血清p185蛋白和CA153对乳腺癌患者的临床应用价值研究

目的检测乳腺癌患者血清p185蛋白表达及肿瘤标志物CA153水平,分析血清p185蛋白与肿瘤标志物CA153的相关性,探讨二者检测在乳腺癌患者中的临床应用价值。方法收集2010年至2012年间在我院住院治疗的乳腺癌55例患者术前、手术后一周血清各一份,应用免疫PCR法检测血清p185蛋白表达,化学发光法检测血清CA153水平。结果乳腺癌患者血清p185蛋白表达和血清CA153水平与临床分期均显著相关(P<0.05),血清p185蛋白表达与淋巴结转移情况无关系(P﹥0.05),血清CA153水平与淋巴结转移情况相关(P<0.05);乳腺癌患者血清p185表达与手术无关(P>0.05),手术前后血清p185蛋白表达无差异,乳腺癌患者血清CA153水平和手术相关(P<0.05),手术前血清CA153水平明显高于术后;乳腺癌患者术前血清CA153水平和p185蛋白表达相关(P<0.05),乳腺癌血清p185蛋白表达阳性患者,血清CA153水平高于阴性患者;乳腺癌患者复发或转移与血清p185蛋白表达及患者术前血清CA153水平相关(P<0.05),血清p185蛋白阳性患者复发或转移率明显高于阴性患者,术前CA153水平高的患者,复发或转移率高。结论乳腺癌患者血清p185蛋白表达与肿瘤标志物CA153水平有相关性,肿瘤标志物CA153可用于术后随访,术前检测乳腺癌患者血清p185蛋白表达与肿瘤标志物CA153水平可用于乳腺癌的预后判断。     

抗人p185单克隆抗体的体外直接抗癌效应

目的:对使用“表面表位包埋法”构建成功的抗人肿瘤抗原p185的单克隆抗体(mAb)的抑癌活性进行研究。方法:采用免疫荧光染色法、MTT法、软琼脂培养法及细胞长期增殖法等,测定3株mAb的对高表达p185的乳腺癌细胞及转染p185基因的成纤维细胞的抑制活性,以及mAb对提高癌细胞的化疗药物敏感性的效应。结果:这3株mAb均可特异性地明显抑制癌变细胞的生长,并不同程度上提高癌细胞对化疗药物的敏感性。结论:这几株mAb具有治疗p185高表达肿瘤的应用前景。     

125 I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布

目的：研究^125Ⅰ标记的抗p185抗体（鼠mAb A21、人鼠嵌合抗体A21 scFv-Fc及单链抗体A21 seFv）在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布，为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法：通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV，特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体，用细胞放射免疫分析实验，检测抗体在SKOV、细胞中的代谢。建立荷SKOV，裸鼠模型，以观察抗体的体内生物学分布。结果：体外细胞代谢实验表明，抗体在与细胞膜表面结合后，进而被内吞入细胞，在细胞内降解和脱碘，最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明，抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚，而无关抗体未出现放射性浓聚，呈全身分布。结论：mAb A21，A21 seFv-Fc和A21 scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力，可单用作高表挟D185肿瘤的诊断和治疗。     

~(125)I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布

目的:研究125I标记的抗p185抗体(鼠mAbA21、人鼠嵌合抗体A21scFv-Fc及单链抗体A21scFv)在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布,为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法:通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV3特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体,用细胞放射免疫分析实验,检测抗体在SKOV3细胞中的代谢。建立荷SKOV3裸鼠模型,以观察抗体的体内生物学分布。结果:体外细胞代谢实验表明,抗体在与细胞膜表面结合后,进而被内吞入细胞,在细胞内降解和脱碘,最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明,抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚,而无关抗体未出现放射性浓聚,呈全身分布。结论:mAbA21,A21scFv-Fc和A21scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力,可望用作高表达p185肿瘤的诊断和治疗。     

血清p185蛋白及VEGF-C水平在乳腺癌诊断中的应用及生存质量影响分析

目的:探讨免疫PCR检测的预测应用,检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达水平及意义,以及乳腺癌患者生存质量的主要影响因素并总结研究方法。方法:本院2007-05/2010-04收治的136例乳腺癌患者(实验组)的临床资料进行了回溯式分析并总结研究,并与同期收治的132例乳腺良性肿瘤患者(对照组)的生存质量进行比较。结果:两组患者血清p185蛋白的免疫检测发现,p185蛋白阳性表达对乳腺癌的临床诊断及预后存在统计学意义。血清p185阳性患者80.5%可发生复发或转移,显著高于阴性组的12.5%(P<0.05)。实验组患者术前血清VEGF-C的水平显著高于对照组患者(P<0.05),但治疗1个月后对照组VEGF-C的水平较治疗前有显著降低(P<0.05)。结论:检测血清P185蛋白以及VEGF-C的水平对于乳腺癌患者的诊断、治疗及预后判断均有显著的重要意义。p185蛋白阳性患者易复发,且VEGF-C的水平术后降低越多者治疗效果越显著,生存质量越好。     

血清TSH、TSGF与p185蛋白联合诊断乳腺癌的临床意义

目的探讨血清促甲状腺激素(TSH)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)水平、p185蛋白阳性率与乳腺癌疾病的相关性。方法选择2016年8月至2018年10月应城市人民医院收治的60例乳腺癌患者作为研究对象,按照TNM分期分为Ⅰ-Ⅱ组(Ⅰ-Ⅱ期患者)36例和Ⅲ-Ⅳ组(Ⅲ-Ⅳ期患者)24例,另选取我院同期健康体检人群60例作为对照组。对比分析3组患者血清TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率及不同病理特征下患者TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率之间的差异,分析联合检测和单独检测之间的差异。结果3组间TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Ⅰ-Ⅱ组和Ⅲ-Ⅳ组患者血清中TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。不同组织分级、TNM分期以及淋巴结转移情况的乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);而不同肿瘤直径和分子分型的乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,组织分级、TNM分期、淋巴结转移、病理状态与乳腺癌患者的TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率呈显著相关性(P<0.05)。Logistic多因素分析结果显示,血清TSH(OR=1.019,P=0.001)、TSGF(OR=1.632,P=0.001)、p185蛋白阳性率(OR=1.089,P=0.000)是乳腺癌发生的独立危险因素。ROC诊断曲线结果显示,联合血清TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率的诊断效能显著高于单独指标的诊断效能(P<0.05)。结论乳腺癌患者的血清TSH、TSGF水平及p185蛋白阳性率与病理分期显著相关,且联合检测诊断效能更高,可作为诊断的依据。     

抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达

目的：克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达。方法：用逆转录．聚合酶链反应技术（RT-PER），以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和K链的基因，重组到Fab表达载体中，在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab；根据前导肽序列设计引物，通过PER介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列；以NIH3T3／erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果：以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和k链的基因，在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性，分别将Fd段和k链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后，恢复了Fab段的抗原结合活性。单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性。但同时恢复k链后活性却有所下降。结论：成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达，为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础；进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性，为今后以PER方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴。     

锌指蛋白185(ZNF185)在小鼠睾丸精子细胞、间质细胞和支持细胞中的表达和定位北大核心CSCD

目的研究锌指蛋白185(ZNF185)在小鼠睾丸精子、间质和支持细胞中的表达变化。方法应用免疫荧光组织化学染色法检测ZNF185在精子、间质、支持细胞和睾丸组织中的定位;实时定量PCR和Western blot法分别检测三种细胞中ZNF185 mRNA和蛋白表达水平的差异。结果免疫荧光细胞分析显示ZNF185在小鼠睾丸精子、间质和支持细胞中均表达,主要分布于间质和支持细胞胞质、精子细胞头部和尾部;实时定量PCR和Western blot结果显示,支持细胞ZNF185 mRNA和蛋白表达水平显著低于间质和精子细胞。结论 ZNF185分布于小鼠睾丸不同细胞,表达量存在差异。     

增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

背景：目前牙周炎的发生发展机制仍不十分明确,治疗靶点有待探讨。近年研究发现,miR-185-5p在多种疾病中表现出抗炎作用,其在牙周炎中的作用尚不清楚。目的：探讨调节miR-185-5p表达对小鼠实验性牙周炎炎症反应的影响。方法：C57B/6J小鼠24只随机分为正常对照组、牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组,每组6只。除正常对照组外,其余组均构建实验性牙周炎模型。造模4周后,在牙周炎mi R-mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙近远中牙龈乳头注射100μL含0.5 mmol/L miR-185-5p mimics的生理盐水,在牙周炎miR-NC组注射100μL含0.5 mmol/L阴性对照miR-NC的生理盐水,在正常对照组、牙周炎对照组注射等量生理盐水。给药8周后处死小鼠,Micro-CT检测左下颌骨,qRT-PCR检测左下颌牙龈miR-185-5p、MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6基因表达,免疫组织化学染色检测小鼠右下颌牙龈MZB1、磷酸化p65核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达。结果与结论：(1)Micro-CT检测显示,与牙周炎对...     

抗c-erbB-2p185蛋白胞内区多肽单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的 研制抗c-erbB-2胞内区多肽单克隆抗体,用于乳腺癌等c-erbB-2过量表达的诊断及指导治疗。方法 合成p185蛋白胞内区多肽作为抗原,免疫BALB／C小鼠建立了一组分泌抗该多肽的特异性高亲和力单克隆抗体杂交瘤细胞系,并对该单抗的生化特性及其免疫学反应性进行了研究和测定,并与美国食品药品管理局（FDA）批准的抗c-erbB-2多克隆抗体进行了比较。结果 共获得3株稳定分泌抗p185胞内区单抗的杂交瘤细胞株。其中035－E61株单抗经过39例（T1－2N0M0）乳腺癌患者组织病理切片进行免疫组织化学染色,c-erbB2-2过量表达阳性率为26％,而乳腺纤维腺瘤组织切片没有非特异染色;流产正常胎儿器官组织切片除甲状腺、肾上腺和肾小管上皮表达外,其余均不表达。与FDA批准的DAKO公司多抗的阳性染色符合率为74％。结论 035－E61单抗可特异识别乳腺癌细胞内p185胞内区抗原。对判断乳腺癌预后及指导治疗可能具有应用价值。     

用细胞-ELISA法检测抗P185抗体

以高表达P185蛋白的人乳腺癌细胞（SKBR-3）作为抗原,用固相-ELISA法检测抗P185单抗和免疫小鼠抗血清。比较了不同方法处理的固相细胞和待测血清经低表达P185的人乳腺癌细胞（MCF-7）吸收与未吸收对实验的影响。结果显示:待测样本用MCF-7预吸收后及用1％乙醛处理固相细胞组所得结果较理想。     

p185抗体可致小鼠流产的研究

目的通过体内实验进一步验证ｐ１８５蛋白的免疫原性，旨在研究该蛋白作为肿瘤疫苗的可能性。方法用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００层析柱分离的ｐ１８５蛋白组分与佐剂混合免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经ＥＬＩＳＡ验证血清中出现ｐ１８５抗体后与健康的同品系雄性鼠交配，以阴栓形成提示交配成功，观察雌鼠产仔率，子宫形态及免疫病理。结果免疫鼠产仔率明显低于仅用佐剂免疫的对照组（Ｐ＜０．０５），子宫内发现胚胎坏死，病检显示子宫组织有弥散性中性粒细胞浸润和局灶性坏死，并有免疫复合物沉积，提示ｐ１８５免疫能诱导小鼠流产。结论这一实验结果从体内进一步证实ｐ１８５的免疫原性。为该蛋白作为肿瘤疫苗提供实验资料，同时该模型可用于对胚胎性肿瘤抗原的免疫原性研究     

T6-17细胞培养上清中肿瘤蛋白P185的表达

目的:从转染Her-2/neu基因的T6-17细胞上清中纯化p185蛋白, 研究其免疫原性和探究其在血清学诊断中应用的可能性.方法:采用溴化氰活化的Sepharose 4B为基质, 通过交联A18 mAb, 用亲和层析的技术纯化p185 蛋白.将收集的T6-17细胞上清循环过亲和层析柱, 经梯度盐溶液解离与抗体结合的p185 蛋白, 收集到蛋白洗脱峰, 浓缩后用ELISA检测p185的免疫反应性, 并经SDS-PAGE和Western blot 进一步鉴定.结果:ELISA检测p185保持了良好的与抗体反应活性, SDS-PAGE和Western blot进一步证实纯化蛋白的相对分子质量(Mr)约为185 000, 是HER-2/neu编码的肿瘤抗原.结论:从转基因细胞上清中成功获取p185肿瘤抗原, 可进一步用于乳腺癌的实验室诊断研究.     

p66ShcA蛋白与机体衰老关系

p66ShcA蛋白是哺乳动物原癌基因Shc家族成员中的一员,除具有该家族特有的保守结构域(PTB和SH2)外,在N端具有特有的CH2结构域。当细胞在外界压力(H2O2、UV)刺激条件下,p66ShcA蛋白CH2结构域中36位的苏氨酸磷酸化,参与p53介导的凋亡信号通路,促进细胞凋亡。近年的研究阐明了氧应激引起的细胞凋亡和机体衰老之间的关系,因此,p66ShcA蛋白是联系细胞凋亡和衰老的交汇点。目前通过对p66ShcA蛋白转录方式的研究发现,p66ShcA蛋白启动子甲基化和p66ShcA蛋白的表达有负调控作用,所以对p66ShcA蛋白表达的调控,为延缓机体衰老及治疗由衰老引起的各种疾病带来新的思路。     

sp185蛋白在卵巢癌诊断及术后监测中的应用研究

目的探讨血清sp185蛋白在卵巢癌诊断、术后监测中的应用价值。资料与方法使用酶联免疫吸附实验方法检测了血清中sp185蛋白含量,包括58份卵巢癌术前血清、64份卵巢癌术后随访血清（包括复发组26例,未复发组38例）、30份良性卵巢肿瘤血清及20份正常对照血清。结果1.卵巢癌患者术前血清sp185均值是6.59ng/ml,较良性肿瘤及正常对照升高,以10.5ng/ml为界值,卵巢癌的阳性率为33%。2.术后未复发组血清sp185蛋白均值是8.08 ng/ml,术后复发血清sp185蛋白均值是15.84ng/ml。二者比较差异有显著性,P〈0.01。以10.5ng/ml为界值,复发组78%血清sp185蛋白升高,而未复发组仅10%血清sp185蛋白升高。结论卵巢癌患者血清sp185蛋白复发组明显高于未复发组,表明血清sp185蛋白在卵巢癌术后监测上有其应用价值。     

肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究

目的 研究肿瘤抗原ｐ１８５蛋白作为肿瘤疫苗所诱导的抗肿瘤效应。方法 亲和层析纯化的ｐ１８５蛋白皮下注射正常ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取脾细胞分别与ｐ１８５蛋白、３Ｔ３－ｍｅｕ细胞体外共培养,以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照,观察其培养上清中ＨＦＮ－γ和ＴＮＦ－α活性。将免疫鼠脾淋巴细胞经ｐ１８５抗原和低剂量的ＩＬ－２体外培养１周后,再用ＣＤ３抗体刺激扩增,用流式细胞仪分析其细胞表型。３Ｔｅ－ｎｅｕ和３Ｔ     

丙型肝炎双移位F蛋白抑制肝癌细胞p16、p21的表达

目的:探讨丙型肝炎双移位F(DF)蛋白对肝癌细胞抑癌基因p16、p21转录与表达的影响。方法:PCR扩增HCV1b型DF基因,构建pCDNA3.0/HCV-DF真核表达载体。再转染至肝癌细胞HepG2中,G418筛选稳定表达细胞株,Western blot检测p16、p21蛋白表达及半定量RT-PCR法检测p16、p21基因转录,并以pCDNA3.0空质粒作为阴性对照。结果:重组质粒pCDNA3.0/HCV-DF蛋白在HepG2细胞中稳定表达,pCDNA3.0/HCV-DF转染细胞中p16、p21 mR-NA转录水平和蛋白表达水平较空质粒转染的细胞明显下降。结论:HCV-DF蛋白能够抑制p16、p21表达,提示可能参与肝细胞癌变发生发展。     

原癌基因HER2／neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。     

肿瘤抗原p185蛋白的纯化及其鉴定

目的：从转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ 基因的３Ｔ３／ｎｅｕ细胞中纯化ｐ１８５蛋白,研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗的可能性。方法：采用溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ为基质,通过交联５２０Ｃ９单克隆抗体（杂交瘤腹水中沉淀的γ－球蛋白）,用亲和层析的技术纯化ｐ１８５蛋白。经梯度盐溶液解离与抗体结合的ｐ１８５蛋白,收集到蛋白洗脱峰,用ＥＬＩＳＡ检测ｐ１８５的免疫反应性,并经ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏ     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。