转化生长因子-β对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及细胞外基质成分表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质(ECM)成分表达的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术,观察不同时间TGF-β1对HMCs CTGF mRNA及其蛋白质表达的影响,同时观察对Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原和纤维结合蛋白(FN)mRNA表达的影响.结果:在正常培养情况下,HMCs有CTGF mRNA及其蛋白质的表达.HMCs在TGF-β1刺激后,CTGFmRNA表达明显增加,6 h达到高峰,可持续增高到24 h;CTGF蛋白表达12 h达到高峰,可持续增高至24 h.Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达逐渐增加,24 h明显增加并达到高峰.FN mRNA12 h达到高峰,24 h后开始回落.结论:HMCs可表达CTGF.TGF-β可诱导体外培养的HMCsCTGF及ECM成分高表达.     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖以及细胞周期的影响。方法：用不含或含有高、中、低浓度PNS的RPMI-1640细胞培养液刺激体外培养的正常大鼠MC。于实验终点,运用MTT比色法测定细胞增殖情况以及PNS的细胞毒性作用;运用流式细胞术测定细胞周期。结果：PNS能够显著抑制血清诱导的大鼠MC的增殖;通过减少MC进入S＋G2/M期,从而抑制MC的有丝分裂;且在本实验浓度内（100-400μg/ml）不具有明显的诱导凋亡作用和细胞毒性。结论：PNS能通过抑制MC的有丝分裂而抑制其活化、增殖,在慢性肾脏疾病的治疗中具有一定得应用价值。     

己酮可可碱对高糖诱导肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达信号通路的影响

目的 探讨高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化及其作用通路,并且研究己酮可可碱（PTX）对CTGF表达的影响。 方法 体外培养大鼠系膜细胞,观察不同浓度的高糖在不同时间对系膜细胞转化生长因子β（TGF-β）、CTGF、 p-Smad2/3、Smad7及纤连蛋白（FN）表达的影响;并在高糖培养液中加入TGF-β中和抗体及不同浓度的PTX观察其对上述各指标表达的影响。 结果 高糖可以诱导系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA及蛋白表达增加（均P < 0.05）,且呈时间、剂量依赖性,同时伴有p-Smad2/3蛋白表达的增加及Smad7蛋白表达的减少。阻断TGF-β可使高糖诱导的CTGF mRNA及蛋白表达分别下降86.4%及91.8%（均P < 0.05）。PTX可以抑制高糖诱导的系膜细胞CTGF mRNA及蛋白表达,随着PTX浓度的增加其抑制作用更为显著（P < 0.05）,但对于TGF-β的表达没有影响。结论 高糖可通过TGF-β-Smads通路使CTGF mRNA表达增加进而影响其蛋白表达。PTX可以有效的抑制CTGF的表达而对于TGF-β的表达没有直接的抑制作用。     

转化生长因子β1对大鼠原代肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨原代培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对其表达的影响。方法：采用RT-PCR和Westernblot方法检测大鼠原代培养的肾小球系膜细胞VEGF表达及不同浓度、不同时间的TGF-β1刺激对VEGF表达的作用。结果：原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF164、120mRNA，TGF-β1呈时间依赖性增加其表达，在12h表达最高，分别为刺激前3．17、2．925倍，有统计学差异（P〈0．001）。在剂量反应曲线上，2ng／ml TGF-β1刺激作用最强，VEGF164、120mRNA表达分别为未刺激组的2．82、2．45倍，有统计学差异（P〈0．001）。与VEGF mRNA表达一致，大鼠原代肾小球系膜细胞仅见VEGF164蛋白表达，2ng／ml TGF-β1呈时间依赖性的增加VEGF 164蛋白表达，24h达高峰，为刺激前的2．37倍。结论：促进肾小球系膜细胞VEGF表达可能是TGF-β1介导肾脏损害发生、发展的机制之一。     

转化生长因子β1反义RNA对肾小球系膜细胞基质合成及分泌的影响

目的：观察转化生长因子beta1(TGF-β1）反义RNA对系膜细胞基质合成的影响。方法：构建含TGF－β1反义RNA的重组腺病毒，将重组腺病毒转染系膜细胞，用Northern blot检测转染系膜细胞TGF－β1及ColIV mRNA的含量，用免疫组化半定量分析转染的系膜细胞中TGF－β1，纤连蛋白（FN）及胶原（Col)IV蛋白水平，并与无转染的系膜细胞对照组比较其表达的变化。结果：构建了含TGF－β1反义RNA的重组腺病，重组反义TGF－β1腺病毒转染系膜细胞后，与对照组相比，在第24hTGF-β1及Col IV的mRNA无明显抑制，在48hTGF－β1及Col IV mRNA抑制率分别为22．5％，18．2％，72h TGF-β1及Col IV mRNA抑制率分别为29．5％，27．3％，免疫组织化学半定时结果显示；与对照组相比，在48h始转系膜细胞TGF－β1，FN及ColIV蛋白含量开始下降，48h TGF-β1，FN及Col IV蛋白抑制率分别为16．5％，18．2％及14．6％，72h TGF－β1，FN及ColⅣ蛋白抑制率分别为23．5％，27．3％，26．8％。结论：重组反义TGF－β1可抑制系膜细胞合成细胞外基质，在肾小球肾炎及肾小球硬化的研究及治疗中有潜在的应用价值。     

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响王宗谦周希静近年来，单纯肝素或肝素并用激素治疗肾病综合征获良好疗效。Ｐｕｒｋｅｒｓｏｎ等报道，Ｎ－Ｄｅｓｕｌｆａｔｅｄ／ＡｃｅｔｙｌａｔｅｄＨｅｐａｒｉｎ可能延缓肾衰进程，但机理尚未明。我们通过观察肝素对体外培养...     

地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子的影响

细胞粘附分子是近年免疫学研究最有活力的领域之一,其介导的细胞与细胞、细胞与基质粘附作用在免疫炎症反应等多种病理过程中起着关键性作用。目前知道,肾小球系膜细胞(MC)表面低表达细胞间粘附     

三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）表达的影响。方法：将45只Wistar雄性大鼠，适应性喂养1周，测尿蛋白阴性后，随机分为正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、三七总皂苷组，每组9只。每周测大鼠体重，每2周收集大鼠24h尿量，测24h尿蛋白定量；10周后处死大鼠，分离血清检测BUN、Scr、Cho、TG、TP和AIb，应用HE、Masson染色，观察肾组织病理学改变，免疫组化方法观察三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织TGF—Bl表达的影响。结果：三七总皂苷能够减轻阿霉素肾病大鼠肾组织病理损害，增加阿霉素肾病大鼠体重，减少尿蛋白排泄、提高血TP和Alb水平，降低BUN和scr水平改善。肾功能；正常组及假手术组肾脏固有细胞胞浆中有较少的TGF-pl表达；三七总皂苷组TGF-pl的表达与模型组相比显著减少（P〈0．05）。结论：三七总皂苷能减轻阿霉素肾病大鼠的肾脏病理损害、降低BUN、Scr、调节TG、TP和Alb水平，对阿霉素肾病大鼠肾功能有一定的保护作用，其机制可能是通过降低阿霉素肾病大鼠肾组织TGF-p1的表达而发挥作用。     

三七总皂苷对腹膜纤维化大鼠转化生长因子-β_1的影响

目的：探讨三七总皂苷对腹膜纤维化大鼠转化生长因子-β1的影响。方法：21只惠斯脱（WISTAR）大鼠分成三组：（1）对照组（n=7）：每日腹腔内加入一次生理盐水100 ml/kg;（2）模型组（n=7）：每日腹腔内加入一次4.25%葡萄糖腹透液100 ml/kg,同时在第1、3、5、7天联合脂多糖腹腔注射,按0.6 mg/kg;（3）试验组（n=7）：每日腹腔内加入一次4.25%葡萄糖腹透液100 ml/kg同时每天加入一次三七总皂苷35 mg/kg,在第1、3、5、7天联合脂多糖腹腔注射,按0.6 mg/kg;透析4周后行1 h腹膜平衡试验,并分别测定透析液和血浆尿素氮的比值（D/P）、葡萄糖重吸收值（D1/D0）、超滤容积,透析液中白细胞总数、用ELISA方法行腹膜透析液转化生长因子-β1（TGF-β1）。结果：模型组、试验组与对照组相比较,超滤量均显著下降（P〈0.05）;而透析液中TGF-β1、表达均显著增多,腹膜组织增厚也均显著增多（P〈0.05）。试验组与模型组比较,其超滤量明显改善（P〈0.05）,而透析液中TGF-β1显著减少（P〈0.05）,腹膜组织增厚明显改善（P〈0.05）。结论：PNS可以通过下调腹膜分泌TGF-β1,从而改善试验性腹膜纤维化,在一定程度上保护腹膜功能。     

金雀异黄素对血小板源生长因子诱导大鼠肾小球系膜 细胞增殖及细胞外基质的影响

大量研究证实血小板源生长因子（PDGF）尤其PDGFBB能调节多种肾脏疾病肾损害和修复的病理过程。如介导肾小球系膜细胞（MC）增殖，促进细胞外基质（ECM）积聚，促进炎症介质和细胞因子的释放等。故拮抗PDGF的作用可能是延缓肾病进展的有效方法。金雀异黄素（genistem）可影响多种细胞尤其肿瘤细胞的细胞周期调节蛋白的表达而调控细胞的增殖与凋亡．并通过调节ECM降解系统酶的活性影响基质的积聚。我们拟研究不同浓度的金雀异黄素对大鼠MC增殖、ECM合成和降解的影响，为今后的进一步研究提供依据。     

重组大鼠肝再生增强因子对系膜细胞增殖及分泌转化生长因子β的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR)对大鼠肾小球系膜细胞在白介素1β（IL－1β）刺激下生物活性的变化。方法 用^3H-TdR掺入法检测大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖情况，用ELISA法检测大鼠肾小球系膜细胞培养上清中TGF－β蛋白的含量。结果 rrALR在0.005pg/ml到0.1ng/ml的浓度范围内对IL－1β刺激下的GMC的增殖以及TGF－β的分泌有促进作用，并呈一定量效关系。而rrALR与无IL－1β刺激的大鼠GMC共培养则与对照组差异无显著性意义。结论 rrALR可促进IL－1β刺激下的GMC增殖及TGF－β的产生，具有炎症协同作用，同时对不同靶细胞具有不同作用。     

三七总苷对氧化低密度脂蛋白诱导大鼠系膜细胞的影响

目的：探讨三七总苷（PNS）对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导大鼠肾小球系膜细胞合成细胞外基质（ECM）、表达转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法：采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及TGF-β1的mRNA表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测FN、ColⅣ及TGF-β1的蛋白含量;免疫细胞化学观察核转录因子-κB（NF-κB）p65核转位。结果：OX-LDL（50μg/ml）诱导系膜细胞FN、ColⅣ及TGF-β1表达增强,NF-κB活化,p65核转位率增加;PNS（200~800μg/ml）作用一定时间后,FN、ColⅣ及TGF-β1表达降低,NF-κBp65核转位率明显低于诱导组。结论：PNS能够抑制OX-LDL诱导的系膜细胞FN、ColⅣ合成,并抑制TGF-β1表达;这种效应可能与影响NF-κB核转位有关。     

syndecan-4对碱性成纤维细胞生长因子诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的 研究syndecan-4对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导人肾小球系膜细胞(HMC)增殖及细胞外基质（ECM）分泌的影响,并探讨syndecan-4-蛋白激酶Cα（PKCα）途径在其中的作用。 方法 免疫荧光方法观察syndecan-4在HMC上的表达。筛选有效的syndecan-4-siRNA转染HMC,噻唑蓝（MTT）比色法检测HMC在bFGF不同作用时间下的增殖差异;ELISA法检测细胞上清液中的Ⅰ、Ⅳ型胶原和纤连蛋白（FN）含量;荧光定量PCR观察syndecan-4和PKCα含量的变化。 结果　syndecan-4蛋白在HMC有表达。bFGF可促进HMC的增殖及FN、Ⅳ型胶原的分泌,使得每百万看家基因中PKCα拷贝数明显增加。转染syndecan-4 siRNA后,显著降低了HMC的增殖速度（48~60 h时点,P < 0.01）、ECM分泌（FN：24 h时点,P < 0.01,48~96 h,P < 0.05;Ⅳ型胶原：72~96 h时点,P < 0.05）及PKCα含量 （0 h时点,P < 0.05,12 ~48 h时点,P < 0.01）。 结论 syndecan-4参与调控bFGF诱导HMC的增殖及ECM分泌过程。syndecan-4-PKCα途径可能在其中扮演重要作用。     

低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞产生血管内皮生长因子的影响

高脂血症可致血管内皮损伤，增加肾小球滤过膜通透性，导致蛋白尿、肾小球局灶节段硬化等肾损伤。血管内皮生长因子(vEGF)是特异性促进血管内皮细胞有丝分裂作用的生长因子，具有增加血管通透性等功能，在一些原发性肾小球疾病及代谢性疾病等所致的肾脏病变的发生过程中起一定作用…，但VEGF是否在高脂血症造成的肾脏损害中起重     

降糖通脉片对人肾小球系膜细胞及细胞外基质影响的实验研究

目的：探讨降糖通脉片对人肾小球系膜细胞（MC）及其细胞外基质（ECM）的影响。方法;采用血清药理学方法和体外人肾小球系膜细胞培养技术,观察具有清热化瘀,滋阴补气作用的中药降糖通脉片对MC增殖及其ECM成分的影响。结果：降糖通脉片具有抑制MC增殖及ECM成分中纤维连接蛋白（FN）,层粘连蛋白（LN）和IV型胶原（ColIV)的作用,该抑制作用具有一定的量效关系。结论：MC是降糖通脉片发挥治疗作用的 重要靶细胞,抑制MC增殖和ECM的产生可能是该方延缓肾小球硬化的重要机制之一。     

金雀异黄素对晚期蛋白氧化产物刺激大鼠系膜细胞转化生长因子β1分泌的影响

目的观察金雀异黄素（Gen）对晚期蛋白氧化产物（AOPPs）刺激下SD大鼠肾小球系膜细胞（MC）分泌转化生长因子β1（TGF-β1）的影响,从而了解作为大豆蛋白质主要成分的Gen对糖尿病肾脏病（DKD）系膜细胞的影响,进而探讨大豆蛋白饮食对DKD的治疗意义。方法以体外培养的SD大鼠MC为研究对象,分为正常培养的对照组（C组）、培养液中加入AOPPs的A组和加入10、50、100、200umol／LGen的G（10）、G（50）、G（100））、G（200）组以及培养液中同时加入AOPPs和Gen的A＋G（10）、A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组。酶链免疫吸附（ELLSA）法检测各组细胞培养液中TGF-β1的浓度。结果培养后第12h、24h、48h,A组细胞培养液TGF-β1含量较C组升高（P〈0．05或P〈0．01）;G（10）、G（50）组与C组无差异（P〉0．05）,G（100）、G（200）组较C组升高（P〈0．05或P〈0．01）;A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组较A组和G组降低（P〈0．05或P〈0．01）。A＋G（50）、A＋G（100）、A＋G（200）组培养后第24h较培养后第12h升高;而培养后第48h较培养后第24h升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论Gen能减少AOPP刺激下系膜细胞TGF-β1的分泌,提示大豆蛋白饮食可能对DKD患者有益。     

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

霉酚酸酯（MMF）是一种新型的免疫抑制剂。本研究旨在探讨MMF对不同浓度葡萄糖所致的系膜细胞增殖及细胞外基质增多是否有抑制作用。     

转化生长因子-β1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）瞬时受体势C6（TRPC6）表达的影响,并探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制。方法：GMC予TGF—β1 10ng／ml刺激24h后,间接免疫荧光法检测GMC TRPC6的表达;免疫印迹法观察TRPC6的表达。结果：GMC存在TRPC6的表达,以细胞膜表达为主;TGF-β1刺激GMC可有TRPC6表达下调（P〈0．05）。结论：肾小球系膜细胞存在TRPC6的表达,TGF-β1刺激后TRPC6表达下调;TGF-β1可能通过下调TRPC6参与了DN的发病。     

三七总皂苷对大鼠肝移植物细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3 表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)预处理对大鼠供肝缺血一再灌注损伤的保护作用及其对供肝细胞凋亡和Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠分别用作供、受体．采用Kamada’s袖套法建立原位肝移植模型，根据供肝切取前1h是否静脉注射PNS(50mg／kg)将大鼠随机分为PNS预处理组(PNS组)和生理盐水对照组(NS组)；另设假手术作对照组(SO组)。分别于供肝再灌注后2h、6h及24h处死各组动物，检测血清ALT及AST，HE切片作病理组织学检查，TUNEL法检测肝细胞凋亡，RT-PCR法检测Bcl-2及Caspas-3m R-NA的表达。结果供肝再灌注后2h、6h及24h各时点，PNS组大鼠血清ALT和AST水平及肝细胞凋亡指数(A1)均明显低于NS组(P＜O．05．P＜O．01)；6h及24h，PNS组大鼠肝组织Bcl-2mRNA的表达水平明显高于NS组(P＜O．05)；2h及6h，PNS组大鼠肝组织Caspase-3mRNA的表达水平明显低于NS组(P＜O．05)。结论PNS预处理大鼠供肝，可以有效地减轻移植肝的缺血／再灌注损伤和细胞凋亡，影响细胞凋亡调控基因Bcl-2和Caspase-3的表达。这可能为PNS抗细胞凋亡的机理之一。     

饰胶蛋白聚糖基因转染对大鼠肾系膜细胞转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体表达的影响

目的探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)拮抗肾小球硬化进展的作用是否与其抑制系膜细胞(MsC)转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体(TGF-βRⅠ、TGF—βRⅡ)表达有关。方法经外源性TGF-βⅠ刺激培养的大鼠肾MsC，采用RT—PCR、Western印迹法检测其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ的表达。用脂质体介导法将DCN基因转染MsC，经筛选和鉴定，用RT—PCR、Western印迹法和免疫荧光法分别观察DCN基因转染对TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ表达的影响。结果经外源性TGF-βⅠ刺激的正常MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ基因转录及蛋白表达均明显升高，且呈时间依赖性，于作用24h达高峰。与转染空载体的MsC(1P-1)相比，转染。DCN基因的MsC克隆(3D-5，7D-1)的TGF-βRⅠmRNA表达分别为对照组的20％和32％，TGF-βRⅡmRNA表达分别为对照组的64％和59％；TGF-βRⅠ蛋白表达分别为对照组的34％和25％，TGF-βRⅡ蛋白表达分别为对照组的49％和57％。同时转染DCN基因也能阻止MsC对外源性TGF-βⅠ刺激所致的两种受体表达升高作用。结论过表达DCN基因的MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和蛋白表达水平均明显降低，这可能是DCN拮抗由TGF-β介导的肾小球硬化发生的重要机制之一。