甲基苯丙胺行为超敏大鼠尾壳核和海马钙调神经磷酸酶基因表达的研究

目的证实钙调神经磷酸酶与甲基苯丙胺行为超敏的关系。方法用mRNA原位杂交法,定量甲基苯丙胺行为超敏大鼠不同脑部位的钙调神经磷酸酶mRNA。结果在甲基苯丙胺行为超敏大鼠的尾壳核,钙调神经磷酸酶Aα和AβmRNA的量分别为95.72±3.82和81.59±12.54,分别比对照组的100±2.53(P=0.026)和100±13.91(P=0.025)明显减少。在海马的CA1、CA3和DG三部位,甲基苯丙胺行为超敏组和对照组之间的Aα或AβmRNA的量差异均无显著性(P>0.05)。结论钙调神经磷酸酶与甲基苯丙胺行为超敏形成有关。     

钙调神经磷酸酶的研究新进展

本文对CaN的分子结构、酶学特性、组织分布、信号传导及生物学功能方面的研究进展进行文献复习。     

钙调神经磷酸酶的纯化及其亚基分离

报道一种从牛脑中纯化钙调神经磷酸产分离其亚基的方法，牛脑匀浆液经ＤＥ－５２纤维素离子交换层析，Ａｆｆｉ－ｇｅｌ－Ｂｌｅ层，６０％饱和（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，ＧａＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲合层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００凝胶过滤，从１Ｋｇ牛脑中可得到３０ｍｇ电泳纯的钙调神经磷酸酶，回收率为４１％，比活力提高２８５倍，纯的钙调神经磷酸酶经含６Ｍ尿素和８０ｍｍｏｌ‘Ｌ ＬｉＢｒ缓冲液透析，过ＤＥＡＥ－Ｓｅ     

功能训练对脑梗死大鼠钙调神经磷酸酶水平影响的实验研究

目的 探讨功能训练对局灶性脑梗死后大鼠钙凋神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)水平的影响.方法 采用局灶性大脑中动脉闭塞动物模型,运用免疫荧光染色技术,检测功能训练对脑梗死不同时间内CaN-A水平变化情况.结果 功能训练6～72h梗死灶周围区CaN水平渐升高,并在功能训练第3天CaN水平达到高峰,第7天逐渐回落,但仍保持较高水平,均明显高于制动组(P＜0.05).结论 局灶性脑梗死后功能训练通过调节CaN的去磷酸化水平,达到保护缺血神经元损伤的目的,促进运动功能的恢复.     

钙调神经磷酸酶对心肌凋亡作用研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)是目前所知的惟一依赖于Ca2 钙调素的SerThr磷蛋白磷酸酶,在分类上属于磷蛋白磷酸酶2B(PP2B)。20世纪70年代末80年代初由加拿大籍华人王学荆教授,美籍华人张槐耀教授及美国的Klee教授分别在猪脑中发现并纯化成功[1]。CaN在细胞信号传递过程中直接受Ca2 的调节,起去磷酸化作用,参与多种细胞功能调节。在细胞因子介导的T细胞活化中起调节枢纽作用,在神经递质和激素的释放、神经突触的生长发育和突触可塑性方面亦具有重要的调节作用,与学习记忆和老年性痴呆有关[1]。CaN介导的信号通路在心血管的形态发…     

温通针法对血管性痴呆大鼠脑钙调神经磷酸酶和自由基的影响

目的:探讨温通针法治疗血管性痴呆(VD)的机理。方法:观察用温通针法针刺人中、百会、足三里等穴对血管型脑痴呆大鼠学习记忆行为、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、钙调神经磷酸酶(CaN)的活性的影响。结果:温通针法能提高脑痴呆症模型大鼠脑组织CaN酶的活性、降低MDA、LD的含量,提高模型大鼠的学习记忆能力和改善其自发性活动。结论:温通针法可以提高VD大鼠的抗氧化能力,减少自由基代谢产物的储积;增加CaN的分泌,从而起到保护脑细胞,防治脑痴呆的作用。     

钙调神经磷酸酶在逼尿肌肥大发生中的作用研究

目的观察钙调神经磷酸酶(CaN)催化亚单位α、β、γ(CnAα、CnAβ、CnAγ)3种亚型在肥大逼尿肌的表达变化,探讨其在逼尿肌肥大发生中的作用.方法选用10周龄雌性Wistar大鼠实行膀胱出口部分梗阻手术.手术分别于2、4、6周取下大鼠膀胱.以RT-PCR检测3种亚型mRNA表达,Western blot测定亚型蛋白表达量的变化.肥大标志物肌球蛋白重链(MHC)表达变化通过考马斯亮蓝胶染色光密度测定.结果①RT-PCR可检测到CnAα、CnAβ,未检测到CnAγ.②Western blot检测,CnAα手术后2周比对照组表达显著增加(P＜0.01),4周、6周表达下降.CnAβ表达无显著变化.③肌球蛋白重链表达变化与CnAα表达变化具有相关性.结论CnAα在逼尿肌肥大发生中起重要的作用,CnAβ作用不明显.     

钙调神经磷酸酶在心血管系统的生物学功能

钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）是典型的Ca^2＋／CaM结合酶和调节酶。CaN在Ca^2＋信号传递系统中起举足轻重的作用,参与多种生物学效应。新近的研究表明,CaN介导的信号通路在心血管的形态发生中起重要作用,并参与心肌肥大、血管平滑肌细胞增殖和内皮细胞功能的调节。本文对CaN的分子结构、酶学特性及在心血管系统的生物学功能方面的研究进展进行介绍。     

钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的作用

钙调神经磷酸酶在心肌肥大的病理生理过程中发挥着重要作用。钙调神经磷酸酶的结构、功能及抑制剂等各方面的研究对于探讨心肌肥大的发病机制、为心肌肥大的预防和治疗提供了一条新思路。本文就钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的研究现状进行综述。     

大鼠尾核内微量注射L-精氨酸对一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨大鼠尾核内L-精氨酸（L-Arg）、N^ω硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）、亚甲基蓝（MB）等对一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法动物随机分为L-Arg组、L-NAME组、MB组和生理盐水（NS）组，用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法观察给药后6、12、24、48和72h尾核内nNOS表达的变化。结果尾核内nNOS神经元散在表达，阳性部位主要在胞浆，神经纤维也有表达。L-Arg组nNOS神经元较正常表达增强（P〈0．05），且随着时间的延长而增强，48h达最高点。MB和L-NAME组nNOS神经元表达较正常减弱（P〈0．05），随时间延长继续减弱，48h达最低点。结论尾核内L-Arg通过NOS生成NO而发挥痛敏作用，L-NAME和MB通过抑制NOS的功能而减少NO的生成产生镇痛作用，NOS是体内合成NO的关键酶。     

大鼠海马-隔核投射及隔核毁损对海马Ghrelin调控学习记忆的影响

目的 观察大鼠海马神经元向隔核投射,探讨大鼠隔核对海马Ghrelin调控学习记忆能力的影响.方法 采用荧光金(FG)逆行追踪方法,观察大鼠海马神经元向隔区投射;采用立体定向电极毁损大鼠隔核,海马CA1区微量注射Ghrelin,利用跳台实验及Morris水迷宫进行定位航行实验和空间搜索实验,探讨大鼠隔核毁损后海马Ghrelin对大鼠学习记忆的影响.结果 隔核注射FG,7d后可见海马CA1,CA2,CA3区均有大量标记FG的神经元;海马CA1区注射Ghrelin可明显增加大鼠学习记忆能力,表现为跳台实验中大鼠从安全台跳下的潜伏期明显延长[(3.2±0.9)s,(6.9±1.1)s,P＜0.05],5min内大鼠遭受电击次数明显减少[(1.8±0.4)次,(0.8±0.1)次,P＜0.05],Morris水迷宫实验中大鼠找到平台的潜伏期明显缩短[(19.5±3.2)s,(10.5 ±2.1)s,P＜0.05],但隔核毁损后,可明显减弱大鼠认知作用,表现为跳台实验中大鼠从安全台跳下的潜伏期明显缩短[(3.9±0.8)s,(1.8±0.5)s,P＜0.05],5min内大鼠遭受电击次数明显增加[(1.6±0.3)次,(4.0±0.7)次,P＜0.05],Morris水迷宫实验中大鼠找到平台的潜伏期明显延长[(18.0±2.5)s,(32.8±5.5)s,P＜0.05].结论 海马CA1区Ghrelin可提高大鼠学习记忆能力,而该作用可能与隔核-海马间神经通路有关.     

围生期甲低大鼠行为发育及其与海马AR mRNA表达的相关性研究

目的：探讨围生期甲状腺功能低下对青春期不同性别大鼠行为发育的影响及其与海马ARmRNA表达的相关性。方法：孕SD雌鼠复制围生期甲低仔鼠模型雌雄各24只,随机各选雌雄12只为治疗组,于出生当日起每天腹腔注射T,（2μg／100g）至断奶,其余为甲低组;另设正常对照组雌雄各12只。第60天进行旷场试验和避暗试验。行为评估结束后收集海马组织,用RT—PCR法测定ARmRNA水平。结果：在旷场试验中,甲低组大鼠跨格数较正常组增多,直立次数和排粪便数减少（P〈0．05）。治疗组雄性的跨格数未达正常（P〈0．05）;避暗试验：甲低组大鼠错误次数较正常组明显增多（P〈0．01）,雌性组少于雄性组（P〈0．01）,雄性组记忆潜伏期明显缩短（P〈0．001）,治疗组学习能力较甲低组明显增强,与正常组无显著性差异（P〉0．05）。海马ARmRNA表达在甲低组雄性大鼠较正常组减少,治疗组与正常组无显著性差异（P〉0．05）。雄性大鼠海马ARmRNA表达与跨格数呈负相关（r=-0．537,P=0．001）,与避暗试验错误次数也呈负相关（r=-0．532,P=0．001）,与潜伏期呈正相关（r=0．564,P=0．000）。结论：围生期甲状腺功能低下使青春期大鼠的行为发育改变,在雄性尤为明显,这可能与雄性大鼠海马ARmRNA表达尚未恢复正常有关,生后及时治疗能减轻这种损害。     

颞叶癫痫大鼠海马Akt蛋白表达变化的研究

目的动态观察颞叶癫痫大鼠神经元磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、诱发大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后3h、6h、12h、24h、3d组。用氯化锂LiCl和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组织化学染色技术检测致痫后各时间点磷酸化Akt蛋白表达情况。结果免疫组织化学法显示正常组与假手术组大鼠海马CA1、CA3区可见少量磷酸化Akt阳性细胞,两组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组可见CA1、CA3区Akt阳性细胞增加(P<0.01),6h达到高峰,3d回到对照组水平。结论上调磷酸化Akt蛋白表达有利于减少海马神经元凋亡,可能是保护神经损伤的机制之一。     

大鼠尾核对丘脑后核神经元抑制作用的可能性递质

采用侧脑室微量注射纳洛酮、乙酰胆硷的方法,观察了这两种物质对大鼠丘脑后核(PO)中痛敏神经元电活动的影响以及注药后尾核对这些神经元抑制作用的变化。结果如下:①侧脑室微量注射纳洛酮可以使PO核中多数痛相关神经元自发放电增加、痛反应加强,并能够部分地阻断电刺激尾核头部对这些神经元的抑制效应。②侧脑室微量注射乙酰胆硷可以有效地抑制PO核中多数痛相关神经元的自发放电和痛反应,其作用与电刺激尾核头部对这些神经元的抑制作用相似,并能够加强电刺激尾核头部对这些神经元的抑制效应。     

戊四氮致痫大鼠海马c-FOS蛋白表达及钙拮抗剂的影响

目的：探讨戊四氮（PTZ）致痫后大鼠的海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS蛋白表达情况，和钙拮抗剂尼莫地平对c-FOS蛋白表达的影响。方法：大鼠腹腔注射PTZ 60mg/kg建立急性癫痫动物模型，测定痫性发作潜伏期、发作强度，用免疫组化LSAB法检测2h和4h后c-FOS的表达。结果：对照组大鼠无癫痫发作，干预组痫性发作潜伏期较致痫组明显延长（P＜0．01），且发作强度明显减弱（P＜0．01）；对照组海马各区c-FOS仅低水平表达，致痫后表达明显增高（P＜0．01），干预组2h比致痫组2h的c-FOS阳性率明显降低（P＜0．01），4h干预组与致痫组无显著性差异（P＞0．05）。结论：大剂量PTZ可诱发大鼠全面阵挛发作，诱导海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS表达增高，海马结构涉及PTZ致痫引起阵挛发作的发展或传播的病理生理机制，尼莫地平可延缓癫痫的发生，减轻发作强度，降低c-FOS的表达。     

小脑顶核电刺激对AD模型大鼠学习记忆能力及海马bcl-2、Bax表达影响

目的：研究淀粉样β蛋白（Aβ1-40）对大鼠空间学习记忆能力及海马区Bax和bcl-2的表达的影响及小脑顶核电刺激（Fastigial nucleus stimulation,FNS）的干预作用。方法：将Aβ1-40微量注射至大鼠右侧海马,制作大鼠AD动物模型。分别予电刺激小脑顶核、齿状核。28d后进行水迷宫试验,观察各组大鼠空间学习记忆功能改变。免疫组化法检测各组海马CA1区bcl-2、Bax蛋白表达。结果：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）组与假手术组（SC）比较,每天隐匿平台逃避潜伏期均明显增长（P〈0．05）,海马bcl-2阳性细胞光密度明显减少（P〈0．05）,Bax阳性细胞光密度明显增高（P〈0．05）;小脑顶核电刺激（FNS）组与AD组比较,空间学习记忆能力明显改善（P〈0．05）,海马bcl-2阳性细胞光密度明显增高（P〈0．05）,Bax阳性细胞光密度明显减少（P〈0．05）,齿状核刺激（DNS）组无此作用。结论：FNS可部分改善Aβ1-40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,可能是通过促进bcl-2表达和降低Bax表达抑制海马神经细胞凋亡。     

不同剂量胶原酶IV尾壳核内注射建立重度出血性脑卒中大鼠模型

目的：通过胶原酶Ⅳ尾壳核内注射，探索建立一种稳定的重度出血性脑卒中大鼠模型。方法：45只SD大鼠随机分配到Ⅳ型胶原酶注射0．5U组（A组，15只）、0．75U组（B组，15只）及1．0U组（C组，15只）。制作脑出血模型后24h、72h，对大鼠进行神经功能学评分，检测肢体功能缺损情况。通过多媒体病理图像分析仪测定脑血肿体积大小，并通过HE染色观察组织病理学变化。结果：除A组1例外其余大鼠均形成明显血肿，C组形成血肿体积最大。3组大鼠均出现不同程度的神经功能缺损，以C组脑出血术后72h最明显。但C组术后72h病死率达73．33％，明显高于其他两组。24h、72h神经功能评分及血肿体积在A、B、C3组间作两两比较差异均有显著性（P〈0．01）。脑血肿区组织病理学观察表现为典型的脑出血改变。结论：0．75U Ⅳ型胶原酶尾壳核内注射可以诱导建立稳定的重度出血性脑卒中大鼠模型，该模型肢体功能缺损明显，存活率高，能作为促进出血性脑卒中大鼠神经功能恢复研究的可靠应用平台。