卵巢肿瘤结构域蛋白酶1在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用：与TAK1-MAPK信号通路的关系

目的评价卵巢肿瘤结构域蛋白酶1(OTUD1)在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用及其与转化生长因子β活化激酶1 (TAK1)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法雄性野生型和OTUD1基因敲除的C57BL/6N小鼠各20只, 6～8周龄, 体质量20～25 g。采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型脓毒症组(WT-SEP组)、OTUD1基因敲除型假手术组(KO-Sham组)和OTUD1基因敲除SEP组(KO-SEP组), 每组10只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠, 采集腹主动脉血样, 取肺组织。采用血气分析仪行血气分析, 计算氧合指数(OI), 光镜下观察肺组织形态学并计算肺损伤评分, 确定肺组织湿重/干重(W/D)比值, 测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-6浓度, Western blot法检测肺组织OTUD1、磷酸化(p-)TAK1、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达。结果与WT-Sham组比较, WT-SEP组小鼠PaO...     

自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用

目的评价自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠192只, 6～8周, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为6组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、脓毒症组(S组)、脓毒症+氢气组(S+H2组)、脓毒症+巴佛洛霉素组(S+BafA1组)和脓毒症+氢气+巴佛洛霉素组(S+H2+BafA1组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型。Sham+H2组、S+H2组及S+H2+BafA1组于CLP后1和6 h吸入2%氢气1 h。S+BafA1组和S+H2+BafA1组于CLP后1 h腹腔注射巴佛洛霉素A1 1 mg/kg。每组随机取20只小鼠, 记录CLP后7 d的生存情况。于CLP后24 h处死小鼠, 光镜下观察心肌组织病理学改变, 进行病理学评分, ELISA法检测血清cTnI浓度, 采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62表达水平, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Sham组比较, S组生存率降低, 血清cTnI浓度和心肌组织病理学评分升高, 心肌组织P62表达上调...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及线粒体生物合成的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症组(Sep组)和脓毒症+氢气组(Sep+H组)。采用盲肠结扎穿孔术建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和Sep+H组分别于术后1和6 h时吸入67%氢气1 h。每组随机取20只小鼠, 观察术后7 d生存情况。剩余小鼠于术后24 h时取血液标本, 采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度;取心肌组织, HE染色后进行心肌病理评分, 采用荧光分光光度法检测线粒体膜电位(MMP), 萤光素酶法检测ATP含量, Western blot法测定过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、核呼吸因子2 (NRF2)、线粒体转录因子A(TFAM)的表达。结果与Sham组比较, Sep组生存率降低, 血清TNF-α、IL-1β、cTnI和CK-MB浓度和心肌病理评分升高, MMP和ATP含量降低, 心肌组...     

Akt/GSK-3β信号转导通路在小鼠神经病理性痛中的作用

目的 探讨丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)/糖原合成酶激酶-3β (Akt/GSK-3β)信号转导通路在小鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性C57BL/6小鼠36只,体重20～25 g,7～8周龄,采用随机数字表法,将其随机分为2组:假手术组(S组,n=9)和神经病理性痛组(CCI组,n=27).CCI组采用坐骨神经慢性结扎损伤的方法制备神经病理性痛模型,S组行假手术.2组取6只小鼠,分别于CCI前1d、CCI后1、3、5、7、10、14、17、21 d时测定机械缩足阈值(PWMT)和热缩足潜伏期(PWTL).S组于造模后3d,CCI组于CCI后1、3、5、7、10、14、21 d时处死3只小鼠,取L3～5段脊髓,采用Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的表达.结果 与S组比较,CCI组CCI后1～21 dPWMT降低,PWTL缩短,CCI后7～21 d时脊髓Akt表达上调,CCI后1～21 d时脊髓p-Akt和p-GSK-3β表达上调(P＜0.05).结论 Akt/GSK-3β信号转导通路参与了小鼠神经病理性痛的形成和维持.     

基于Mekk2-/-小鼠研究复方贞术调脂胶囊调控β-catenin泛素化的成骨机制

目的 观察促分裂原活化蛋白激酶2敲除（Mekk2-/-）小鼠的表型变化以及复方贞术调脂胶囊（FTZ）含药血清对MEKK2表达影响,探讨FTZ对MEKK2-β-catenin通路以及β-catenin去泛素化的作用机制。方法 建立Mekk2-/-小鼠,通过MicroCT检测其与野生型的表型差别;通过FTZ干预Mekk2-/-小鼠和野生型的成骨细胞,运用Western blot观察对β-catenin磷酸化水平的作用;通过FTZ与FGF2干预野生型小鼠原代细胞,观察对MEKK2磷酸化水平的作用;通过C3H10T1/2细胞转染后进行FTZ和Wnt3a干预,观察β-catenin活性变化。结果 Mekk2-/-小鼠与野生型小鼠相比,BV/TV、Tb.N、Tb.Th值均较后者降低（P<0.05）,Tb.sp无差异变化（P>0.05）。FTZ含药血清增强了野生型小鼠细胞β-catenin的磷酸化水平（P<0.05）,但是在Mekk2-/-小鼠细胞中则明显降低（P<0.05）。FTZ含药血清和FGF2干预后的原代细胞中,p-MEKK2/3表达水平均比不干预时细胞增强（P<0.05）,且二者提高水平不存在明显差异（P>0.05）。FTZ含药血清和Wnt3a均促进β-catenin活化,而FTZ含药血清和Wnt3a共同干预细胞后,可见β-catenin活化程度更高,效果呈累加效应（P<0.05）。结论 FTZ通过激活MEKK2通路,独立于Wnt经典通路促进β-catenin的去泛素化进程。     

NLRP3炎症小体激活介导的巨噬细胞极化在糖尿病小鼠缺血性脑卒中后心肌损伤中的作用

目的评价NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活介导的巨噬细胞极化在糖尿病小鼠缺血性脑卒中后心肌损伤中的作用。方法 4～6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠和NLRP3-/-小鼠, 通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素注射的方法构建糖尿病模型。取糖尿病野生型C57BL/6J小鼠24只和NLRP3-/-小鼠23只, 采用随机数字表分为野生型假手术组(WTD-SHAM组, n=9)、野生型缺血性脑卒中组(WTD-MCAO组, n=15)、NLRP3-/-假手术组(NLRP3-/-D-SHAM组, n=9)和NLRP3-/-缺血性脑卒中组(NLRP3-/-D-MCAO组, n=14)。采用大脑中动脉阻塞法建立缺血性脑卒中模型。于建模后3、7、14和28 d时行超声心动图和心电图检查。于建模后28 d时, 深麻醉下处死小鼠, 取心肌组织, 采用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞标志物F4/80和M2型巨噬细胞标志物CD206的mRNA表达。结果与WTD-SHAM组相比, WTD-MCAO组建模后28 d时心排血量、左心室质量和左心室校正质量均下降, 建模后14和28 d时QT间期和QTc间期均延长...     

腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠瘢痕增生中TGF-β的表达及意义

目的 探讨腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠在瘢痕形成中的作用及其机制.方法 4周大腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠和同窝野生型小鼠各12只,制作瘢痕模型,利用HE染色观察瘢痕组织厚度、横截面积变化情况.采用比色氯胺T法测量组织羟脯氨酸含量,利用Western免疫印迹测量TGF-β表达.结果 野生型组小鼠瘢痕增生明显,其厚度、横截面积比自身对照增加倍数显著大于腺苷A_(2A)受体基因敲除组小鼠(P<0.01),腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠瘢痕增生轻,羟脯氨酸含量与同窝野生型组小鼠瘢痕含量相比差异有统计学(P<0.01),野生型组小鼠瘢痕TGF-β表达比自身对照增加倍数显著大于腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠组(P<0.01).结论 腺苷A_(2A)受体基因敲除小鼠瘢痕TGF-β表达降低,瘢痕增生显著减轻.     

运动神经元生存蛋白基因敲除在顺铂致小鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨运动神经元生存蛋白(survival motor neuron, SMN)基因敲除在顺铂诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)小鼠中的作用。方法构建顺铂诱导的AKI小鼠(C57BL/6)模型, 将雄性8～10周龄体重22～24 gSMN+/+野生型小鼠及SMN基因敲除杂合子(SMN+/-)小鼠随机分为4组:SMN+/+生理盐水组(野生型空白对照组, n=5)、SMN+/-生理盐水组(SMN基因敲除杂合子空白对照组, n=5)、SMN+/+顺铂组(野生型顺铂组, n=5)和SMN+/-顺铂组(SMN基因敲除杂合子顺铂组, n=5)。腹腔注射20 mg/kg顺铂溶液或0.9%生理盐水, 72 h后处死小鼠, 收集血清及肾组织。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测SMN mRNA和蛋白表达水平, 采用肌氨酸氧化酶法和脲酶法分别测定血清肌酐和尿素氮水平, PAS染色观察肾组织病理改变, TUNEL免疫荧光检测细胞凋亡水平, Western印迹和免疫组化法检测细胞凋亡标志蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和内质网应激标志蛋白CHOP的表达。结...     

丹酚酸B对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞炎症反应的影响：circACTA2在其中的作用

目的评价丹酚酸B(Sal B)对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)炎症反应的影响及circACTA2在其中的作用。方法在体实验:健康雄性C57BL/6小鼠81只, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=27):假手术组、脓毒症组和Sal B组。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型。模型制备成功后, Sal B组腹腔注射Sal B 7 mg/kg, 1次/d, 连续2 d。每组随机取20只小鼠用于造模后7 d内测定SBP、DBP、MAP、全血乳酸(Lac)浓度, 记录生存情况。造模后48 h时每组随机取7只小鼠, 取动脉血管组织, 采用免疫荧光染色法测定IL-1β表达, 分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定IL-1β、TNF-α、IL-6及其mRNA的表达, 采用qRT-PCR法测定circACTA2的表达。细胞实验:小鼠动脉VSMC培养后, 采用随机数字表法分为6组(n=3):对照组(C组)、LPS组、Sal B组、si-circACTA2+C组、si-circACTA2+LPS组和si-circACTA2+Sal B组。LPS组采用LPS(终浓度1 μg/ml...     

脓毒症大鼠体内内源性salusin-β的分布

目的探讨内源性salusin-β在脓毒症大鼠脾、胃、小肠、下丘脑组织及血清中的分布及含量变化。方法雄性SD大鼠36只,采用单纯随机抽样的方法随机分为假手术组(n=9)和脓毒症模型组(简称"模型组",n=27)。假手术组仅翻动盲肠,模型组以盲肠结扎穿刺术(CLP)制作脓毒症模型,于造模后6 h、12 h及24 h时分别处死9只大鼠,取脾、胃、小肠及下丘脑,并留取血清标本。采用酶联免疫吸附试验测定salusin-β含量。结果 1假手术组大鼠脾、胃、小肠、下丘脑及血清中均含有一定量salusin-β,且脾组织中的含量最高,明显高于其他组织(P<0.05)。2与假手术组比较,模型组CLP后6 h时大鼠脾、小肠、胃及血清中salusin-β水平开始升高且有统计学意义(P<0.05),其中脾组织和血清中在12 h时达最高,小肠组织中在24 h时达最高;胃组织中无明显变化;下丘脑组织中salusin-β水平虽在术后6 h时开始升高,仅在12 h时有统计学意义(P<0.05)。结论脓毒症大鼠体内salusin-β含量随时间依赖性改变,提示salusin-β可能与脓毒症有一定的关系。     

帕瑞昔布钠对脓毒症小鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的研究帕瑞昔布钠对脓毒症小鼠肠黏膜屏障功能的影响及可能机制。方法 21只C57BL/6小鼠随机分为三组:假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)、脓毒症模型+帕瑞昔布钠2mg/kg治疗组(P组),每组7只。术后24h用襻环结扎法检测各组小鼠小肠通透性。另21只C57BL/6小鼠随机分为三组,分组及治疗同前,术后24h处死小鼠,收集小鼠回肠。小肠组织行HE染色观察肠病理损伤。采用Western bolt法检测小肠ZO-1、Occludin、Claudin-1等紧密连接蛋白的表达。采用ELISA法检测小肠黏膜IL-6、PGE2的浓度。结果与Sham组比较,CLP组小鼠小肠明显损伤,门静脉血内FD4浓度明显升高,小肠黏膜内ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达明显减少、IL-6与PGE2浓度明显升高(P0.05)。与CLP组比较,P组小鼠小肠损伤明显减轻(P0.05),门静脉血内FD4浓度明显降低(P0.05),小肠黏膜内各蛋白表达水平明显增加、IL-6与PGE2浓度明显降低(P0.05)。结论帕瑞昔布钠治疗可以明显降低脓毒症导致的肠黏膜屏障功能损伤,其机制可能与降低肠组织炎症水平,增加肠紧密连接蛋白表达相关。     

盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时肺组织β-arrestin-2表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时肺组织p抑制蛋白-2(β-arrestin-2)表达的影响.方法 健康雌性昆明小鼠30只,6周龄,体重18～20 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=10):假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)和盐酸戊乙奎醚预先给药组(PHC组).CLP组和PHC组采用盲肠结扎并穿孔法制备脓毒症模型.PHC组于模型制备前1h时腹腔注射盐酸戊乙奎醚0.45 mg/kg,S组和CLP组于模型制备前1h时腹腔注射等容量生理盐水.模型制备后12h时,采血和收集肺泡灌洗液测定肺通透性指数,采用化学比色法测定肺组织MPO活性,采用ELISA法测定肺组织IL-6含量,采用Western blot法测定肺组织β-arrestin-2蛋白表达,采用RT-PCR法测定肺组织β-arrestin-2 mRNA表达.结果 与S组比较,CLP组肺通透性指数、肺组织MPO活性和IL-6含量均升高,肺组织β-arrestin-2蛋白表达下调,β-arrestin-2 mRNA表达上调(p＜0.05),PHC组肺通透性指数、肺组织MPO活性和IL-6含量均升高,肺组织β-arrestin-2蛋白表达上调,β-arrestin-2 mRNA表达下调(p＜0.05).与CLP组比较,PHC组肺通透性指数、肺组织MPO活件和IL-6含量均降低,肺组织β-arrestin-2蛋白表达上调,β-arrestin-2 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚预先给药减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制可能与上调肺组织β-arrestin-2的蛋白表达有关.     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤及线粒体动力学的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤(AKI)及线粒体动力学的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症AKI组(S-AKI)和脓毒症AKI+氢气组(S-AKI+H组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和S-AKI+H组于假手术或造模后1和6 h时分别吸入67%氢气+33%氧气1 h。取20只小鼠观察造模后7 d的生存情况。于造模后24 h时, 取血标本, 采用比色法测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织, HE染色后进行肾小管损伤评分, 采用ELISA法测定肾组织TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量, 采用分光光度法测定SOD和过氧化氢酶(CAT)的活性, 采用Western blot法测定动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达水平。结果与Sham组比较, S-AKI组生存率降低, 血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分、肾组织TNF-α、IL-1β和HMGB1含量升高,...     

氯沙坦对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响及其与线粒体融合-分裂的关系

目的评价氯沙坦对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响及其与线粒体融合-分裂的关系。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氯沙坦组(Sham+LOS组)、脓毒症相关性急性肾损伤组(SA-AKI组)及脓毒症相关性急性肾损伤+氯沙坦组(SA-AKI+LOS组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+LOS组及SA-AKI+LOS组分别于假手术或造模前3 d开始, 腹腔注射氯沙坦5 mg/kg, 1次/d, 连续3 d;Sham组及SA-AKI组腹腔注射等量溶剂。随机取20只小鼠, 观察术后7 d生存情况。于假手术或造模后24 h, 采用比色法测定血清BUN及Cr浓度, 采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-6和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)浓度;取肾组织, HE染色后光镜下观察病理学结果, 并行肾小管损伤评分, 采用荧光素酶法测定ATP含量, 采用JC-1法测定线粒体膜电位(MMP)水平, 采用Western blot法检测动力相关蛋白1(Drp1)及线粒体融合蛋白2...     

凉血活血方通过抑制NLRP3炎性小体活化保护脓毒症急性肺损伤小鼠的实验研究

目的:观察凉血活血方对脓毒症急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用并探索其作用机制.方法:将72只雄性C57BL/6小鼠72只,采用盲肠结扎穿刺术(CLP)制备ALI小鼠模型,将小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和凉血活血方组.凉血活血方组灌胃给予凉血活血方水煎剂(6 g/kg)连续2 d(1次/d),假手术组和模型组给予...     

DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用

目的评价DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用。方法健康雄性C57BL/6小鼠48只, 6～8周龄, 体重20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sham+5-Aza组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sepsis+5-Aza组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于CLP后24 h时处死小鼠取肺组织, 提取DNA利用比色法测定全基因组DNA甲基化水平, 提取RNA采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的mRNA表达, 确定肺湿重/干重比值, HE染色观察肺组织病理学结果, 采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、MDA含量、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与Sham组比较, Sepsis组和Sepsis+5-Aza组小鼠CLP后24 h时肺组织全基因组甲基化水平升高, DNMT1和DNMT3a的mRNA表达上调, 肺组织病理学损伤评分和肺湿重/干重比值升高, ...     

氢气对野生型及Nrf2 基因敲除型脓毒症小鼠血脑屏障损伤和认知功能障碍的影响

目的:探讨H2是否通过Nrf2信号途径保护血脑屏障(BBB)减轻脓毒症相关脑病(SAE)。方法:将152只雌性野生型(WT)和152只Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、假手术+氢气组、脓毒症模型组和氢气治疗组。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)制备小鼠脓毒症模型,假手术组和假手术+氢气组仅行开腹。假手术+氢气组和氢气治疗组分别在术后1 h和6 h开始吸入2%氢气60min。术后24h,每组随机选取20只小鼠观察并记录各组的7天存活率;每组随机挑选4只小鼠,采用EB外渗法检测BBB损伤程度;每组随机挑选4只小鼠,切取其大脑皮质,采用Western blotting法检测黏附连接蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(ZO-1)的表达水平。于术后4天将每组余下10只小鼠进行连续7天的Morris水迷宫实验,以评价其认知功能。结果:在WT小鼠中,氢气治疗组小鼠的7天存活率为60%,较脓毒症模型组的35%显著提高(P0.01);其血管外EB外渗量为[(3.68±0.18)μg/g],较脓毒症模型组[(5.24±0.06)μg/g]显著降低(P0.01);其第6～10天的逃逸潜伏期分别为[(20.86±4.99) s、(15.01±4.43) s、(15.45±4.95) s、(15.81±6.65) s、(12.37±4.15)s],较脓毒症模型组各时点[(41.62±12.94) s、(39.37±12.74) s、(36.95±9.64) s、(34.55±13.57) s、(29.45±9.13) s]显著延长(均P0.01);氢气治疗组穿越平台次数[(4.10±0.99)次]较脓毒症模型组[(1.20±0.79)次]显著增多(P0.01);氢气组治疗组小鼠大脑皮质中VE-cadherin表达水平(0.37±0.02)较脓毒症模型组(0.18±0.01)显著增高(P0.01),ZO-1水平(0.46±0.02)较脓毒症模型组(0.20±0.01)显著增高(P0.01)。以上指标差异在Nrf2-/-小鼠中均无显著差异(均P0.05)。结论:吸入2%氢气可通过Nrf2依赖途径降低微血管内皮通透性来保护BBB,从而降低小鼠SAE发生,改善认知功能。     

海马β2肾上腺素能受体激活对脓毒症相关性脑病焦虑样行为的影响

目的探讨海马β_2肾上腺素能受体激活对脓毒症相关性脑病焦虑样行为的影响。方法成年雄性C57BL/6小鼠76只,随机分为四组:sham+生理盐水组(A组,n=13)、sham+克伦特罗组(B组,n=13)、盲肠结扎穿孔(CLP)+生理盐水组(C组,n=25)、CLP+克伦特罗组(D组,n=25)。所有小鼠在术后即刻至术后15 d腹腔注射克伦特罗0.5 mg/kg或等容量的生理盐水。每组各取3只小鼠于术后第12 h处死取海马组织,检测小鼠海马内CD11b、IL-1β、IL-6及BDNF蛋白含量。每组剩余小鼠于术后第13、14天分别行旷场、高架十字迷宫实验。结果与A、B组比较,C组进入开放臂的时间缩短,次数减少;海马CD11b、IL-1β、IL-6蛋白含量明显增加,BDNF含量明显减少(P0.05);与C组比较,D组小鼠进入开放臂的时间明显延长、次数明显增加;海马CD11b、IL-1β、IL-6蛋白含量明显减少,BDNF含量明显增加(P0.05)。结论激活β_2肾上腺素能受体可以改善脓毒症相关性脑病小鼠的焦虑样行为,这可能与其抑制小胶质细胞的激活,减少炎性因子的释放,增加BDNF的含量有关。     

基于RNA-seq的脓毒症相关性脑病小鼠海马转录组分析及竞争性内源性RNA调控网络的构建

目的采用转录组测序技术(RNA-seq)筛选脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马差异表达的长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA, 构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠10只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为2组(n=5):假手术组(Sham组)和脓毒症组(Sepsis组)。Sepsis组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症模型, Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。分别于术前1 d及术后3 d时行Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测小鼠认知功能。随后Sham组随机处死3只小鼠, Sepsis组处死认知功能测试最差的3只小鼠, 取海马组织, 通过BGISEQ-500平台行转录组测序, 得到差异表达的mRNA和lncRNA, 测序结果通过深圳华大基因科技服务有限公司提供的Dr.Tom平台行可视化分析, 利用Cytoscape软件构建ceRNA调控网络。结果与Sham组比较, Sepsis组逃避潜伏期延长, 靶向限停留时间百分比和僵直时间百分比降低(P<0.05)。转录组数据分析共获得差异表达的l...     

外源性IL-6促进IL-6基因敲除小鼠移植肝再生的研究

目的 观察外源性重组白细胞介素6(rIL-6)对白细胞介素6(IL-6)基因敲除小鼠原位肝移植后存活时间和移植肝再生过程的影响.方法 动物为C57BL/6野生型小鼠和IL-6基因敲除小鼠,分为4组进行实验:基因敲除对照组,肝移植供、受者均为IL-6基因敲除小鼠；野生型对照组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者；基因敲除rIL-6组,供、受者均为IL-6基因敲除小鼠,肝移植前1h于受者皮下注射rIL-6,1 mg/kg;野生型rIL-6组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者,受者应用rIL-6,用法和用量同前组.观察受鼠的存活情况.获取移植肝,进行组织学和免疫组织化学检查.结果 供肝冷缺血时间约为50 min.基因敲除对照组受鼠平均存活2.2d,野生型对照组受鼠平均存活1.9 d,基因敲除rIL-6组受鼠平均存活＞17.6 d,野生型rIL-6组受鼠平均存活＞20.4 d.各组间存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).基因敲除对照组和野生型对照组受鼠移植肝有片状坏死和肝细胞气球样变,有极少数溴脱氧尿核苷染色阳性的细胞存在.基因敲除rIL-6组和野生型rIL-6组受鼠的移植肝无细胞坏死等改变,有散在的肝细胞溴脱氧尿核苷染色阳性.结论 外源性的IL-6能够延长IL-6基因敲除小鼠肝移植后的存活时间,促进其移植肝细胞再生.