生长激素和细胞因子对兔关节软骨细胞增殖和基质分泌的影响

目的：探索生长激素对体外培养的关节软骨细胞的影响及其与细胞因子的关系，为生长激素在软骨组织工程中的应用提供依据。 方法：实验于2003-11／2004-03在南京医科大学分子生物研究所完成。消化获取3个月龄新西兰兔关节软骨细胞，随机分为胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1、生长激素、生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ、无因子对照组进行培养，每组16孔细胞。以噻唑蓝法检测各组细胞增殖率、阿新蓝染色法检测各组细胞聚胺多糖分泌量。 结果：①各处理组细胞增殖率均高于对照组（P〈0．05），生长激素和细胞因子均能促进软骨细胞增殖，其中胰岛素样生长因子Ⅰ＋生长激素组细胞增殖最显著，是对照组的2．17倍[噻唑蓝法检测不同组吸光度：无因子对照组为0．199&;#177;20．05，转化生长因子β1组为0．317&;#177;20．067，胰岛素样生长因子I组为0．384&;#177;0．084，生长激素组为0．252&;#177;20．056，生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ组为0．433&;#177;20．080]。②各处理组培养上清聚胺多糖含量均高于对照组（P〈0．05），生长激素和细胞因子均能促进软骨细胞基质分泌．其中胰岛素样生长因子Ⅰ＋生长激素组聚胺多糖含量最高，是对照组的2．10倍[阿新兰染色法检测不同因子组上清聚胺多糖含量：无因子对照组为（49．69&;#177;1．37）mg／L，转化生长因子131组为（80．10&;#177;1．42）mg／L，胰岛素样生长因子Ⅰ组为（88．44&;#177;1．68）mg/L，生长激素组为（67．73&;#177;1．56）mg／L，生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ组为（104．47&;#177;1．86）mg／L]。 结论：生长激素也有促进体外培养的关节软骨细胞增殖和基质合成作用，胰岛素样生长因子Ⅰ与生长激素联用有协同作用。     

后肢固定大鼠股骨内生长激素及胰岛素样生长因子I和生长抑素水平的改变(英文)

背景:骨组织内,骨形成和吸收之间的平衡主要与全身和局部的激素和生长因子活性有关,肢体固定能导致骨吸收增加及骨形成减少,从而诱发骨质疏松,但生长因子与骨质疏松之间的关系有待进一步认识。目的:通过大鼠后肢固定模型,观察大鼠股骨组织内的生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度变化。设计:随机对照观察实验。材料:6月龄清洁级健康雄性SD大鼠50只,体质量290～320g,随机分为固定组40只和对照组10只。方法:实验于2002-02/2003-01在青岛大学医学院附属医院创伤外科完成。固定组大鼠右后肢用胶布固定于腹部,随机分为4组,每组10只,分别于1,2,4和8周腹腔内麻醉后处死大鼠。对照组大鼠于8周处死,除未进行固定外,其他处理方法与固定组一致。主要观察指标:对照组大鼠和固定1,2,4和8周大鼠股骨组织提取液中生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度。结果:50只大鼠均进入结果分析。生长激素水平在固定第8周组比对照组明显升高[(41.80±8.39),(19.86±4.21)μg/g,P<0.05];而股骨内的胰岛素样生长因子Ⅰ在第2周出现最高峰,明显高于对照组[(758.23±23.12),(499.60±18.76)μg/g,P<0.05],但在第4周恢复到对照组水平,在第8周明显减少[(258.65±5.76)μg/g,P<0.05]。生长抑素在固定的第8周明显高于对照组[(51.69±2.36),(34.63±8.85)μg/g,P<0.05]。结论:生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ不仅和骨形成有关,且在固定增加骨吸收的情况下,可以引起这些肽类的浓度升高,可能与骨吸收有关。     

后肢固定大鼠股骨内生长激素及胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素水平的改变

背景骨组织内,骨形成和吸收之间的平衡主要与全身和局部的激素和生长因子活性有关,肢体固定能导致骨吸收增加及骨形成减少,从而诱发骨质疏松,但生长因子与骨质疏松之间的关系有待进一步认识.目的通过大鼠后肢固定模型,观察大鼠股骨组织内的生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度变化.设计随机对照观察实验.材料6月龄清洁级健康雄性SD大鼠50只,体质量290～320 g,随机分为固定组40只和对照组10只.方法实验于2002-02/2003-01在青岛大学医学院附属医院创伤外科完成.固定组大鼠右后肢用胶布固定于腹部,随机分为4组,每组10只,分别于1,2,4和8周腹腔内麻醉后处死大鼠.对照组大鼠于8周处死,除未进行固定外,其他处理方法与固定组一致.主要观察指标对照组大鼠和固定1,2,4和8周大鼠股骨组织提取液中生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度.结果50只大鼠均进入结果分析.生长激素水平在固定第8周组比对照组明显升高[(41.80±8.39),(19.86±4.21)μg/g,P＜0.05];而股骨内的胰岛素样生长因子Ⅰ在第2周出现最高峰,明显高于对照组[(758.23±23.12),(499.60±18.76)μg/g,P＜0.05],但在第4周恢复到对照组水平,在第8周明显减少[(258.65±5.76)μg/g,P＜0.05].生长抑素在固定的第8周明显高于对照组[(51.69±2.36),(34.63±8.85)μg/g,P＜0.05].结论生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ不仅和骨形成有关,且在固定增加骨吸收的情况下,可以引起这些肽类的浓度升高,可能与骨吸收有关.     

大鼠股骨骨折合并脑损伤骨折愈合过程中胰岛素样生长因子Ⅰ在血清和骨痂中的表达

目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ在大鼠血清和骨痂中的表达，及其对骨折合并脑损伤骨折愈合的作用。 方法：实验于2005—01／09在华北煤炭医学院附属医院骨科实验室完成。12周雄性Sprague—Dawley大鼠64只，随机数字法分成4组，正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组。建立大鼠脑损伤和股骨骨折模型。分别于2周和3周取材，每个时间点每组8只，拍骨折股骨X射线片，采用酶联免疫吸附法测血清中胰岛素样生长因子Ⅰ的浓度，取骨折端上下5mm组织作组织形态学染色（苏木精-伊红染色）和SP法免疫组织化学染色，观测骨折愈合情况和胰岛素样生长因子Ⅰ的表达。 结果：①血清中胰岛素样生长因子Ⅰ浓度：同一时间点单纯脑损伤组和骨折合并脑损伤组均高于正常对照组和单纯骨折组，单纯脑损伤组和骨折合并脑损伤组相似，正常对照组和单纯骨折组相似；脑损伤组和骨折合并脑损伤组2周时高于3周时，正常对照组在2周和3周时比较差异无统计学意义，单纯骨折组在2周和3周时比较差异无统计学意义[2周正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组、3周正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组分别为（414．74&;#177;81．32），（579．98&;#177;73．30），（397．37&;#177;70．68），（569．95&;#177;65．13），（350．07&;#177;41．10），（433．37&;#177;53．78），（328．13&;#177;49．27），（454．26&;#177;93．26）μg／L]。②免疫组织化学分析骨折端组织平均阳性细胞百分数：骨折合并脑损伤组均高于单纯骨折组，单纯骨折组2周与3周时比较差异无统计学意义，骨折合并脑损伤组2周与3周时比较差异无统计学意义[2周单纯骨折组、骨折合并脑损伤组、3周单纯骨折组、骨折合并脑损伤组分别为（0．776&;#177;0．057），（0．853&;#177;0．044），（0．780&;#177;0．051），（0．851&;#177;0．039）]。 结论：脑损伤对骨折愈合有促进作用，胰岛素样生长因子Ⅰ可能是脑损伤促进骨折愈合的原因。     

重组人生长激素对老化皮肤胶原蛋白代谢的作用

目的：探讨哺乳动物细胞源性生长激素抗皮肤老化的作用机制。 方法：实验于2004—03／12在复旦大学附属金山医院动物实验室完成选择18～20月龄健康SD大鼠90只，随机数字表法分为3组，重组人生长激素0．08U／kg组，重组人生长激素0．12U／kg组，生理盐水对照组。每组30只。每组又分为用药前及用药后4，6，8．10，12周6个时间点．每个时间点5只。重组人生长激素0．08，0．12U／kg组：0．02U／mL重组人生长激素悬液分别行皮下注射0．08，0．12U／kg，3次／周，共12周一生理盐水对照组：以生理盐水皮下注射．另选取10只2～3月龄正常SD大鼠为空白对照组．于各时间点切取大鼠背部标记区的皮肤组织．行Masson染色并测定皮肤胶原厚度，反转录-聚合酶链反应检测皮肤转化生氐因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达。 结果：纳入动物100只，均进入结果分析。①大鼠皮肤胶原厚度：重组人生长激素0．08U／kg组注射8周胶原开始增厚，重组人生长激素0．12U／kg组第6周胶原开始增厚，厚度明显大于生理盐水对照组[别为（787&;#177;18），（766＋20）．（649&;#177;50）μm，P〈0．05]，与空白对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②重组人生长激素0．08，0．12U／kg组转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达高于生理盐水对照组（以往射4周为例，转化生长因子βI型受体分别为0.321&;#177;0．011．0334＋0．013，0．000＋0．000；转化生长因子βⅡ型受体分别为0．297&;#177;0．009，0．541&;#177;0．025，0．000＋0．000，P〈0．05）。 结论：重组人生长激素可上凋皮肤转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体mRNA的表达，促进胶原增殖而发挥抗皮肤老化作用：     

糖皮质激素性骨质疏松骨保护素表达与骨密度的相关性

目的：探讨糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨保护素在骨骼局部的表达，及其对骨密度变化的影响。 方法：实验于2005-01／2006—03在解放军总医院骨科实验室完成。选择6月龄雄性Wistar大鼠48只，随机数字表法分为实验组和对照组，各24只。实验组大鼠给予地塞米松1mg／kg肌肉注射，1次／d；对照组大鼠给予等量生理盐水肌注。两组大鼠给药后2，4，8，12周各处死6只，取松质骨（腰椎）和皮质骨（股骨干），进行骨密度值测量、骨组织形态学观察及骨保护素免疫组织化学染色，并进行图像处理和统计分析。 结果：纳入动物48只，均进入结果分析。①实验组大鼠腰椎骨密度给药后2，4，8，12周与对照组相比均明显下降分别为（0．175&;#177;0．013），（0．212&;#177;0．018）g／cm^2；（0．152&;#177;0．021），（0．211&;#177;-0．019）g／cm^2；（0．129&;#177;0．014），（0．213&;#177;0．015）g／cm^2；（0．113&;#177;0．016），（0．212&;#177;0．015）g／cm^2，P〈0．01]，给药后12周较2周下降更为显著（P〈0．01）；股骨干骨密度给药后2周无明显差异（P〉0．05），给药后4周开始下降[分别为（0．226&;#177;0．013），（0．244&;#177;0．015）g／cm^2,P〈0．05]，给药后8，12周均明显下降[分别为（0.204&;#177;0．014），（0.238&;#177;0．015）g／cm^2；（0．186&;#177;0．016），（0．240&;#177;0．013）g／cm^2，P〈0、01]。②实验组骨小梁排列稀疏，数目减少，小梁明显变细、间距加宽，股骨干中段骨皮质厚度变薄，12周多视野计数可见破骨细胞增多（P〈0．01）。③实验组给药后2周腰椎的骨保护素组织化学染色明显减低4周股骨干内亦明显减低，并且随着给药时间的延长逐渐减低。 结论：糖皮质激素抑制骨骼局部骨保护素表达，并且与局部破骨细胞的增多、骨密度降低密切相关，继发了渐进性骨质丢失，可能参与并促进了骨质疏松的形成。     

转基因同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层缺损

目的：观察转人胰岛素样生长因子Ⅰ基因同种异体组织工程软骨对兔膝关节软骨全层缺损的修复作用。 方法：实验于2004～08／2005—08在军事兽医研究所病毒室及长春生物制品研究所实验室完成。①取出生28d新西兰白兔的关节软骨，采用机械分离及Ⅱ型胶原酶消化法获得分离的兔软骨细胞，用单层培养扩增。②用脂质体法使胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞。③以经过转染的兔关节软骨细胞作为种子细胞，牛Ⅰ型胶原作为支架，体外构建转基因同种异体组织工程软骨。④5个月龄的新西兰白兔80只制备关节软骨缺损模型，分别移植入不同组别的移植物：空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组，分别于术后4，8，16，24周处死各组动物4只取材，观察兔膝关节软骨全层缺损的修复情况。结果：①G418培养液筛选结果：通过G-418对于兔关节软骨细胞的最小致死剂量的测定得出，G418对软骨细胞的最小致死剂量为0．4g／L。转染后软骨细胞经0．4g／L G418筛选，2周后得到抗G418的阳性细胞克隆，而未转染细胞在含G418的培养液中逐渐全部死亡，初步证明人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的转染成功。②原位杂交检测结果：转染软骨细胞胞浆中有氯化镍紫蓝色颗粒阳性杂交信号说明有人胰岛素样生长因子1mRNA的表达；未转染细胞则未见阳性信号。③免疫组织化学检测结果：在转染的软骨细胞胞浆中有棕黄色颗粒样阳性信号，说明有Ⅱ型胶原蛋白表达，证明稳定表达人胰岛素样生长因子Ⅰ的转染软骨细胞保持Ⅱ型胶原的表达。④软骨缺损修复后的组织学评价结果：在试验所观察的24周内，软骨基本稳定，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因组织工程软骨显示出强烈的软骨基质分泌能力。转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对软骨缺损的修复效果明显优于空白对照组和单纯软骨细胞附和支架组[空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组修复软骨的组织学评分：术后4周为（12．00&;#177;0．79），（11．00&;#177;0．81），（8．10&;#177;0．90），（5．80&;#177;1．03），（5．20&;#177;0．46）分；术后8周为（10．20&;#177;0．96），（10．10&;#177;1．19），（7．10&;#177;1．34），（4．90&;#177;1．15），（4．00&;#177;0．58）分；术后16周为（8．00&;#177;1．24），（8．50&;#177;1．79），（5．20&;#177;1．88），（4．00&;#177;1．82），（2．00&;#177;1．96）分；术后24周为（7．00&;#177;0．90），（6．50&;#177;2．13），（4．30&;#177;2．00），（3．00&;#177;2．13），（1．20&;#177;0．78）分，P〈0．05]. 结论：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞后可以在细胞中表达，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对兔关节软骨全层缺损的修复效果明显。为进一步转基因组织工程软骨实验提供了依据。     

不同剂量铁对高能饲料诱导肥胖大鼠体质量、体脂及血瘦素的干预效果

目的：探讨不同剂量铁对高能饲料诱导的肥胖大鼠体质量、体脂及胰岛素、瘦素、生长激素的影响。方法：实验在哈尔滨医科大学公共卫生学院完成。将高能、高脂饲料诱导的肥胖大鼠45只按体质量随机分为5组，每组9只，分别给予含缺铁、正常铁、5倍、10倍和20倍铁的高能、高脂饲料，喂养7周，记录给食量和摄食量，检测血脂、瘦素、胰岛素、生长激素及体质量、体脂。绪果：45只实验大鼠均进入结果分析。补铁对肥胖大鼠体质量、三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白、胰岛素和生长激素无显著性影响（P〉0．05），但可使体脂含量降低[正常铁组（4．82&;#177;1．28）％，5倍铁组（3．60&;#177;0．89）％，10倍铁组（3．72&;#177;0．81）％，20倍铁组（3．66&;#177;1.34）％，各组与正常铁组比较，P〈0．01]，血瘦素水平下降[正常铁组（8．49&;#177;1．97）μg／L，5倍铁组（7．31&;#177;1．18）μg／L，10倍铁组（7．03&;#177;1.48）μg／L，20倍铁组（7.47&;#177;1．07）μ／L，P〈0．051。结论：补铁可使肥胖大鼠脂肪分解，改善肥胖引起的高血瘦素水平。     

滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素和长骨干骺端胰岛素样生长因子1基因表达的调节

目的：观察滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素、K骨干骺端胰岛紊样生长因子1基因表达的影响，探讨中药对垂体．长骨干骺端促生长机能的调节作用。方法：实验于2002—09／2003—03在上海瑞金医院完成。将青春期SD雌性大白鼠共22只分为对照组和实验组，每组11只。对照组：喂饲生理盐水1个月，5mL／次，1次／d；实验组：喂饲滋阴泻火中药合剂（由生地12g。炙龟板12g，黄柏9g，知母9g等组成；均由上海复旦大学附属儿科医院中药制剂室煎制成浓缩合剂，每毫升约古生药3g。）1个月，5mL／次，1次／d。疗程结束后，动物处死，取出垂体及左后肢骨干骺端，提取总mRNA。采用实时荧光RT-PCR定量检测技术，检测垂体生长激素mRNA，长骨干骺端胰岛素样生长因子1mRNA表达水平。实时荧光RT-PCR定基检测方法：①垂体、长骨干骺端总RNA提取采用一步法。并逆转录合成cDNA，PCR扩增产物经15g／L琼脂糖电泳后，纯化，制备标准曲线。并扩增。②垂体生长激素扩增条件：先94℃2min，然后94℃变性10s，58℃退火30s。72℃延长20s，3个步骤作为1个循环，共扩增40个循环。长骨干骺端胰岛索样生长因子1扩增条件：先94℃3min，然后94℃变性10s，60气退火20s，72℃延长20s，3个步骤作为1个循环，共扩增40个循环。经过t检验处理，比较两组间垂体生长激素及长骨干骺端胰岛索样生长因子1基因表达水平的变化，观察滋阴泻火中药合剂对上述指标基因表达的影响。结果：实验动物22只，生理盐水和中药灌胃时误灌入气管窒息而死洛1只。进入结果分析20只。①实验组生长激素cDNA的复制数明最低于对照组[（7．08&;#177;1．20）&;#215;10^7，（19．38&;#177;6．69）&;#215;10^7；t=5．728，P〈0．051，且扩增片段为1条长度为533bp的条带，未见其他非特异性条带。②实验组干骺端胰岛素样生长因子1cDNA复制数明显低于对照组[（2．28&;#177;0．65&;#215;10^2），（21．41&;#177;5．85&;#215;10^2；t=10．268，P〈0．05]；电泳图显示干骺端胰岛素样生长因子1cDNA扩增片段为一条长度为202bp的条带，未见其他非特异性条带。结论：滋阴泻火中药合剂可在转录水平调节腺垂体生长激索及长骨于骺端软骨细胞胰岛素样生长因子1的基因表达，从而调整生长激素-胰岛素样生长因子1轴的功能活动。     

骨质疏松症大鼠白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶的表达特征

背景：白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶均参与骨代谢过程，其与骨质疏松的发生有相关性。 目的：观察白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松大鼠中的表达特征。 设计：随机分组观察对比实验。 单位：深圳市人民医院（暨南大学医学院第二附属医院）骨科。 材料：实验于2002—01／2003-01在深圳市人民医院动物实验室及中心实验室完成。6月龄雌性SD大鼠60只，平均体质量250g，随机分为3组：去势组，对照组，空白组，每组20只。方法：去势组手术切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型；对照组开腹后将卵巢提出腹腔后还纳关腹；空白组不行任何处理。分别于术后2，3，4，5，6个月后每组随机抽出大鼠4只，进行骨密度、骨钙素、白细胞介素6及碱性磷酸酶检测。 主要观察指标：大鼠全身骨密度、血清骨钙素、血清白细胞介素6及血清骨碱性磷酸酶变化。 结果：60只大鼠均进入结果分析。①大鼠骨密度测量结果：4，5，6个月去势组骨密度较对照组和空白组明显下降[4个月：（0．1395&;#177;0．0078），（0．147&;#177;0．0008），（0．1459&;#177;0．0029）g／cm^2．5个月：（0．1379&;#177;0．0009）．（0．1456&;#177;0．0008），（0．1447&;#177;0．0005）g／cm^2，6个月：（0．1226&;#177;0．0004）．（0．1450&;#177;0．0021），（0．1440&;#177;0．0009）g／cm^2，P〈0．05或〈0．011。②大鼠血清骨钙素测量结果：4个月后去势组骨钙素显著高于对照组与空白组（P〉0．05）。③大鼠白细胞介素6检测结果：各时间点去势组白细胞介素6均显著高对照组与空白组（P〉0．05）④大鼠血清骨碱性磷酸酶：4，5，6个月去势组骨碱性磷酸酶显著高于对照组与空白组[（2026&;#177;4）比（1247&;#177;12），（1291&;#177;7）nkat／L，（2342&;#177;9）比（1273&;#177;18），（1342&;#177;12）nkat／L．（2633&;#177;15）比（1340&;#177;9），（1357&;#177;8）nkat／L，P〈0．05] 结论：在骨质疏松症大鼠中骨密度显著降低，白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松症大鼠中有显著表达，可作为骨质疏松症的诊断及筛查指标。     

葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松性骨折愈合的促进作用

目的：观察葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松性骨折愈合情况的影响。 方法：实验于2005—02／2006—01在解放军第四五四医院骨科和南京大学药理教研室完成，选择SD雌性大鼠40只，均摘除双侧卵巢，术后继续饲养2个月，建立骨质疏松模型；2个月后，利用骨折器，建立股骨闭合性骨折模型。按随机排列表法分为4组，即葛根素5，10，20mg／（kg&;#183;d）组和对照组，每组10只大鼠。术后葛根素5，10，20ms／（kg&;#183;d）组大鼠给予5mg／（kg&;#183;d），10mg／（kg&;#183;d），20mg／（kg&;#183;d）的葛根素灌胃，对照组给予2mL生理盐水处理。分别于骨折后第8周，x射线观察各组大鼠骨痂生长以及骨折线的变化情况；同时利用QDR-2000型DEXA骨密度仪检测各组大鼠骨密度；采集大鼠血清，分别按试剂盒操作说明在全自动测定仪上检测骨碱性磷酸酶、骨钙素等骨形成生化指标的变化。 结果：纳入40只大鼠，全部进入结果分析，无脱失。①骨折后第8周各组大鼠骨折线的变化情况：对照组大鼠骨折线明显，无骨痂形成；葛根素5mg／（kg&;#183;d）组大鼠骨折线明显，无骨痂形成；葛根素10mg／（kg&;#183;d）组大鼠骨折线明显，有少量骨痂形成；葛根素20mg／（kg&;#183;d）组大鼠骨折线模糊，有明显骨痂形成。②骨折后第8周各组大鼠的骨密度比较：葛根素10，20mg／（kg&;#183;d）组大鼠的骨密度均显著高于对照组[（0．356&;#177;0．014，0．471&;#177;0．021,0．195&;#177;0.033）g／cm^2（P〈0.05）1。③骨折后第8周各组大鼠的骨碱性磷酸酶活性及骨钙素水平比较：葛根素10，20mg／（kg&;#183;d）组大鼠的骨碱性磷酸酶活性及骨钙素水平均显著低于对照组[（11.07&;#177;1．22，7．89&;#177;1．56，15．23&;#177;0．98）μkat／L（P〈0．05）；（13．89&;#177;1.02，10．56&;#177;1．24，19．80&;#177;1．65）μg／L（P〈0．05）]。 结论：葛根素可以调节骨代谢，促进骨形成，从而加快去卵巢大鼠骨质疏松性骨折的愈合，并呈一定的剂量依赖性。     

电针治疗对大鼠慢性压迫性脊髓损伤胰岛素样生长因子Ⅰ表达的影响

目的：探讨电针治疗对大鼠慢性压迫性脊髓损伤胰岛素样生长因子Ⅰ的表达变化及对脊髓功能的影响。方法：实验于2004-10在汕头大学医学院第二附属医院中心实验室完成。40只2月龄SD大鼠，体质量（200&;#177;50）g，随机分为对照组（n=10）和模型组（n=30）；模型组造成中度压迫（30％～60％）的慢性脊髓损伤大鼠模型后，随机分为持续压迫组（保留压迫装置）、减压组（取出压迫装置做捆绑对照）、减压加电针组（在减压的基础上进行电针治疗），每组10只。电针治疗频率0．5ms，刺激强度为10mA，30min／d，6d为1个疗程，间隔1d，进行第2个疗程，共3个疗程。观察各组大鼠联合行为评分、脊髓常规病理检查及免疫组织化学方法染色检测胰岛素样生长因子Ⅰ水平的变化。结果：4组大鼠，每组10只，均进入结果分析。①各组大鼠联合行为评分：减压加电针组（10.44&;#177;0．09）优于压迫组（39．92&;#177;0．59）和减压组（12.97&;#177;1．11），差异有显著性意义（t=49．07，P〈0．01；t=2．28，P〈0．05）。②各组大鼠脊髓苏木素-伊红染色光镜下的观察结果：减压组和减压加电针组较压迫组大鼠脊髓扁平化减轻。③各组大鼠脊髓苏木素-伊红染色光镜下的观察结果：减压组和减压加电针组脊髓损伤较压迫组减轻。④压迫节段脊髓胰岛素样生长因子Ⅰ阳性神经元计数（6个视野作阳性神经元计数）：减压加电针组（107．7&;#177;3．22）明显高于压迫组（62．9&;#177;1．8）和减压组（88．4&;#177;1．66），差异均有显著性意义（t=11．48，4．99，P均〈0．01）。结论：电针治疗能促进慢性脊髓损伤大鼠的行为功能恢复，胰岛素样生长因子Ⅰ介导电针的治疗过程，与促进行为功能恢复有关：     

鼻腔给予外源性胰岛素样生长因子后成年大鼠脑梗死体积及Bcl-2蛋白表达的变化

目的：观察经鼻腔给予外源性胰岛素样生长因子对成年大鼠局灶性脑缺血后脑梗死体积及凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达的影响。方法：实验于2003-12／2004-05在中国医科大学动物实验室进行，取70只雄性SD大鼠随机分为4组：①正常组（n=5）：不干预。②假手术组（n=5）：只分离颈总动脉及颈外动脉，不插入尼龙线。③缺血组（n=30）：采用线栓法制备大鼠持续性局灶性脑缺血模型，缺血后0．5h经鼻腔给予生理盐水5μL，间隔2min后再次给药，共10次50μL。缺血后24，48，72，96，120h，7d麻醉状态下处死动物。④胰岛素样生长因子组（n=30）：造模同模型组，缺血后0．5h经鼻腔滴注胰岛素样生长因子50μL，给药方法和处死时间同模型组。计算各组不同时间点脑梗死灶体积、Bcl-2阳性细胞数用免疫组化方法测定。结果：经补充后70只大鼠进入结果分析。①脑梗死灶体积：缺血组24，72h最大，120h变小，7d更小[（283．72&;#177;40．58），（288．74&;#177;42．03），（141．97&;#177;28．34），（101．28&;#177;19．42）mm^3]，胰岛素样生长因子组以上各个时间点均小于缺血组[（202&;#177;32．66），（200．83&;#177;36．80），（98．97&;#177;32．76），（78．92&;#177;23．24）mm^3，P〈0．01]。②Bcl-2阳性细胞数：正常组及假手术组未见，缺血组24h少量出现，72h达高峰，120h减少，7d更少[（9&;#177;3），（28&;#177;3），（17&;#177;2），（3&;#177;3）个／视野]，胰岛素样生长因子组以上各个时间点均多于缺血组[（22&;#177;3），（37&;#177;6），（26&;#177;4），（8&;#177;3）个／视野，P〈0．01]。结论：脑缺血后经鼻腔给予胰岛素样生长因子能减少模型大鼠脑梗死灶体积，上调Bcl-2蛋白表达，抑制细胞凋亡，起到脑保护作用。     

甘草苷对慢性应激抑郁模型大鼠的抗抑郁作用

目的：观察甘草苷对慢性抑郁模型大鼠的疗效，探讨其抗抑郁样作用的可能机制。 方法：实验于2005—06／07在北京大学医学部完成。72只成年雄性SD大鼠，根据其体质量采用区组随机化的方法将大鼠分为6组，每组12只：正常对照组、模型组（应激＋灌胃双蒸水）、氟西汀组（应激＋灌胃氟西汀），以及甘草苷10mg／kg、20mg／kg、40mg／kg组（应激＋灌胃甘草苷）。采用慢性应激加孤养造模，应激持续5周，从第3周起进行药物干预。盐酸氟西汀原料药由常州四药公司提供。甘草苷由北大药学院生药学生物技术研究室提供。采用糖水消耗实验和强迫游泳实验观察大鼠行为学改变。实验结束后断头取血，分离血浆和红细胞，用试剂盒测定红细胞超氧化物歧化酶活性和血浆丙二醛浓度。 结果：实验中，1只大鼠脚趾受伤，2只造模时意外溺亡，共69只大鼠进入结果分析。①慢性应激大鼠糖水消耗量较正常对照组明显降低[（8.3&;#177;0.9），（14．4&;#177;0.8）g，P〈0．01]；治疗后糖水消耗量增加，差异均具有显著性[甘草苷10、20、40mg／kg组分别为（11．4&;#177;1．2），（14．1&;#177;1．0），（14．0&;#177;0．8）g，氟西汀组为（13．0&;#177;1.9）g，P〈0．05或0．01]。②与对照组相比，模型组大鼠不动时间显著延长[（37&;#177;9），（96&;#177;10）s，P〈0．01]；与模型组相比，给药各组大鼠的不动时间均显著缩短[甘草苷10、20、40mg／kg组分别为（66&;#177;10），（26&;#177;8），（41&;#177;11）s，氟西汀组为（63&;#177;8）s，P〈0．05或0．01]。③模型组红细胞超氧化物歧化酶活性低于正常对照组[（35．4&;#177;6．8），（44.5&;#177;4．6）μkat／g，P〈0．01]；甘草苷各组后超氧化物歧化酶活性均高于模型组[20、40mg／kg组分别为（42.2&;#177;3．8）μkat／g，P〈0．05；（45．3&;#177;7．9）μkat／g，P〈0.01]；氟西汀组超氧化物歧化酶活性与模型组相比差异无显著性。④模型组血浆丙二醛浓度高于正常对照组[（3．4&;#177;0．6），（1．9&;#177;0．4）μmol／L，P〈0．01]；甘草苷治疗组血浆丙二醛浓度降低[20、40mg／kg组分别为（2.2&;#177;0.9）μmol／L，P〈0．05；（1．9&;#177;0．7）μmol／L，P〈0.01]。 结论：甘草苷可以改善抑郁模型中快感缺乏的症状，并能对抗绝望行为，支持甘草苷具有抗抑郁样作用的假设。甘草苷抗抑郁样作用可能通过提高机体超氧化物歧化酶活性，清除自由基，阻止脂质的过氧化，减少丙二醛的生成实现的。     

通络方剂对糖尿病大鼠血浆和组织血管紧张素水平的调整

目的：观察通络方剂对实验性糖尿病大鼠血浆、肾脏、心脏和腹主动脉组织血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ的影响。 方法：实验于2005—08／12在解放军第二军医大学动物中心完成。选取健康雄性SD大鼠30只，体质量160-200g，大鼠适应性饲养5d、禁食18h后，随机数字表法分为糖尿病模型组20只和正常对照组10只。用链脲佐菌素（60mg／kg，一次性腹腔注射）诱导糖尿病模型。3d后测定尾静脉末梢血糖≥16．7mmol／L，尿糖强阳性者为诱导糖尿病模型成功。将造模成功的大鼠适应性饲养1周后，再随机分成糖尿病通络方剂治疗组10只：通络方剂直接溶于蒸馏水。1．0g／（kg&;#183;d）、糖尿病未治疗组10只。糖尿病未治疗组和正常对照组均以同一时间同等剂量蒸馏水一次灌胃。在实验第8周取血并取肾、心脏及腹主动脉，采用放射免疫分析法测定血浆和各组织匀浆血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平。显著性分析采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。 结果：纳入大鼠30只，均进入结果分析。①第8周时，糖尿病未治疗组血浆、肾脏、心室肌和腹主动脉组织匀浆血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较正常对照组明显升高[血管紧张素Ⅰ（14．77&;#177;0．54），（10．31&;#177;0．37）μg／L；（5．65&;#177;1．06），（3．73&;#177;0.28）；（3．99&;#177;0．34），（2．72&;#177;0．34）；（13．05&;#177;1．29），（5．00&;#177;0．29）ng／kg；血管紧张素Ⅱ（669．61&;#177;38．15），（471．08&;#177;23．47）ng／L；（6．36&;#177;1．81），（2．64&;#177;0．25）；（3．84&;#177;0．59），（2．49&;#177;0．15）；（12．52&;#177;1．95），（4．37&;#177;0．19）ng／kg；P〈0．01]。②通络，方剂干预后血浆、肾脏、腹主动脉血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较糖尿病未治疗组明显下降。差异有显著性意义[血管紧张素Ⅰ（12．81&;#177;0．65）（14．77&;#177;0．54）μg／L；（4．06&;#177;0．46）（5．65&;#177;1．06）；（8.50&;#177;1．15），（13．05&;#177;1．29）ng／kg；血管紧张素Ⅱ（543．92&;#177;30．80），（669．61&;#177;38．15）ng／L；（3．58&;#177;0．77），（6．36&;#177;1．81）；（8．54&;#177;1．58），（12．52&;#177;1．95）ng／kg；P〈0．01]。③各组大鼠通络方剂干预后心脏血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较糖尿病未治疗组虽有下降，但其差异并无显著性意义[（3．69&;#177;0．67），（3．99&;#177;0．34）；（3．71&;#177;1．05），（3．84&;#177;0．59）ng／kg]。 结论：通络方剂能不同程度降低实验性糖尿病大鼠血浆、肾脏、心脏和腹主动脉组织血管紧张素Ⅰ和血管紧张素Ⅱ水平，对保护和延缓糖尿病肾脏及心血管并发症的发生和进展有一定意义。     

雌性大鼠运动性动情周期抑制与卵巢、子宫显微结构及相关激素水平的变化

目的：观察长时间大强度耐力运动对青春期雌性大鼠的动情周期、卵巢和子宫的显微结构及其相关激素水平表达的影响。 方法：实验于2004—03／10在山东体育学院实验中心完成。选择有正常动情周期的健康2月龄雌性SD大鼠40只，数字表法随机分为对照组、大强度运动组（n=20）。大强度运动组采用递增负荷强度的跑台运动，在中国杭州段氏PT200跑台上进行，运动1h／d，每周运动6d，持续训练10周；对照组不施加干预，饲养笼内自由活动。训练过程中每天观察两组大鼠动情周期的变化，持续10周后，当大强度运动组大鼠的动情周期长时间停留在动情间期时，即发生动情周期抑制时，和对照组一起处死，采血并分离卵巢、子宫组织，光镜观察卵巢和子宫的显微结构变化，采用放免法测定血清雌激素、孕激素、胰岛素样生长因子1水平。 结果：35只大鼠进入结果分析。①大强度运动组大鼠的动情周期均长时间停留在动情间期，表现为动情周期抑制现象。②与对照组相比，运动性动情周期抑制雌性大鼠的卵泡变小且数量变少、子宫腺数量变少且腺腔小。③运动性动情周期抑制雌性大鼠的血清雌激素、胰岛素样生长因子1和孕激素水平显著低于对照组[（17．54&;#177;9．72），（24．32&;#177;10．38）ng／L，P〈0．05；（1016．08&;#177;269．38），（1285．65&;#177;297．77）μg／L，P〈0．05；（26．84&;#177;14．09），（49．64&;#177;23．88）nmoL／L,P〈0．01]。 结论：①长时间大强度运动引起雌性大鼠发生了运动性动情周期抑制现象，导致卵巢、子宫结构的改变。②血清雌激素、孕激素分泌的降低是运动性动情周期抑制的重要原因，胰岛素样生长因子1水平与运动性动情周期抑制的发生密切相关。     

糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素的影响

目的：观察糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素对其的影响。 方法：实验于2005-09在南通大学药理教研室完成。从18周龄健康雄性SD大鼠36只中随机数字表法取28只造模，8只作为正常对照组。给予大鼠一次性腹腔注射链脲菌素造成胰岛素依赖性糖尿病模型，正常对照组给予等体积的柠檬酸盐缓冲液。给药72h后造模大鼠尾静脉取血。邻甲苯胺法测定血糖浓度，非空腹血糖大于16．0mmol／L纳入糖尿病模型。将纳入糖尿病模型的大鼠随机分为糖尿病模型组和胰岛素治疗组。造模成功后的第2天，每天给予胰岛素治疗组大鼠皮下注射精蛋白锌胰岛素注射液（长效胰岛素。40U／mL），给药时间在下午5点左右，胰岛素起初剂量4U／只，次日上午测定其血糖值，控制大鼠非空腹血糖值在10mmol／L以下（不低于3.9mmol／L），调整胰岛素用量为4-6U。2周时停止给药，并再次测定大鼠的血糖和体质量。糖尿病模型组不作任何处理。糖尿病模型组与正常对照组与胰岛素治疗组同时间进行血糖和体质量的测定。麻醉各组大鼠分离、暴露坐骨神经，测定其感觉神经动作电位潜伏期、波幅及传导速度。结果数据行方差分析。两两比较使用Scheffe检验。 结果：在28只造模SD大鼠给予链脲菌素后第72h。有15只大鼠血糖值为16．05—20．89mmol／L，超过16．0mmol／L。造模成功，纳入糖尿病模型。将造模成功的糖尿病模型大鼠分为糖尿病模型组8只，胰岛素治疗组7只；和正常对照组大鼠8只一起进入结果分析。①糖尿病模型组坐骨神经感觉神经动作电位的传导速度与波幅和正常对照组相比显著降低，差异有显著性意义[（40．34&;#177;1．68），（55．47&;#177;9．05）m／s，P〈0．01]；[（510．73&;#177;22．10），（637．37&;#177;29．28）μV，P〈0．01]；潜伏期延长[（1．54&;#177;0．13），（1．19&;#177;0．13）ms，P〈0．01]。给予胰岛素治疗后能有效逆转这些变化，坐骨神经感觉神经动作电位传导速度增加至（48．57&;#177;1．86）m／s，波幅上升至（593．72&;#177;22．62）μV，潜伏期缩短至（1．31&;#177;0．06）ms，与糖尿病模型组比较差异有显著性意义。②造模后2周糖尿病模型组血糖值显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（20．1&;#177;2．0），（5．1&;#177;0．6）mmol／L，P〈0．01]；给予胰岛素治疗后血糖值显著降低至（6．6&;#177;1．8）mmol／L，与糖尿病模型组比较差异有显著性意义（P〈0．01）。 结论：在糖尿病早期（2周）即存在感觉神经功能的损害，起始因素为高血糖，通过胰岛素控制血糖后，能有效防止神经病损。     

急性有氧运动对糖尿病大鼠瘦素水平影响的时相性

目的：观察一次性游泳运动对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠瘦素和胰岛素水平影响的时相性。 方法：实验于2003-11／2004—01在河北师范大学生命科学学院生理实验室完成。取雄性SD大鼠48只单纯随机分为6组（n=8）：对照组、运动后即刻组、运动后1，3，6，12h组。所有大鼠腹腔内注射链脲佐菌素60mg／kg制备糖尿病大鼠模型，模型成功后除对照组以外，其他5组大鼠进行一次性60min游泳运动，尾部负重3％体质量，水温30-32℃；对照组大鼠浸水后捞出。运动后相应时间点取血测血糖、血胰岛素、血瘦素，同时对血胰岛素和血瘦素水平进行相关分析。 结果：48只大鼠全部进入结果分析。①血糖：运动后即刻组、运动后1，3，6，12h组均低于对照组[（25．44&;#177;0．34），（23．57&;#177;0．12），（17．40&;#177;0．33），（7．00&;#177;0．09），（11．06&;#177;0．17），（35．33&;#177;0．30）mmol／L，P〈0．05]。②血清胰岛素：运动后即刻组、运动后1，3h组均低于对照组[（13．75&;#177;0．21），（11．64&;#177;0．28）。（13.70&;#177;0．23），（14．95&;#177;0.23）mlU／L，P〈0，05]，运动后1h组最低，至运动后6h即恢复至对照组水平[（14．56&;#177;0．22）mlU／L，P〉0．05]。③血瘦素水平：运动后即刻组低于对照组[（0．81&;#177;0．06），（1．38&;#177;0．07）μg/L，P〈0．05]，运动后1，3，6，12h组均高于运动后即刻组（P〈0．05）。④糖尿病大鼠血瘦素水平和血胰岛素水平呈显著中度正相关（R=0．416,P=0．012） 结论：①一次性60min游泳运动后即刻糖尿病大鼠血胰岛素、血瘦素水平降低，运动后1h后开始上升，至运动后6h即恢复至运动前水平。②血瘦素水平和血胰岛素水平可能相互影响。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子在周围神经损伤运动终板再生中的效应

目的：观察神经损伤晚期修复时，碱性成纤维细胞生长因子对运动终板再生的影响。方法：实验于2001-09／2003-12在广东省第二人民医院骨科实验室进行。①选用健康同龄雌性SD大白鼠50只，行右侧坐骨神经切断，12周后再吻合。②将大鼠随机分为两组，每组25只。实验组于神经缝合处放入浸有生理盐水溶解的碱性成纤维细胞生长因子1200u明胶海绵（1cm&;#215;0．5cm&;#215;0．5cm），术后患肢腓肠肌注射0．2mL生理盐水稀释的碱性成纤维细胞生长因子1200u，隔日1次至28d；对照组缝合处放入同样大小浸有生理盐水的明胶海绵，术后患肢腓肠肌注射等量生理盐水，隔日1次至28d。③术后2，4，6，8，12周实验组和对照组各取5只大鼠行神经电生理和组织学检查及超微结果观察。结果：50只大鼠均进入结果分析。①两组大鼠神经电生理检查结果：术后4，6，8周实验组运动神经传导速度比对照组显著加快（31．7&;#177;3．12）比（19．30&;#177;3．41）m／s（44．50&;#177;3．83）比（30．20&;#177;4．63）m／s，（48．08&;#177;3．45）比（37．10&;#177;3．58）m／s，F=7．15～13．65，P〈0．05）；术后6，8，12周实验组腓肠肌诱发动作电位显著高于对照组（10．12&;#177;3．10）比（6．87&;#177;3．82）mV，（15．80&;#177;3．21）比（10．12&;#177;3．23）mV，（28．70&;#177;5．61）比（19．98&;#177;4．10）mV．F=5．20-6．12，P〈0．05）。②两组大鼠腓肠肌光镜及电镜观察结果：实验组和对照组镜下均可见再生运动终板，可见初级突触间隙形成，术后第8周，运动终板进一步形成，且实验组较对照组运动终板染色深，可见次级突触间隙形成。术后12周，实验组运动终板形态与着色接近正常。结论：神经损伤晚期修复时碱性成纤维细胞生长因子可促进运动终板再生。     

外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的：通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体，阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用，以期达到预防或减少神经瘢痕的产生，提高神经修复。方法：实验于2003—04／2005—04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只，随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组，各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合，转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg／L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0．1mL；生理盐水对照组注射等量生理盐水，逐层缝合伤口。分别于术后4，12周取材，按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果：实验纳入大鼠48只，全部进入结果分析。瘢痕成分的评估：①两组术后大体观察：术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好，均未发生伤口进开、进裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻，优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果：转化生长因子B1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃．胶原纤维形成较少．以神经外膜为主；生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱，连续性差，被胶原纤维包裹，胶原沉积较多，神经外膜肥厚。④术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较：转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[（41．112&;#177;11．065），（49．561&;#177;8．097），P〈0．05]，而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[（34．223&;#177;7．130）．（32．284&;#177;5．497），P〉0．05]。神经再生功能的评估：①术后12周两组坐骨神经功能指数比较：转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[（-19．090&;#177;22．493），（-28．660&;#177;22．649），P〈0．05]。②两组术后12周电生理学检查结果：转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[（29．603&;#177;3．972），（16．215&;#177;4．619）m／s，P〈0．05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果：转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[（1．36&;#177;0．23），（0．93&;#177;0．48）；（9．40&;#177;0．86），（7．99&;#177;0．36）μm；P均〈0．05]。结论：周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中，局部应用外源性转化生长因子β1抗体，能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生，从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。