慢性乙型肝炎外周血单个核细胞内HBV-DNA与血清HBV-DNA及HBeAg表达关系的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内HBV-DNA和血清中HBV-DNA表达量、e抗原表达的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测208例慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清中HBV DNA含量,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测乙肝血清标志物。结果208例慢性乙型肝炎患者PBMC内HBV-DNA阳性106例、阴性102例。HBV-DNA(PBMC)阳性组、阴性组血清HBV-DNA定量≥1.0E5患者比例分别为91.5%(97例)、45.1%(46例)(χ2=52.12,P<0.01);HBeAg阳性率分别为76.4%(81例)、50.9%(52例)(χ2=21.55,P<0.01)。结论PBMC内HBV-DNA的检测与血清中HBV-DNA定量检测及HBeAg阳性率存在明显的正相关。提示血清HBV-DNA高载量的HBeAg阳性患者外周血单个核细胞感染HBV-DNA明显增加。     

慢性乙型肝炎患者胃粘膜HBV-DNA检测及临床意义

目的:检测慢性乙型肝炎(乙肝)患者乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA),探讨HBV与胃粘膜病变的关系。方法:选择慢性乙肝并伴有慢性胃炎的患者58例(H组)及慢性胃炎但其血清HBV标志物(HBVM)和HBV-DNA均阴性对照组52名(C组),两组均进行胃镜检查,同时取胃粘膜,H组取空腹静脉血液,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法进行血清、胃粘膜HBV-DNA含量和血清HBVM检测。结果:H组血清和胃粘膜HBV-DNA阳性例数分别为38例(65.52%)和46例(79.31%),两者相比有显著性差异(χ2=6.125,P<0.05);两者HBV-DNA含量显著正相关。H组32例血清HBeAg阳性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA均为阳性,而26例血清HBeAg阴性患者的血清和胃粘膜HBV-DNA阳性只有6例(23.1%)和14例(53.8%)。C组胃粘膜HBV-DNA全部阴性。胃镜下观察H组患者广泛存在胃窦炎,C组以慢性浅表性胃炎为主。结论:HBV存在于胃粘膜中,可能引起胃部的炎性损伤。     

肝细胞性肝癌中MAZ基因的表达及意义

目的探讨MAZ基因在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及其癌旁正常组织中的表达,分析其与HCC各临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组化法检测75例HCC及其对应癌旁正常组织中MAZ基因的表达,分析其与HCC临床病理特征及与患者预后的关系。结果 MAZ在HCC中的表达(48%,36/75)明显高于其癌旁正常组织(22.67%,17/75),组间比较差异有统计学意义(P0.05)。MAZ表达与HCC患者性别、年龄、病理分级、临床分期、TNM分期、是否合并肝硬化、是否合并乙肝病毒感染、是否有肝癌家族史以及血清AFP、CEA、γ-GT、ALT、AST和ALB水平、是否有淋巴结转移等均无明显相关性,而与肿瘤直径、吸烟与否、饮酒与否显著相关(P0.05)。HCC中MAZ阳性组和阴性组的累计生存率差异有显著性(P0.05),MAZ阳性组患者的术后无瘤生存时间明显低于阴性组,提示MAZ表达上调可能导致患者的预后更差。结论 MAZ基因表达上调可能与HCC的发生、发展密切相关。     

荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒DNA

目的：了解不同乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清HBV-DNA含量与乙肝血清免疫标志物的关系并探讨其临床意义。方法：用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法定量检测375例不同临床类型HBV感染者及70例正常人血清HBV-DNA含量。结果：血清HBsAg阳性组与HBeAg阳性组HBV-DNA的检出率及含量均明显高于HBsAg阴性组和HBeAg阴性组，且HBeAg即使阴性，不论HBeAb阳性组或阴性组均仍有较高的HBV-DNA检出率。不同临床类型HBV感染者中均有HBV-DNA的检出。结论：定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化，对乙型肝炎临床诊断及治疗均有一定的临床意义。     

慢性乙肝患者血清HBV-DNA和HBeAg定量的相关性分析

目的：研究慢性乙型肝炎病毒（chronic HBV,CHB）患者血清HBV-DNA含量与e抗原定量的相关性。方法：实时荧光定量PCR（FQ-PCR）和化学发光法（CLIA）分别测定1084例CHB患者血清HBV-DNA、HBeAg含量。结果：1084例HBV患者中HBeAg阳性组和阴性组HBV-DNA检出率分别为74.2%和23.8%,平均含量分别为（4.9±1.9）log10（copies/ml）和（3.9±1.0）log10（copies/ml）;HBV-DNA和HBeAg之间的kap-pa系数为0.49;HBV-DNA定量和HBeAg定量之间相关系数（r）为0.659,HBeAg阳性组HBV-DNA定量和HBeAg定量之间r为0.664;不同载量HBV-DNA组,HBeAg量相差显著,HBV-DNA载量高,HBeAg量也高。结论：HBeAg阳性模式的HBV-DNA阳性率及含量进一步证实了HBeAg确实是反映HBV复制活跃的一个可靠指标,但这并不意味HBeAg转阴病毒复制就停止,HBeAg阴性CHB患者血清中仍有部分患者存在乙肝病毒颗粒;HBV-DNA载量与HBeAg量之间有一定的相关性,但相关性一般;同时检测HBV-DNA和HBeAg量对乙肝患者HBV感染、复制、传染性的判断、治疗方案的选择和疗效判断有一定的指导意义。     

HBV pgRNA在HBV相关疾病中的表达及其临床意义

目的 探讨血清HBV 前基因组RNA(pgRNA)在HBV相关疾病中的表达及其临床意义。方法 收集90例慢性乙型肝炎、54例乙肝肝硬化和44例HBsAg阳性原发性肝癌患者血清样本,进行HBsAg、HBeAg、HBV DNA和HBV pgRNA检测。结果 血清HBV pgRNA水平在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中的中位数分别为7.08、5.16 和4.08 log copies/mL ,差异有统计学意义(χ^2=24.743, P <0.001)。在HBeAg阳性患者中,HBV pgRNA水平在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中逐渐降低,差异有统计学意义(χ^2=14.864, P <0.001);且血清HBV pgRNA水平与血清HBV DNA、HBsAg水平及HBeAg滴度呈正相关。而在HBeAg阴性患者中,血清HBV pgRNA水平与血清HBV DNA、HBsAg水平及HBeAg滴度无相关性。结论 血清HBV pgRNA水平在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中逐渐降低,且与HBV DNA、HBsAg水平及HBeAg滴度呈正相关。     

HBV-LP与HBV-DNA联检的临床应用

目的：探讨血清乙型肝炎病毒大蛋白与HBV-DNA联检在乙型肝炎患者诊治中的意义。方法：对162例HBV感染者及47名健康对照组血清采用ELISA检测乙型肝炎病毒大蛋白及乙型肝炎病毒标志物;FQ-PCR定量检测HBV-DNA。结果：162例HBV感染者血清中,HBV-LP浓度与HBV-DNA拷贝数间具有良好的正相关性（rs=0.64,P〈0.001）,不同HBV-DNA拷贝数组别间HBV-LP浓度存在差异显著性（P〈0.01）;HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg间均关联显著（P〈0.01）。HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg间阳性率均存在差异显著性（P〈0.05）,HBV-LP阳性率为84.57%,较HBV-DNA、HBeAg均敏感。其中HBV-LP在HBV-DNA阳性组中阳性率为91.18%（93/102）,DNA阴性组中阳性率为73.33%,均较HBeAg高;在58例HBV-DNA和HBeAg共同阴性的HBV感染血清中,HBV-LP检出42例阳性。结论：血清HBV-LP浓度与HBV-DNA联检有利于提高HBV感染者体内病毒复制、疾病进程、疗效与预后判断的血清学诊断与监测水平。     

免疫评分在肝癌患者中的预后研究

目的　探讨免疫评分及PD-L1在肝癌组织的表达情况,分析肝癌患者的免疫评分与其临床病理特征及预后的关系。 方法　采用免疫组化检测免疫评分与PD-L1在61例肝癌患者中的表达,分析PD-L1、免疫评分与临床病理特征及预后之间的关系。 结果　肝癌中免疫评分较高的表达率为26.2%,较低的表达率为73.8%。统计分析发现免疫评分与AFP增高（P<0.05）及肝内复发（P>0.05）具有相关性;而与患者年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、脉管癌栓等临床因素无相关性（P>0.05）。生存分析发现免疫评分较高患者的总生存期与无复发生存期显著高于免疫评分较低的患者（χ2=11.39,P<0.01;χ2=14.78,P<0.01）。肝癌组织PD-L1的阳性表达率为44.3%,对应癌旁低表达,具有统计学差异（χ2=7.313,P<0.01）。PD-L1阳性患者的总生存期与无复发生存期低于PD-L1阴性患者（χ2=5.598,P<0.05;χ2=10.90,P<0.01）。肝癌组织中PD-L1与免疫评分间具有负相关性（χ2=12.703,P<0.01）。 结论　免疫评分可作为患者预后的一个标志物,免疫评分高的患者预后较好,反之易早期复发且预后较差;肝癌组织PD-L1与免疫评分之间具有负相关性。     

乙肝病毒血清标记物与血清HBV-DNA的关系

目的:探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析.方法:采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物, 荧光定量PCR (FQ-PCR) 检测HBV-DNA, 比较二者之间的关系.结果:HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBeAg阳性组 HBV-DNA检出率较高, 分别为96.61%和100%.HBsAg、 HBeAg、 HBcAb阳性组HBV-DNA含量平均水平为3.86×108, HBsAg、 HBeAg阳性组HBV-DNA含量平均水平为1.73×108;HBsAg、 HBeAb、 HBcAb阳性组和HBsAg、 HBcAb阳性组检出率也较高, 达45% 以上, HBV-DNA含量平均水平分别为1.30×107和1.31×106.结论:FQ-PCR检测HBVDNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况, 在乙肝的诊断和治疗中, 不能单凭两对半的检测, 同时应做HBV-DNA的定量测定.     

甲胎蛋白异质体L3预警原发性肝癌的研究

目的 探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的检测在预警原发性肝癌中的作用.方法 对100例AFP升高肝病患者血清,应用甲胎异质体微量离心柱分离并洗脱获得AFP-L3,再同时检测原始血清中的AFP以及AFP-L3含量,计算AFP-L3在AFP中的比例,对AFP-L3异常升高者、正常者进行跟踪,结合6个月后临床诊断结果 ,分析AFP-L3升高在鉴别良性肝脏病变与预警肝癌中的作用.结果 肝癌、疑似肝癌患者与良性肝病患者中的AFP-L3阳性率差异有统计学意义(分别为81.80%、73.68%、11.80%,P＜0.05).未确诊肝癌(疑似HCC、肝病)的患者中,AFP-L3阳性的21例中有12例在6个月内被诊断为HCC,而且有6例是通过B超、CT等影像学手段被早期确诊的单发性小肝癌.AFP-L3阴性的62例标本中,6个月内有3例发生肝癌,AFP-L3阳性发生肝癌的危险率增加了11.9倍.结论 AFP-L3与AFP值无相关性,可以作为一个独立肝细胞癌诊断因子.AFP-L3的测定对于AFP升高时良、恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义.     

血清乙肝病毒大蛋白在HBeAg阴性和低水平HBV-DNA乙肝患者中的检测意义

为了探讨血清乙肝病毒大蛋白在HBeAg阴性与低水平HBV-DNA乙肝患者中的检测意义。对162例HBV感染者及47名健康对照血清采用酶联免疫吸附试验检测乙肝病毒大蛋白、乙肝病毒前S1抗原、病毒前S2抗原及乙肝病毒标志物;FQ-PCR定量检测HBV-DNA。结果显示:162例HBV感染者血清中,HBV-LP浓度与HBV-DNA拷贝数间具有良好的正相关性(rs=0.64,P<0.001),不同HBV-DNA拷贝数组别间HBV-LP浓度存在差异显著性(P<0.01);HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg、HBVpreS2、HBVpreS1间均关联显著(P<0.01)。HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg、HBVpreS2、HBVpreS1间阳性率均存在差异显著性(P<0.05),HBV-LP阳性率为84.57%,较HBV-DNA、HBeAg、HBVpreS2、HB-VpreS1均敏感。其中HBeAg阴性组中HBV-LP与HBVpreS1、HBVpreS2、HBV-DNA间阳性率均存在差异显著性(P<0.05),HBV-LP阳性率为76.77%(76/99),较HBV-DNA,HBVpreS2,HBVpreS1均高(P<0.01);DNA阴性组中HBV-LP与HBVpreS2、HBVpreS1、HBeAg间阳性率均存在差异显著性(P<0.05),HBV-LP阳性率为73.33%,较HB-VpreS2、HBVpreS1、HBeAg均高。血清HBV-LP浓度是反映血清HBeAg阴性和低水平DNA的HBV感染者体内病毒复制、疾病进程、疗效与预后判断的新的敏感监测指标。     

乙型肝炎异常血清学诊断模式与HBV-DNA载量的相关性研究

目的探讨乙型肝炎异常血清学诊断模式与HBV-DNA的关系.方法对94例慢性HBV携带患者,根据血清学结果,把病例分A、B、C、D四组,分别采用化学发光法(CLIA)定量检测HBV标志物;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测HBV-DNA载量.结果A组患者HBsAg和HBsAb同时阳性,HBV-DNA阳性率为96.9％ (31/32);B组患者HBeAg和HBeAb同时阳性,HBV-DNA阳性率为90.0％(18/20),两组间比较差异无统计学意义(x2=2.95,P＞0.05).C组患者HBsAg阴性而HBeAg阳性,HBV-DNA阳性率为64.3％(9/14),C组与A、B组比较差异有统计学意义(x2=32.56和23.41,P＜0.05).结论在受检患者各种异常模式中,均存在HBV-DNA不同程度的复制.HBeAg阳性和HBV-DNA检测结果呈正相关.     

Pre S1、HBV-DNA及乙肝五项指标对乙型肝炎肝脏纤维化诊断的临床价值

目的分析血清前S1抗原(Pre S1)、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)及乙肝五项指标对乙型肝炎肝脏纤维化诊断的临床价值。方法选取2017年1月至2019年2月我院收治的乙型肝炎患者276例,其中慢性乙型肝炎228例(轻度、中度、重度分别89、80、59例)、肝硬化48例,分析其血清Pre S1、HBV-DNA载量、乙肝五项指标、肝纤维化指标[血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ型)、层连蛋白(LN)、透明质酸(HA)]水平,对比不同乙型肝炎患者的HBV-DNA载量、乙肝五项者指标的差异,采用Spearman法分析相关性。结果肝硬化患者血清Pre S1阳性率、HBV-DNA载量均高于慢性乙型肝炎(P<0.05);肝硬化组血清PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平较慢性乙型肝炎者高,且在慢性乙型肝炎中随病情加重,患者PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平上升(P<0.05);随HBV DNA载量增加,乙型肝炎患者血清Pre S1阳性率及血清PCⅢ、CⅣ、LN、HA水平增加(P<0.05);大三阳组Pre S1阳性率、HBV-DNA载量均高于其他各组(P<0.05),小三阳组Pre S1阳性率、HBV-DNA载量也高于除大三阳组外的其他各组(P<0.05);Spearman相关分析显示,乙型肝炎患者血清Pre S1阳性率、HBV-DNA载量与乙肝大三阳、小三阳及血清PCⅢ、LN均存呈正相关,Pre S1阳性率与HBV-DNA载量也呈正相关(P<0.05)。结论Pre S1、HBV-DNA及乙肝五项指标均可较好判断乙型肝炎患者肝脏纤维化程度,值得在基层医院推广。     

Serum hepatitis B virus DNA: relationship with the e-antigen and anti-e status in chronic carriers

The relationship between serum Hepatitis B virus DNA (HBV-DNA) and the Hepatitis B e-antigen/ anti-Hepatitis Be (HBeAg/anti-HBe) serological status in Malaysians was studied. 212 cases of asymptomatic HBV carriers were recruited for this study. 92 cases were positive for the HBeAg at the point of recruitment. 85 (92.4%) of these patients tested positive for HBV-DNA, of whom 55 (64.7%) had levels over 100pg/ml of serum. Three of the remaining 7 HBeAg positive cases who were negative for HBV-DNA subsequently seroconverted. The other 4 cases remained negative for HBV-DNA for periods of 6-12 months. Out of 113 cases who were anti-HBe positive, 12 (10.6%) gave a positive HBV-DNA result. 2 of these 12 patients were recent seroconverters; the remaining cases had transiently increased viral replicative activity which later subsided. 7 out of the 212 carriers were in the e-window period; all 7 tested negative for HBV-DNA. Our data confirm a high frequency of HBV-DNA in HBeAg positive carriers and a negative correlation between HBV-DNA and anti-HBe. An atypical profile of anti-HBe associated with HBV-DNA was observed in 10.6% of the carriers. An inverse relationship between serum HBV-DNA levels and age was also observed.     

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA与HBsAg、HBeAg的相关性分析

目的 研究e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血中HBV-DNA载量与乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）的相关性,及其在不同性别、年龄群体中的差异.方法 收集319例e抗原阳性慢性乙肝患者血清,采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量,用时间分辨免疫荧光法检测HBsAg和HBeAg的浓度,利用SPSS软件做统计分析.结果 HBV-DNA载量与HBsAg含量有良好的相关性（r=0.514,P〈0.001）;与HBeAg含量有相关（r=0.337,P〈0.001）;女性的HBeAg水平要高于男性患者（P〈0.05）;年龄（31～50）岁组、〉50岁组的HBV-DNA、HBsAg 及HBeAg值皆高于年龄 〈30岁组 （P〈0.001）.结论 e抗原阳性慢性乙型肝炎患者血清中HBV-DNA载量与HBsAg、HBeAg定量水平皆有相关性,其中与HBsAg相关性更佳.     

Quantitative assessment of hepatitis B virus DNA in chronic hepatitis B: comparison of two solution hybridization assays

We compared two solution hybridization assays, the AffiProbe assay (Orion Corporation) and the Abbott HBV-DNA assay (Abbott), for quantitative measurement of hepatitis B virus (HBV) DNA in serum samples obtained from chronic hepatitis B surface antigen (HBsAg) carriers. Forty transversally collected (group 1) and 83 serially collected (group 2) serum samples from chronic hepatitis B patients were tested with both assays. The serial serum samples were obtained from 6 patients who underwent α-interferon therapy with different outcomes (nonresponse, hepatitis B e antigen [HBeAg] seroconversion, HBeAg and HBsAg seroconversion). In group 1 a good correlation (r = 0.91; P < 0.001) was found between the HBV-DNA results of the two assays. Two samples (5%) were HBV-DNA positive according to the Abbott but negative according to the AffiProbe assay; for all other samples the HBV-DNA status corresponded. In group 2 the assays gave colinear HBV-DNA results during follow-up of 5 of the 6 patients (correlation for the total group: r = 0.90; P < 0.001). Nevertheless, in both groups the AffiProbe assay yielded about 5–10 times higher HBV-DNA levels than the Abbott HBV-DNA assay (P < 0.001). These discordant results were most probably due to standardization differences of the positive control samples of the two test systems. This observation underlines the need for international standardization of HBV-DNA and uniform reference panels. © 1993 Wiley-Liss, Inc.     

乙型肝炎病毒YMDD变异与HBV DNA、HBeAg定量值相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者在服用拉米夫定后发生YMDD变异与否其HBV DNA与HBeAg定量值之间是否存在相关关系。方法聚合酶链反应（PCR）荧光定量法测定CHB患者治疗前后的HBV DNA、YMDD变异,同时微粒子酶免疫分析法检测其HBeAg定量值。结果218份标本同时检测HBV DNA和HBeAg定量值,对两指标前后两次的升降率进行相关性分析,发现无显著相关性（r=0.3153,P〉0.05）。12例发生YMDD变异（变异组）和25例YMDD野生型（野生组）发生HBeAg血清转换者分别为3例和15例,差异有统计学意义（χ2=3.976,P〈0.05）;变异组和野生组HBV DNA对数值分别为（4.15±1.78）和（2.72±1.58）,差异有统计学意义（P〈0.01）;变异组和野生组HBV DNA、HBeAg定量值分别做相关性分析,发现变异组r=0.5552,有显著相关性（P〈0.05）,野生组r=0.2683,无显著相关性（P〉0.05）。结论拉米夫定抗病毒治疗过程中HBV DNA和HBeAg滴度变化无显著相关性,YMDD变异组血清转换率和持续转换率明显低于无变异组,HBV DNA和HBeAg始终维持在较高水平。