB_3大鼠心肌细胞感染模型细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ表达的影响

目的:研究益气活血中药复方调控CVB3大鼠心肌细胞感染模型细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochromeC oxidase subunitⅠ)及细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome C oxidase subunitⅡ)表达的作用机制。方法:本实验用Wistar大鼠心肌细胞建立柯萨奇病毒B3(CVB3)感染模型,通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆受CVB3攻击的宿主细胞中被中药(益气活血中药复方)调控的基因。结果:细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论:益气活血中药复方能够影响受CVB3攻击的宿主细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ的表达,有效保护心肌,阻断病程进度,实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方影响CVB_3病毒性心肌炎模型乳鼠心肌细胞MCP-1、Rps4基因表达的实验研究

目的:观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(SSH),克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果:益气活血中药复方能够上调CVB3病毒性心肌炎模型大鼠心肌细胞small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达。结论:益气活血中药复方可能通过调节small inducible cytokine A2(MCP-1/CCL2)、ribosomal protein S4基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin、Cx43表达及GJIC功能的影响

目的观察益气活血中药复方对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接结构及通讯功能的影响。方法以免疫组化法检测正常组、病毒组、益气活血中药复方组心肌细胞肌动蛋白(actin)及连接蛋白(connexin43,Cx43)表达;,并以激光扫描共聚焦显微镜法检测各组心肌细胞荧光漂白恢复率。结果益气活血中药复方能上调CVB3病毒性心肌炎心肌细胞actin及Cx43表达,能显著改善细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能。结论益气活血中药复方具有对抗CVB3致心肌细胞骨架蛋白损伤,修复CVB3病毒性心肌炎心肌细胞间缝隙连接通道结构,改善CVB3攻击后心肌细胞GJIC功能的作用。     

益气活血中药复方与CVB3对乳鼠心肌细胞基因表达的影响

目的:克隆和筛选CVB3乳鼠心肌细胞感染相关基因,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制,同时探索益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制.方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞CVB3感染组和益气活血中药复方给药...     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞病毒组和益气活血中药复方给药组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证。结果:SSH结果显示中药组中NADH脱氢酶亚基1和NADH脱氢酶亚基2基因的表达均比病毒组中低,这一结果通过荧光RT-PCR得到验证。结论:益气活血法能够通过调节NADH脱氢酶亚基1和2的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

益气活血中药复方对病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12 SASH1表达的影响

目的：研究益气活血中药复方影响病毒性心肌炎模型大鼠趋化因子CXCL12（CXC chemokine ligand-12）、Sash1（SAM and SH3 domain containing 1 protein）表达的作用机制。方法：通过改良的抑制性消减杂交技术（SSH）,克隆了受CVB3攻击的宿主细胞中被中药调控的基因,并通过荧光rt-PCR对上述结果进行验证。结果：趋化因子CXCL12、Sash1在中药组中呈高表达,病毒组中表达减弱或被抑制。结论：益气活血法能够影响受CVB3攻击的宿主细胞趋化因子CXCL12、Sash1表达,阻断心肌肥大进程,防止向心衰进展。     

益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响

目的观察益气活血中药复方对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响。方法以体外细胞培养方法,建立CVB3病毒性心肌炎心肌细胞感染模型。将细胞分为正常组、病毒组、中药组。采用荧光探针Hoechst33258染色法检测心肌细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙离子浓度;采用SABC免疫组化法检测心肌细胞心肌肌钙蛋白（cTnI）表达;采用透射电镜检测各组心肌细胞超微结构。结果病毒组与正常组心肌细胞相比,细胞超微结构损伤严重,并可见明显的凋亡细胞核形态,而中药组心肌细胞形态及细胞器结构接近正常组,未见明显的凋亡细胞核形态;正常组心肌细胞cTnI呈阴性表达,病毒组cTnI呈强阳性表达,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,中药组cTnI呈弱阳性表达,与病毒组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;正常组心肌细胞经中药干预后,钙离子荧光强度无明显变化（P〉0.05）,而病毒组心肌细胞经中药干预后,钙离子平均荧光强度升高（P〈0.01）,与正常组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气活血中药复方可抑制CVB3感染后细胞凋亡发生,抑制cTnI蛋白表达,防御并减轻CVB3造成的心肌损伤,具有修复损伤心肌细胞超微结构、改善心肌细胞舒缩功能和血液动力学作用。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB3作用

目的 通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用.方法 体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75％后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况.结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P＜0.05.结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用.     

益心康对柯萨奇B_(3m)病毒性心肌炎小鼠作用的实验研究

目的 :实验观察中药复方益心康 ,对实验性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护作用和对心肌细胞内病毒复制的抑制作用。方法 :诱导Balb/c小鼠形成病毒性心肌炎模型 ,分别予益心康、病毒唑稀释液、生理盐水灌胃。测每个小鼠血清磷酸肌酸激酶 (CK)及其同功酶MB(CK -MB) ,测心肌细胞感染CVB3mRNA量。结果 :中药治疗组小鼠的血清CK和CK -MB明显低于其它两个治疗组。中药治疗组小鼠的心肌细胞含有的病毒RNA量明显少于其它两个治疗组。结论 :益心康对柯萨奇B3m病毒性心肌炎小鼠有保护作用 ,并抑制柯萨奇病毒B3m在心肌细胞中的复制。     

参白注射液对病毒性心肌炎模型大鼠α-MHC基因表达的影响

目的:探讨参白注射液调节病毒性心肌炎心肌肌凝蛋白重链α-MHC基因表达的作用机制.方法:无菌分离、切取新生1～3天Wistar大鼠的心室肌,制备和培养心肌细胞,建立病毒性心肌炎(VMC)感染模型--体外培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B3(CVB3)病毒,通过免疫组化实验,检测参白注射液对α-MHC基因表达的影响.结果:正常组α-MHC基因表达可见明显阳性信号,病毒感染组蛋白阳性信号表达减少,病毒感染加参白注射液组能明显上调α-MHC基因的表达含量.结论:参白注射液通过减轻自身免疫损伤,使具有ATP酶活性的MHC表型发生变化的几率减少,从而上调α-MHC的表达,进而增强心肌收缩力.     

中药防治CVB_3病毒性心肌炎实验研究进展

CVB3是病毒性心肌炎的主要致病因素,目前西医对CVB3病毒性心肌炎的治疗尚无特效药物。近年来,中医药对CVB3的治疗取得了一定的成就。大量的动物实验表明,单味药和复方广泛用于CVB3的治疗,具有部分直接杀灭病毒、抑制病毒复制、抗氧化、保护心肌细胞,调节免疫功能以及参与心肌细胞的凋亡等。文章对近年中药防治CVB3病毒性心肌炎从实验研究的角度做一综述。     

心乐胶囊对病毒性心肌炎小鼠Bcl-2及Bax蛋白的影响

目的:观察心乐胶囊对CVB3病毒性心肌炎Balb/c小鼠Bcl-2及Bax的影响.方法:Balb/C小鼠随机分为6组,空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、心乐胶囊高、中、低计量组,每组30只,利用免疫组织化学技术观察心乐胶囊对柯萨奇B3型(CVB3)致病毒性心肌炎小鼠Bcl-2及Bax水平的影响.结果:心乐胶囊各剂量组及阳性药对照组均能提高CVB3致病毒性心肌炎Balb/C小鼠心肌组织Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白的表达.心乐胶囊各剂量组与模型组相比有显著差异P＜0.01,其中以心乐胶囊高剂量组最为明显.结论:1心乐胶囊能够明显地提高CVB3致病毒性心肌炎Balb/c小鼠Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白的表达.2心乐胶囊可以抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的凋亡,保护心肌组织.     

茱萸颗粒体外抗CVB3病毒的实验研究

茱萸颗粒是我院心内科李七一教授经临床多年摸索,拟定治疗病毒性心肌炎的有效良方.目的:观察茱萸颗粒对CVB3病毒的作用.方法:采用体外抗CVB3病毒和大鼠心肌细胞感染CVB3实验.结果:茱萸颗粒20mg/ml对CVB3感染Vero细胞具有明显保护作用,同时可抑制CVB3毒力.茱萸颗粒0.5mg/ml至4mg/ml可减轻CVB3感染心肌细胞CPE,心肌酶谱显示:茱萸颗粒可明显降低感染CVB3心肌细胞中LDH,LDH1,AST和HBDH释放,减少心肌细胞损坏.结论:茱萸颗粒具有抗CVB3感染和保护心肌细胞的作用.     

中药防治柯萨奇B_3病毒性心肌炎实验研究进展

综述了近年关于中医药防治柯萨奇 B3 病毒性心肌炎(CVB3 - VMC) 的实验室研究。其中单味中药以黄芪、人参、苦参等为主 ,中药复方则以多种自制方药 ,通过离体细胞培养和柯萨奇 B3 病毒亲心肌株 (CVB3 m) 诱导 VMC的整体动物实验模型 ,采用微量细胞培养、同位素示踪、细胞微电极、血清药理学、分子杂交等技术和方法 ,从抑制 CVB3 m繁殖、调节细胞免疫作用、保护心肌细胞的角度进行较深入的实验室研究。     

苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和相关Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察苏木乙酸乙酯提取物对CVB3小鼠心肌细胞凋亡和相关Bc1-2、Bax蛋白表达的影响,探讨苏木乙酸乙酯提取物在急性病毒性心肌炎的作用机制。方法:50只雄性Balb/c小鼠随机分为3组:空白组10只,苏木乙酸乙酯提取物组(苏木组)20只,模型对照组(模型组)20只。模型组、苏木组每只小鼠腹腔注射1×TCID_(50)为10~(-7)CVB3Nancy标准株病毒液0.3 ml,建立VMC小鼠模型,连续给药14天,第14天无菌摘取心脏,浸泡于4%多聚甲醛溶液中。采用HE染色观察心肌病理变化、TUNEL法检测心肌细胞凋亡及免疫组化法检测心肌细胞Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组、苏木组小鼠心肌细胞凋亡指数增加,有显著性差异(P0.05);与模型组比较,苏木组心肌组织中细胞凋亡指数明显减少,具有显著性差异(P0.05)。Bcl-2蛋白在空白组呈高表达,模型组呈低表达,苏木组较模型组明显增强,呈中表达。Bax蛋白在空白组呈低表达,模型组呈高表达,苏木组较模型组明显减弱,呈中表达。结论:苏木乙酸乙酯提取物能够上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,抑制心肌组织的细胞凋亡,这可能是苏木治疗病毒性心肌炎的作用机制之一。     

益心康对体外感染CVB3病毒心肌细胞凋亡相关因子caspase-3 mRNA和颗粒酶B、穿孔素表达的影响

目的研究中药益心康对感染柯萨奇B_3病毒(Coxsackie virus B,CVB_3)新生乳鼠体外心肌细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA和颗粒酶B、穿孔素(PFP)表达的影响,探讨中药益心康治疗病毒性心肌炎的作用机制。方法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立体外感染CVB_3的心肌细胞模型,将心肌细胞分为4组:正常对照组、病毒组、中药益心康组及利巴韦林组。用RT-PCR法检测凋亡相关因子caspase-3 mRNA的表达,ELISA法检测颗粒酶B、PFP的表达。结果中药益心康组caspase-3 mRNA、PFP、颗粒酶B的相对表达量明显低于病毒组(P0.01)和利巴韦林组(P0.05)。结论中药益心康能降低大鼠心肌细胞caspase-3 mRNA、颗粒酶B、PFP表达,从而抑制CVB_3感染大鼠心肌细胞凋亡。     

心安颗粒对病毒性心肌炎小鼠IL-6,TNF-α及病毒复制的影响

目的:研究心安颗粒对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠的柯萨奇B3病毒(CVB3)mRNA,白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法:将60只健康雄性BALB/c小鼠随机分为6组,空白组、模型组、利巴韦林组(阳性药物,0.02 g·kg-1·d-1)和心安颗粒高、中、低剂量组(12,6,3 g·kg-1·d-1),其中空白组腹腔接种0.15 m L生理盐水,其余5组均腹腔接种1×10-8TCID50·m L-1CVB3 Nancy标准病毒液0.15 m L,进行模型制备。造模2 h后对各给药组小鼠灌胃(ig)相应药物,空白组和模型组小鼠ig生理盐水,连续7 d。7 d后小鼠进行实验,观察小鼠心肌组织病理变化,并进行评分;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA水平和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TNF-α,IL-6蛋白表达。结果:给药7 d后,与空白组比较,模型组心肌细胞排列紊乱,出现间质水肿,可见大量炎症细胞浸润,发生明显病变,心肌病变评分和心肌组织中CVB3 mRNA表达水平和IL-6,TNF-α蛋白水平明显升高(P0.05);与模型组比较,各给药组小鼠心肌组织病变得到改善,病理评分和心肌组织中CVB3 mRNA和TNF-α,IL-6蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:心安颗粒可明显下调病毒性心肌炎模型小鼠心肌组织中CVB3 mRNA和TNF-α,IL-6蛋白水平的表达,推测是其防治病毒性心肌炎的作用机制之一。     

清心饮对培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B_3病毒的影响

目的:观察清心饮对病毒性心肌炎模型的保护作用。方法:取新生 SD 大鼠心室肌制备搏动心肌细胞,18h 后接种100TCID_(50)的柯萨奇 B_3病毒(CVB_3)做为实验性病毒性心肌炎模型。结果:清心饮能够剂量依赖性地减少感染心肌细胞乳酸脱氢酶、天冬氨酸氨基转移酶的释放,降低上清液中的病毒滴度,对心肌细胞搏动异常、停止及细胞病变均有保护作用,且通过斑点杂交发现清心饮能够抑制感染心肌细胞中病毒核糖核酸的复制。结论:临床应用清心饮治疗病毒性心肌炎有实验依据。