B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族naïve T细胞分析

目的 了解B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞中TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在情况,从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族na(i)veT细胞的功能.方法 利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1sjTRECs,10例正常人作为对照.结果 TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到,与正常人比较,B-ALL病人的Vβ24～Dβ1sjTRECs出现频率比正常人高,且有统计学意义(80%30%,P=0.0285),另有18个家族的Vβ～Dβ1sjTRECs比正常人低,其中在Vβ1(30%,P=0.0285)、Vβ12(20%,P=0.0285)、Vβ13(40%,P=0.0043)、Vβ15(20%,P=0.0022)和Vβ18(20%,P=0.0089)5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义.结论 B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族na(i)veT细胞功能低于正常人.     

B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析

 目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞中TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在情况,从而了解胸腺近期输出各TCRVβ亚家族naveT细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ~Dβ1sjTRECs,10例正常人作为对照。结果TCRVβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到,与正常人比较,B-ALL病人的Vβ24~Dβ1sjTRECs出现频率比正常人高,且有统计学意义(80%∶30%,P=0.0285),另有18个家族的Vβ~Dβ1sjTRECs比正常人低,其中在Vβ1(30%,P=0.0285)、Vβ12(20%,P=0.0285)、Vβ13(40%,P=0.0043)、Vβ15(20%,P=0.0022)和Vβ18(20%,P=0.0089)5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族naveT细胞功能低于正常人     

APL患者外周血TCR VβT细胞克隆性增生特点

目的了解急性早幼粒细胞白血病（APL）患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法利用RT—PCR和基因扫描技术分析21例APL患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3长度,10例正常人作为对照。结果21例患者外周血T细胞所表达的Vβ亚家族数量差别很大,2～21个Vβ家族不等,其中,以Vβ2（71．4％）,Vβ15（61．9％）和Vβ5（57．1％）出现频率较高,而Vβ10,和Vβ14出现频率最低（14．3％）。除2例外,患者外周血均可检测到某些Vβ亚家族的克隆性T细胞,主要为Vβ12,Vβ21和Vβ23克隆性T细胞。结论APL患者外周血Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布特点,并存在克隆性增生的T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性免疫反应。     

骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物抗宿主病后患者外周血T细胞受体Vβ亚家族谱系变化研究

 目的　研究输注骨髓间充质干细胞（MSC）治疗慢性移植物抗宿主病（cGVHD）后患者外周血T细胞受体（TCR）Vβ基因谱系变化及克隆性增殖情况。方法　1例经异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后发生cGVHD的患者接受MSC治疗,分别于第1次输注MSC后第1、5天及第2次输注MSC后第1、10、20天采集外周血,同时将输注的MSC作为对照,利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR 产物经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度,从而确定T细胞的克隆性。结果　患者输注的MSC不表达全部TCR Vβ亚家族,第1次输注MSC后第1天也未发现TCR Vβ亚家族的表达,随后的时间点分别出现了3、10、14、10个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式以寡克隆、多克隆为主;临床判断cGVHD表现减轻。结论　MSC对allo-HSCT后患者免疫功能的恢复有一定作用,并能减轻cGVHD效应;TCR Vβ亚家族谱系分析提示有部分优势表达。     

CML相关TCRVα亚家族T细胞的克隆性分布特点

 目的 了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法 采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论 CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。     

外周T细胞淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析

 目的　分析外周T细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法　应用RT-PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物测序分析其CDR3序列。结果　4例淋巴瘤患者TCR表达受到明显抑制,仅表达1～4个Vβ亚家族。所有患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增生T细胞,增生形式包括单克隆、双克隆及寡克隆增生趋势。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论　外周T细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生,其TCR Vβ呈限制性取用,不同克隆T细胞具有不同的CDR3谱型。     

慢性移植物抗宿主病患者T细胞受体Vβ亚家族T细胞的免疫重建

目的：了解慢性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD)患者T细胞受体（Tcell recepter,TCR)VβrT细胞免疫功能重建的情况。寻找可能与GGVHD相关的TCRVβ亚家族基因。方法：采用RT-PCR方法扩增5例患者外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族基因,分析其TCRVβ亚家族基因。方法：采用RT-PCR方法扩增测到2-8个Vβ亚家族的T细胞,不同患者所缺乏的TCRVβ亚家族不尽相同,其中4例患者均表达Vβ基因。结论：慢性GVHD患者外周血TCRVβ亚家族T细胞部分受抑制,Vβ亚家族T细胞可能和慢性GVHD有关,此方法不仅可以更详细地了解病人T细胞免疫功能重建的情况,更重要的是今后有可能在分子水平上寻找与GVHD相关的TCRVβ亚家族基因,为临床开展特异性的GVHD细胞亚群清除性治疗提供实验依据。     

非小细胞肺癌患者T细胞受体Vβ表达和克隆性研究

目的　了解非小细胞肺癌 (non small celllungcancer ,NSCLC)患者外周血淋巴细胞 (PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)及非癌肺组织淋巴细胞中T细胞受体 (TCR)Vβ优势表达情况及优势亚家族的克隆性分布。方法　收集 2 4例NSCLC患者外周血、肺癌组织和非癌肺组织 ,提取RNA ,经反转录多聚酶链反应 (RT PCR) ,扩增TCRVβ 2 4个亚家族基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经基因扫描分析 ,以 10例正常人外周血结果作对照 ,比较不同来源T细胞TCRVβ亚家族的表达情况。 结果　NSCLC患者仅存在部分亚家族的T细胞 ,其中TCRVβ5的表达率在TIL中 (6/18,33.3% )明显高于PBL(1/2 4,4.2 % )和非癌肺组织(0 /12 ) ,P值均 <0 .0 5 ,而且 6例表达Vβ5的TIL中 2例为寡克隆增殖 ,4例为多克隆增殖。 结论　NSCLC患者TCRVβ 2 4个亚家族呈倾斜性分布和克隆性增殖 ,提示NSCLC的TIL中可能存在肿瘤相关抗原 (TAA)刺激引起的特异性T细胞免疫反应     

弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和克隆性增生特点

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBL)患者外周血TCR Vα基因谱系及其克隆性增生情况.方法 用RT-PCR法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中29个TCRα基因的互补决定区3(CDR3),经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度,确定T细胞的克隆性.结果 6例DLBL患者分别表达20～23个TCRVα亚家族.均存在1个或多个Vα亚家族的克隆增生T细胞,增生形式包括寡克隆、寡克隆增生趋势及双克隆.Vα6和Vα23、亚家族出现克隆增生性T细胞的频率较高(66.7%).结论TCRVα亚家族T细胞出现限制性选用和克隆性增生,可能是机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应.     

PML-RARα多肽诱导脐血TCR Vβ T细胞增殖研究

 目的 了解PMLRARd多肽诱导脐血T细胞的T细胞受体（TCR）V8谱系表达和克隆性情况。方法 以不同浓度（16．7μg／mL，33．3μg／mL或50μg／mL）的PML-RARα多肽联合IL-2、抗CD3单抗以及抗CD28单抗诱导脐血T细胞增殖，利用RT-PCR-基因扫描技术分析诱导后第3、6、9、12天后的脐血TCRV8亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果 限制性表达和克隆性增殖TCR Vβ亚家族T细胞可见于PML-RARα多肽诱导后脐血T细胞。结论 PML-RARα多肽可在体外诱导脐血T细胞呈克隆性增殖，此优势增殖的克隆性T细胞可能具有特异性细胞毒作用。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析

 目的　分析B细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法　应用RT-PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3区基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物进行测序。结果　3例淋巴瘤患者TCR存在限制性取用,仅表达2～5个Vβ亚家族。所有患者均存在克隆性增生T细胞,增生形式包括寡克隆及寡克隆增生趋势。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论　B细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生,其TCR Vβ呈限制性取用,不同克隆T细胞的CDR3序列不同。     

乳腺癌患者T细胞受体基因重排及CDR3区序列分析

 目的　分析乳腺癌转移淋巴结穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）区序列。方法　应用RT-PCR扩增2例反应性增生淋巴结及3例乳腺癌转移淋巴结T细胞24个TCR Vβ亚家族的CDR3基因,并经基因扫描确定T细胞克隆性,对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物进行测序。结果　乳腺癌转移淋巴结T细胞中TCR存在限制性取用,仅表达3～5个Vβ亚家族。增生的T细胞存在克隆性特点,增生形式包括寡克隆及多克隆。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论　乳腺癌转移淋巴结中存在T细胞克隆性增生,其TCR Vβ呈限制性取用,不同T细胞克隆的CDR3序列不同。     

胃癌组织中T细胞亚群及其ICOS分子的表达及意义

目的探讨胃癌组织中T细胞共刺激分子ICOS及其亚群的表达及意义。方法应用流式细胞术检测38例胃癌和21例健康人（对照组）外周血T细胞亚群及其共刺激分子ICOS的表达。结果胃癌组与对照组比较：CD3^＋T细胞表达（53．61±13．84）％和（72.07±7．83）％,P〈0．01;CD3^＋CD4^＋T细胞表达（29．84±9．71）％和（38．79±5．08）％,P〈0．01;CD3^＋ICOS^＋T细胞表达（25．80±10．56）％和（O．82±0．98）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^＋T细胞表达（1.57±1．99）％和（0．02±0．04）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^-T细胞表达（16．06±6．94）％和（20．56±6．54）％,P〈0．05。胃癌组患者手术前和手术后1周外周血T细胞亚群的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胃癌患者T细胞数量明显减少,T细胞共刺激分子ICOS表达增高,CIM’T细胞显著减少。     

APL患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和增殖特点

目的:了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法:利用RT-PCR扩增9例APL患者和10例正常人外周血单个核细胞中29个TCRVα亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCRVα亚家族T细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例患者外周血T细胞所能检测到的Vα亚家族T细胞分别为1~9个亚家族,以Vα3和Vα19出现频率较高;克隆性增殖T细胞可在8例患者中检测到,以Vα3、Vα26和Vα27出现克隆性T细胞频率较高(3/8)。正常人外周血T细胞中表达绝大多数Vα亚家族,呈多克隆性增殖特点。结论:APL患者外周血Vα亚家族T细胞存在明显的倾斜性分布和克隆性增殖特点,后者可能是对APL细胞抗原的反应性增殖,是否具有特异性杀伤作用,有待进一步检测。     

多发性骨髓瘤患者外周血T细胞中T细胞受体ζ链基因表达特点

 目的　分析多发性骨髓瘤（MM）患者外周血T细胞中T细胞受体（TCR）ζ链基因表达水平,了解患者T细胞活化过程的相关变化情况。方法　采用SYBR GreenⅠ相对定量PCR方法分别检测24例MM患者和24名健康人的外周血单个核细胞（PBMC）的TCRζ链基因表达情况,以β2微球蛋白基因（β2M）作为内参照,根据相对定量公式（2－△Ct×100 %）分别计算TCRζ链基因表达量。结果　MM患者外周血TCRζ链基因表达水平为（1.83±1.72）%,低于健康人的（3.46±2.75）%（P＝0.019）。TCRζ链基因表达水平的变化与患者年龄无相关性（r＝0.151,P =0.525）。结论　首先报道MM患者TCRζ链表达的变化特点,TCRζ链基因表达水平以降低为主,可能与T细胞免疫缺陷有关。     

胃癌组织中T细胞及其亚群ICOS分子的表达及其意义

目的探讨胃癌组织中T细胞共刺激分子ICOS及其亚群的表达及意义。方法应用流式细胞术检测38例胃癌和21例健康人（对照组）外周血T细胞亚群及其共刺激分子ICOS的表达。结果胃癌组与对照组比较：CD3^＋T细胞表达（53．61±13．84）／（72．07±7．83）％,P〈0．01;CD3^＋CD4^＋T细胞表达（29．84±9．71）／（38．79±5．08）％。P〈0．01;CD3^＋ICOS^＋T细胞表达（25．80±10．56）／（0．82±0．98）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^＋T细胞表达（1．57±1．99）／（0．02±0．04）％,P〈0．01;CD3^＋CD8^＋ICOS^-T细胞表达（16．06±6．94）／（20．56±6．54）％,P〈0．05。胃癌组患者手术前和手术后1周外周血T细胞亚群的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胃癌患者T细胞数量明显减少,T细胞共刺激分子ICOS表达增高,CD4^＋T细胞显著减少。     

外周T细胞淋巴瘤非特指型TCRβ V/J取用及CDR3谱型分析

目的 分析外周T细胞淋巴瘤非特指型TCR β V/J亚家族限制性取用及CDR3谱型.方法 提取4例外周T细胞淋巴瘤非特指型患者病变淋巴结总RNA后进行反转录,多重聚合酶链反应（PCR）扩增TCRβ全长序列,构建重组质粒并测序,利用网上TCR资源分析序列.结果4例患者共获得9个TCR β链全长序列.克隆性增生T细胞V、J亚家族分别限制性取用BV2、BV4S2、BV14、BV29S1和BJ1S4、BJ2S3、BJ2S5、BJ2S7,并具有不同的CDR3区氨基酸序列.结论外周T细胞淋巴瘤非特指型TCRV β、VJ亚家族具有限制性取用,不同T细胞克隆的CDR3序列不同.     

人T细胞白血病细胞株Jurkat的TCR基因重排

背景与目的:近年的一些体外实验研究发现,重组激活基因(recombi-nationactivatinggene)编码的RAG1与RAG2(recombinationactivatinggenes,RAGs)蛋白能够介导DNA链的转位(transposition)作用,因而,可能与淋巴系统肿瘤性疾病的发生有关,但迄今尚未有明确定论。我们在实验中发现,代表T细胞发育成熟阶段的人白血病细胞株Jurkat同时表达重组激活基因RAG1和RAG2,并且经适当诱导后有RAGs表达的变化。本研究旨在确证Jurkat细胞是否发生RAGs介导的T细胞受体(T-cellreceptor,TCR)基因重排。方法:采用巢式和半巢式PCR检测T细胞受体D!-J!之间的信号结合T细胞受体删除DNA环(signaljointT-cellreceptorexcisionDNAcircles,sjTRECs);连接介导的PCR(LM-PCR)法检测TCRβ链位点重排中间物-重组信号序列(recombinationsignalsequence,RSS)断点;RT-PCR法检测V(D)J重排第二阶段非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)途径中的核心蛋白Ku70/Ku80及末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)。结果:在Jurkat细胞DNA中检测到结合区具有多样性特征的TCRDβ2-Jβ2sjTRECs和RSS5′端和3′端断裂点,并检测到TdT、Ku70/Ku80的表达。结论:Jurkat细胞有TCR基因重排的发生。Jurkat细胞可能成为研究RAGs和TCR基因重排与T细胞淋巴瘤的一个潜在的细胞模型。     

B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

 目的　了解B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。 方法　利用RT PCR方法扩增 13例初发未治B ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果　 13例B ALL病人分别表达 2～ 18个Vβ亚家族。 13例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞 ,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。Vβ2 1和Vβ2 3亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。结论　B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ谱系呈现优势利用的特点 ,并存在克隆性增殖的T细胞 ,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应 ;Vβ2 1和Vβ2 3亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显 ,可能与B ALL相关抗原刺激有关     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在淋巴细胞来源肿瘤中检测的临床意义

目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链（IgH)和T细胞受体γ（TCRγ) 排在淋巴细胞来源的肿瘤的检测意义。方法 用多聚酶链反应（PCR）方法检测15例急性淋巴细胞性白血病（ALL）、25例非霍奇金淋巴瘤（NHL）、10例多发性骨髓瘤（MM）、4例慢性B细胞性淋巴细胞性白血病（B－CLL）和20例正常人骨髓、周围血和（或）淋巴结中单个核细胞（MNCs)IgH、TCRγ基因重排。结果 IgH和（或）TCRγ基因重排在淋巴细胞来源的恶性肿瘤检出阳性率为92．6％（50／54）,在NHL为84．0％（21／25）,在ALL为100％（15／15）。IgH重排在T－NHL和B－NHL中阳性率分别为20．2％（2／10）和86．7％（13／15）,TCRγ是排在T－NHL和B－NHL中分别为80．0％（8／10）和53．3％（8／15）。22例NHL患者骨髓形态学检查阳性率50．0％（11／22）,基因检测阳性率81．8％（18／22）,两者差异有显著性（P＜0．05）。10例MM和4例B－CLL均检出IgH重排。20例正常人未检测出克隆性IgH、TCRγ基因重排。结论 IhG、TCRγ基因重排检测可用于NHL、ALL、MM和CLL等淋巴细胞来源的肿瘤的诊断和鉴别诊断,并判断NHL的早期骨髓浸润和临床预后。TCRγ、IgH基因重排在T、B淋巴细胞来源的肿瘤之间有交叉性。