大刺中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响

目的 研究大枣中性多糖（JDP－N）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）分泌肿瘤坏死因子（TNF）及其mRNA表达水平的影响。方法 MTT法测定细胞增殖,半定量RT－PCR测定TNF－αmRNA的表达。结果 JDP－N能诱导Mφ分泌TNF,诱生TNF达峰时间约为6h,与脂多糖相比,时效关系相仿;蛋白激酶C激活在JDP－N诱导Mφ分泌TNF过程中具有关键性作用;JDP－N能促进MφTNF－αmRNA的表达。结论 JDP－N增强小鼠免疫功能的机制之一是促进Mφ分泌TNF。     

TNF—α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI—1的细胞及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF－α）或弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对人脐静脉内皮细胞（HUVECs)PAI－1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法：用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI－1的活性,用Northern印迹分析法检测PAI－1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C（PKC）或促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）抑制剂干预上述诱导实验。结果：TNF－α或mmLDL作用HUVEC后,PAI－1活性和mRNA基因表达均明显增加,促分裂原活化蛋白激酶－激酶（MAPKK）的抑制剂PD98059（60μmol/L)能明显阻断TNF－α（100U／ml)或mmLDL(50μg/ml)对PAI－1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmoo/L)和H7（15μmol/L)无显著阻断作用。结论：（1）TNFα或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI－1尖性与mRNA表达;（2）PAI－1活性提高与其mRNA表达增加有关。（3）MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI－1表达中起重要作用。     

地塞米松对肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α产生和基因表达的影响

为观察地塞米松对内毒素诱导的肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α（TNFα）的产生及其mRNA表达的影响，采用免疫学和分子生物学方法，对正常、内毒素诱导后及加入地塞米松的内毒素诱导后大鼠系膜细胞的TNFα水平及TNFαmRNA表达进行了检测。结果：（1）TNFα在正常系膜细胞中分泌量极微，TNFαmRNA的表达处于低水平；（2）内毒素诱导系膜细胞TNFα的产生及mRNA表达增加；（3）地塞米松对内毒素诱导的系膜细胞TNFα的产生及其mRNA表达有明显的抑制作用，呈剂量依赖关系。结论：地塞米松是系膜产生细胞团子TNFα的较强抑制剂。     

肿瘤坏死因子α对肾小管上皮细胞ICAM—1表达的调控

目的：研究肿瘤坏死α（TNFα）对大鼠肾小管上皮细胞表达细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的调控作用。方法：用不同浓度（1、10、50ng/ml)TNFα分别与大鼠肾小管上皮细胞（NRK－52E细胞）共同孵育1、4、12、24小时，用蛋白质印迹法（Western Blot)和逆转录聚合酶链反应技术（RT－PCR）分别观察ICAM－1的蛋白质和mRNA的表达水平。结果：正常对照组的肾小管上皮细胞低水平表达ICAM－1，在实验组中TNFα呈剂量依赖地诱导肾小管上皮细胞的ICAM－1的蛋白质和基因表达上调，蛋白质表达高峰在4小时，mRNA表达高峰在12小时。结论：肿瘤坏死因子α（TNFα）可能通过诱导肾小管上皮细胞表达ICAM－1增强而参与肾小管间质的免疫炎症反应。     

缺血再灌注损伤增加肾组织免疫原性的实验研究

目的：观察缺血再灌注损伤对肾组织免疫原性的影响。方法：在大鼠单肾热缺血再灌注损伤模型的基础上，利用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）半定量技术检测不同损伤程度的肾组织中共刺激分子B7、炎性细胞因子IL－2、TNF－α的mRNA表达水平。结果：正常和缺血肾组织中B7、TNF－α、IL－2的mRNA表达处于极低水平，再灌注后肾组织中B7、TNF－α、IL－2的mRNA的表达开始逐渐升高，并于再灌注后72h达高峰，缺血60min再灌注组的B7、IL－2、TNF－α的mRNA的表达水平明显高于缺血30min再灌注组（P＜0.05）。结论：缺血再灌注损伤使共刺激分子B7、炎性细胞因子TNF－α、IL－2的mRNA表达升高，提示缺血再灌注损伤可使移植肾免疫原性升高，炎症反应加强，这些均能促进急性排斥反应的发生。     

人外周血单核细胞体外诱导树突状细胞及鉴定

目的：建立从人外周血单核细胞体外诱导培养树突状细胞（dendritic cell,DC)的方法。方法：分离人外周血单个核细胞,以细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）,白细胞介素－4（IL－4）,肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导培养获得DC,电镜及共聚集显微镜观察其形态,流式细胞术检测细胞表面抗原,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果：从正常外周血分离得到的单核细胞,体外经重且人GM－CSF,IL－4,TNF－α的共同诱导培养,得到大量成熟DC,形态学观察可见典型DC特征,荧光激少在细胞分离器（FACS）检测表明,诱导的DC高表达HLA－DR（96％）,CD83（94．2％）,CDla(94.2%)分子,同时也高表达CD40（97．7％）,CD80（98．2％）分子,同种混合淋巴细胞反应显示,诱导的DC具有很强的激发同种T细胞增殖的能力。结论：人外周血单核细胞体外经细胞因子贯序诱导培养,可以生成大量功能成熟的DC,为进一步开展DC的基础研究和临床应用提供了可能。     

PDTC对创伤性肺损伤大鼠肺组织TNFα、IL-8含量及其mRNA表达的影响

目的 观察PDTC对创伤后肺组织TNFα、IL－8含量及其mRNA表达的影响。方法 80中大鼠分为创伤组（T组）,PDTC预处理组（P组）及对照组（C组）,利用多功能小型生物撞击机致伤,观测伤后各组0．5、1、2、4、8h肺组织TNFα、IL－8及其mRNA变化。结果 致伤后TNFα、IL－8含量及其mRNA表达明显升高,TNFα在伤后1h达到峰值,IL－8在伤后4h达到峰值;PDTC组TNFα、IL－8含量及其mRNA表达显著低于创伤组（P＜0．01）。结论 PDTC可以通过抑制TNFα、IL－8mRNA表达,减少致炎细胞因子的释放,减轻创伤后全身及肺组织的炎症损害。     

缺氧对神经细胞缺氧诱导因子—1αmRNA表达的影响

目的：提示在缺氧状态下神经细胞缺氧诱导因子－1α（HIF-1α）mRNA表达的时空规律。方法：对分离的新生SD大鼠在脑皮质神经细胞分别进行常规和缺氧培养,采用定量逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测神经细胞在不同缺氧时间HIF－1αmRNA的表达,结果：神经细胞在常氧下HIF－1αmRNA有极低的表达,在缺氧30min时表达显著上升,60min达到高峰,90min后逐渐下降。与对照组比较,各缺氧组HIF－1αmRNA的表达均有显著性差异（P＜0．01）。结论：神经细胞在缺氧早期HIF－1αmRNA表达有短暂、迅速的增加。     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。     

肿瘤坏死因子对内皮细胞组织因子表达及转录调控的影响

目的：研究肿瘤坏死因子（TNFα）对内皮细胞组织因子（TF）表达的影响,并探讨TF基因5′上游序列以及核转录因子NF－κB在该基因转录中的调控作用。方法：进行人脐静脉内皮细胞株（EVC304）及原代内皮细胞的培养。用发色底物显色法、RT－PCR和细胞原位杂交分别检测内皮细胞TF活性和mRNA水平,采用基因重组技术构建含有人TF基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,经脂质体法转染内皮细胞,检测及分析报告基因活性。凝胶电泳迁移率改变法和western印迹法检测内皮细胞NF－κB与DNA结合活性和含量。结果：100u/ml TNFα诱导内皮细胞TF活性和mRNA表达量明显增高。在TF基因上游序列－244／＋121bp存在时,TNFα可使转染内皮细胞荧光素酶表达量明显增加,－111／＋121bp存在时表达量无明显差异,而且比存在－244／＋121bp时的表达量明显降低;同样浓度TNFα作用下,内皮细胞核抽提物与NF－κB探针的结合活性高于正常对照组,核内NF－κB含量明显增加。结论：TNFα可以增强内皮细胞TF活性及基因表达,其中TF基因上游－244／－112bp序列的存在起着重要的调节作用。此外,TNFα也能促进内皮细胞NF－κB的转位和与DNA结合活性增高。