釉基质蛋白对人牙周膜细胞群骨钙素的影响

目的研究人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在釉基质蛋白(em-dogain,EMD)诱导下骨钙素(osteocalcin,OCN)表达的改变。方法组织块法分离培养人牙周膜细胞,实验组用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,对照组不经EMD诱导培养。免疫细胞化学和实时定量聚合酶链反应(polymer-ase chain reaction,PCR)检测成牙骨质细胞矿化相关蛋白OCN的表达。结果免疫细胞化学结果显示,实验组和对照组hPDLPs细胞胞浆均可见黄色或棕黄色颗粒,OCN表达呈阳性;实验组hPDLPs的OCN检测平均光密度值为0.172 43±0.014 85,对照组为0.167 01±0.017 03,组间差异无统计学意义(t=0.757,P=0.459);实时定量PCR检测结果显示,实验组骨钙素相对表达量是对照组的1.13倍。结论 EMD对hPDLPs的OCN表达无明显影响。     

rhBMP-2对人牙周膜细胞骨桥蛋白表达的影响

目的　深入了解牙周膜细胞 (periodontalligamentcells,PDLC)的成骨样细胞特性 ,以及非胶原蛋白在牙周组织矿化中的作用。方法　在体外培养条件下 ,观察重组人骨形成蛋白 2(recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP 2 )作用前后是否对矿化相关蛋白之一的骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)在人PDLC中的存在及表达情况产生影响。在小玻片上培养第 5代PDLC ,分为加rhBMP 2 (5 0 μg/L)刺激的实验组和不加任何因子的空白对照组 ,以地高辛标记的OPNcDNA探针 ,采用原位杂交技术对PDLC中OPN的表达情况进行检测 ;同时做PBS替代探针和RNA酶预处理的方法学对照。结果　对照组、替代对照和RNA酶预处理的PDLC均显示为阴性反应 ,没有显示出OPN的阳性表达信号 ;实验组PDLC的胞浆中可见明显的OPN阳性反应 ,表达信号较强。结论　rhBMP 2的刺激作用可使PDLC表达出较强的OPN阳性信号 ;表明在一定条件和外界因子的诱导下 ,PDLC具有向成骨特性方向转变的潜能 ,对牙周组织再生有促进效应。     

TNF-α对人牙周膜细胞表达Asporin的影响

目的：检测TNF-α对人牙周膜细胞Asporin表达的影响,初步探讨Asporin在牙周炎致病过程中扮演的角色,为牙周炎的发病机制研究提供线索.方法：改良酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞,qRT-PCR检测在不同浓度TNF-α （0.5、1、2、5、10 ng/mL）作用下牙周膜细胞Asporin的表达及使用1 ng/mL的TNF-α作用于牙周膜细胞3、6、24和48 h后,牙周膜细胞中Asporin的表达;应用免疫细胞化学检测Asporin在牙周膜细胞中表达定位和在TNF-α作用下的表达变化,其结果用Image-Pro Plus （IPP）软件分析.结果：qRT-PCR结果显示,1ng/mL TNF-o能最大程度降低人牙周膜细胞中Asporin的表达（P＜0.05）,TNF-α作用后3h开始,Asporin表达下降,作用24 h,48 h后,其表达降低最为明显（P＜0.05）.免疫细胞化学的检测结果与qRT-PCR一致.结论：TNF-α能显著下调人牙周膜细胞Asporin的表达,推测Asporin可能参与了牙周炎的发生发展过程.     

TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的 研究转化生长因子β（TGFβ）和重组人骨形成蛋白2（rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性，骨钙素（OC）合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖，对ALP活性，OC合成和矿化结节形成无明显影响；rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用。却显著提高其ALP活性，刺激OC合成和矿化结节形成；两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间；先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响；先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型，TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用。两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用。     

bFGF和rhBMP对牙周膜细胞胶原酶水平的影响

目的:研究bFGF、rhBMP分别及联合作用对人牙周膜细胞(periodontalligamentcells ,PDLCs)胶原酶Ⅱ、Ⅳ(CollagenaseⅡ、Ⅳ)水平的影响并探讨其内在相关性;优选最佳显效浓度。方法:选取因正畸拔除的第一前磨牙,刮取根中1/3牙周膜组织作为标本,采用牙周膜细胞体外培养技术,免疫组化方法和图像分析技术动态观察bFGF、rhBMP梯度含量分别及联合作用对人PDLCs胶原酶Ⅱ、Ⅳ水平的影响。结果:①免疫组化定量分析,bFGF(10 )浓度组能显著抑制PDLCs胶原酶Ⅳ的表达(P <0 .0 1) ;rhBMP(2 0 0 )浓度组能诱导PDLCs胶原酶Ⅳ的表达(P<0 .0 5 ) ;bFGF(10 )、rhBMP(2 5 )浓度组均能显著诱导PDLCs胶原酶Ⅱ的表达(P <0 .0 1) ;动态观察bFGF(10 ) rhBMP(2 0 0 )连续7d对胶原酶Ⅱ、Ⅳ水平的抑制效应呈现连续的递增趋势(P <0 .0 5 )。②rhBMP与人PDLCs胶原酶Ⅱ水平呈显著负相关性(P <0 .0 1) ;rhBMP与人PDLCs胶原酶Ⅳ水平呈显著正相关性(P <0 .0 1)。结论:bFGF、rhBMP联合作用能更显著地抑制人PDLCs胶原酶Ⅱ、Ⅳ的表达,两者具有协同作用;其中bFGF(10 ) rhBMP(2 0 0 )为最佳显效浓度。     

人牙周膜细胞中内源性骨形成蛋白的流式细胞仪分析

目的：定量检测和分析人牙周膜细胞（ＰＤＬＣ）表达内源性骨形成蛋白（ＢＭＰ）的情况。方法：应用ＢＭＰ单克隆抗体，通过流式细胞仪和免疫组化ＡＢＣ的方法双重判定。结果：在离体培养的人ＰＤＬＣ中有一半左右的细胞能表达ＢＭＰ。结论：牙周膜细胞具有一定的合成和分泌ＢＭＰ的能力；可以进一步认为人的牙周膜细胞是具有成骨潜能的，在牙周组织再生中有积极作用。     

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:研究重组人骨形成蛋白2 (rhBMP2) 对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs) 的生物学作用。方法:原代培养HPDLFs ,并观察rhBMP2 对HPDLFs 增殖、碱性磷酸酶(ALP) 活性、骨钙素(OC) 合成及矿化结节形成的作用。结果:0125～2 mgPml rhBMP2 对HPDLFs 的增殖无明显作用,015～2 mgPml rhBMP2 显著提高HPDLFs 的ALP 活性,刺激OC合成和矿化结节形成。结论:rhBMP2 对HPDLFs 的作用具有剂量依赖性。rhBMP2 能够刺激HPDLFs 表达成骨细胞表型并促进其表型成熟。     

骨形成蛋白对牙周膜细胞在牙根片上附着和增殖的影响

目的：观察和比较骨形成蛋白（ＢＭＰ）对牙周膜细胞（ＰＤＬＣ）在不同根片上生长的生物学效应。方法：应用了细胞培养和扫描电镜等技术。结果：在离体的牙周病患牙根面上ＰＤＬＣ附着和增殖数量明显低于正常牙根面，细胞生长状态也较差；但经ＢＭＰ作用后，其数量明显增殖至与正常牙几无差别。结论：证实ＢＭＰ对ＰＤＬＣ确实是一种有效的促生长因子。还提示ＢＭＰ的促附着和促增殖作用有所差异，表现在促增殖作用更为显著     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞粘附、伸展的影响

目的：了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，固相结合分析方法观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。结果：实验组PDLC黏附率与对照组无差别，实验组PDLC伸展率高于对照组。结论：EMPs对PDLC黏附无影响，但可促进其伸展。     

内皮素-1对牙周膜细胞碱磷酶活性和骨钙素含量的影响

目的:研究不同浓度内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)碱磷酶(alk aline ph osph atase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OCN)含量的影响。方法:体外培养牙周膜细胞,加入不同浓度(1,10,100n M)的ET-1,以未作任何处理的牙周膜细胞为对照组,刺激48h后观察ET-1对牙周膜细胞ALP活性和OCN含量的影响。结果:经ET-1(1,10,100n M)干预后,PDL细胞ALP活性和OCN含量低于对照组(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论:ET-1对牙周膜细胞ALP活性和OCN含量具有抑制作用。     

体外培养的人牙周膜细胞成骨样细胞表型特征的研究

目的 对体外培养的人牙周膜细胞成骨样细胞的表型特征进行研究探讨。方法 组织块 法培养人牙周膜细胞,放射免疫法检测条件培养基中碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和骨钙素（ＯＣＮ）的分泌活性,免疫 组化法检测非分泌型的ＡＬＰ和ＯＣＮ的表达,原位杂交方法检测二者的ｍＲＮＡ水平的表达。结果 人牙 周膜细胞具有成骨细胞的部分表型,碱性磷酸酶在蛋白水平包括分泌和非分泌型及基因转录水平都有一 定的表达,随培养时间的变化不大;而不具有成熟的成骨细胞的表型特征——骨钙素的表达,其无论是在 基因和蛋白水平都没有表达二这一结果为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建打下基础。     

人牙周膜干细胞的分离培养及初步鉴定

目的 体处分离培养人类牙周膜干细胞并对其生物学性状进行初步鉴定.方法 采用有限稀释法进行牙周膜干细胞克隆筛选,获得单细胞克隆来源细胞,检测其克隆形成率,并采用免疫组织化学染色、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色等方法鉴定牙周膜干细胞的组织来源及生物学特性.结果 有限稀释法获得的牙周膜干细胞克隆株呈簇状生长,排列紧密,细胞呈圆形或椭圆形,细胞较小,排列形成紧密的团块状.免疫组化染色显示细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性;碱性磷酸酶染色阳性;早期间充质干细胞的标志物STRO-1荧光染色显示细胞发出明亮的红色荧光,表达阳性.结论 牙周膜中存在具有高增殖能力的干细胞,克隆化分离培养的人牙周膜干细胞具有强克隆形成能力,具有间充质干细胞表型和生物学特性.     

不同培养基对人牙周膜细胞生物学行为的影响

目的：研究α—MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLcs）生物学行为的影响,为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基。方法：采用改良组织块培养法,分别用α-MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对hPDLcs进行体外培养,比较三组细胞在游出成功率、增殖及矿化等方面的差异。结果：α-MEM促进hPDLcs增殖作用最强。α—MEM组培养的细胞表达的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量最高,与其它两组间有显著差异。DMEM—LG组矿化结节形成个数最多且体积大。结论：α-MEM促进hPDLcs增殖,DMEM—LG促进hPDLcs分化。应根据实验要求选择合适培养基。     

牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K对人牙周膜细胞增殖的影响.方法 组织块法体外培养人牙周膜细胞,不同浓度的牙龈蛋白酶K作用于人牙周膜细胞24h,对照组为无牙龈蛋白酶K作用的人牙周膜细胞.浓度为12.5μg/ml牙龈蛋白酶K分别作用于人牙周膜细胞24、48、72、96h,对照组也培养相同的时间.采用MTT法检测人牙周膜...     

盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞生物活性的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对原代培养的人牙周膜细胞(PDLC)生物活性的影响。方法:采用细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法观察盐酸小檗碱对PDLC增殖活性、蛋白合成及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。结果:①与对照组比较,作用24h,盐酸小檗碱(0.005～0.030g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用48h,盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用72h,盐酸小檗碱(0.010～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05)。②盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)细胞培养液中蛋白总含量均明显高于对照组(P<0.05)。③盐酸小檗碱(10～20g/L)细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P<0.05)。结论:盐酸小檗碱在0.010～0.020g/L浓度范围内有促进PDLC的增殖及生物合成作用,能增强牙周膜细胞ALP活性。     

机械牵张应变对人牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内游离Ca2 浓度的变化。方法:体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置,对1%、10%和20%应变组的细胞分别进行30、60和120min的动态牵张加载,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2 浓度的变化,并应用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:当HPDLCs加载30min时,各组检测到的胞内游离Ca2 浓度与对照组无显著差异(P>0.05);60min时,各个应变组的胞内Ca2 浓度明显升高,与对照组相比均有非常显著的差异(P<0.01);加载时间延长到120min时,各组Ca2 浓度又降至对照组水平(P>0.05)。结论:机械牵张应变可通过钙离子信号系统影响HPDLCs的生物学活性。     

缺氧环境对牙周膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究缺氧环境对牙周膜成纤维细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用氯化钴模拟法构建人牙周膜成纤维细胞缺氧模型。观察缺氧条件下牙周膜成纤维细胞形态变化,采用CCK-8检测细胞增殖情况,并用Western Blot方法检测凋亡相关因子p53、Bcl-2及caspase-7的表达变化。结果随着时间延长,缺氧组细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞浆浓缩,细胞存活率降低。 Western Blot 结果显示缺氧组 p53、Bcl-2及caspase-7蛋白表达量随着缺氧时间延长逐渐升高。缺氧组p53蛋白、caspase-7表达高于常氧组,Bcl-2表达低于常氧组。结论缺氧环境可影响牙周膜成纤维细胞形态、增殖活性及凋亡相关蛋白的表达。     

雌激素对人牙周膜干细胞干性维持的影响

目的研究雌激素对人牙周膜干细胞（hPDLSC）干性维持的影响。 方法分离、培养原代hPDLSC并完成其干细胞鉴定;雌激素处理48 h,采用流式细胞术检测雌激素对hPDLSC细胞周期的影响;定量聚合酶链反应（q-PCR）检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因、干性相关基因Oct4、Sox2、c-Myc以及衰老相关基因p16和p53的变化;雌激素长期处理后观察细胞克隆形成能力及骨向分化能力的改变。应用SPSS 17.0软件,利用配对样本t检验对组间均数进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果实验获得的hPDLSC符合间充质干细胞鉴定标准。流式细胞术结果显示,雌激素处理48 h后hPDLSC增殖能力（29.730 ± 1.845）较对照组（23.587 ± 2.905）明显提高,差异有统计学意义（t= 9.913,P= 0.010）。q-PCR结果显示雌激素处理48 h后,hTERT表达量（1.958 ± 0.338）较对照组（1.000 ± 0.018）明显提高（t= 7.00,P= 0.001）;Oct4表达量（2.539 ± 0.493）较对照组（1.000 ± 0.011）明显提高（t= 6.26,P= 0.001）;Sox2表达量（2.234 ± 0.255）较对照组（1.016 ± 0.221）明显提高（t= 6.26,P= 0.003）;c-Myc表达量（1.328 ± 0.091）较对照组（1.003 ± 0.088）明显提高（t= 5.67,P= 0.002）;而衰老相关基因p16表达量（0.460 ± 0.085）较对照组（1.009 ± 0.163）明显降低（t= 12.24,P= 0.007）;p53表达量（0.301 ± 0.041）较对照组（1.004 ± 0.115）明显降低（t= 7.77,P= 0.016）。雌激素长期处理后,雌激素处理组的克隆形成率（0.058 ± 0.008）显著高于对照组（0.013 ± 0.008）,差异有统计学意义（t= 5.60,P= 0.028）,成骨能力显著强于对照组（A_对照组= 1.238 ± 0.084;A_E2=2.460 ± 0.182,t= 16.41,P<0.001）。 结论雌激素能提高hTERT和Oct4、Sox2、c-Myc的基因表达量,维持细胞增殖,抑制细胞衰老。雌激素长期处理能维持体外扩增时hPDLSC的干性。     

SOST基因在人牙周膜细胞矿化诱导过程中的表达

目的:探讨SOST基因在人牙周膜细胞矿化诱导过程中的表达变化,为进一步研究SOST基因在牙周组织中的作用提供理论基础。方法:在体外培养条件下,将矿化诱导液作用于人牙周膜细胞(7、14、21d),检测细胞矿化能力、SOST基因以及成骨标志基因的表达变化。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:随着诱导时间的增加,人牙周膜细胞的碱性磷酸酶染色及矿化钙结节染色程度增加,成骨标志基因以及SOST基因的表达量在矿化诱导第14天及21天后明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),并具有时间依赖性。结论:牙周膜细胞在mRNA水平能够表达SOST,而且矿化诱导作用对人牙周膜细胞中SOST基因的表达有促进作用。提示SOST参与人牙周膜细胞的成骨分化过程,并对牙周组织改建有重要作用。