低频超声辐照兔胚胎后胎盘组织细胞c-fos的改变

目的:探讨低频超声终止妊娠的可能性并观察低频聚焦超声辐照兔胚胎后胎盘组织细胞c-fos m R N A的表达改变。方法:低频聚焦超声7种声强各60s体内直接照射妊娠第10天兔胚胎,妊娠20d时观察各组胚胎死亡率;选用完全抗孕剂量(45W/cm2×60s)照射胚胎,照后24、48、72、96h留取胎盘,原位杂交技术检测各组c-fosm R N A表达情况。结果:假照组胚胎死亡率为13.33%(8/60),照射组中声强30W/cm2、35W/cm2及≥40W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.00%(12/48)、72.88%(43/59)和100%(64/64、43/43、40/40、35/35)。低频聚焦超声辐照胚胎后24h胎盘组织细胞c-fos m R N A表达增加,72h增加最明显,96h表达下降。结论:低频超声抗早孕具有潜在的可行性,辐照胚胎可诱导胎盘组织细胞c-fos m R N A表达增加。     

低频超声照射兔胚胎后对胎盘组织细胞凋亡的影响

目的探讨低频超声终止妊娠的可能性并观察低频超声对兔胎盘组织细胞凋亡的影响。方法利用353kHz低频超声6种声强各60s直接照射妊娠第10d兔胚胎,妊娠20d时观察各组胚胎死亡率;选用完全抗孕剂量(45W/cm2×60s)照射胚胎,照后24、48、72、96、120、168、192h留取胎盘,TUNEL技术检测各组凋亡细胞数量。结果照射组中声强30W/cm2、35W/cm2及≥40W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.00%(12/48)、72.88%(43/59)和100%(64/64、43/43、40/40、35/35)。超声辐照胚胎后24h细胞凋亡增加,96h凋亡细胞增加最明显,120h凋亡细胞数量下降,192h细胞凋亡恢复至对照组水平。结论低频超声抗早孕具有潜在的可行性,低频超声辐照胚胎可诱导胎盘组织细胞凋亡增加,但存在一定可复性。     

低频超声终止妊娠作用机制研究

目的：探讨低频超声终止兔妊娠的机制及对胚胎组织的影响。方法：应用220KHz,9W／cm^2超声处理126只兔胚胎,超声辐照时间及例数分别为3分钟20只,5分钟20只,7分钟20只,10分钟40只,15分钟26只,其它频率超声处理胚胎60只。于超声处理前后分别测试胚胎温度变化并对超声处理的胚胎胎盘进行病理学检查。结果：220KHz,9W/cm^2超声辐照胚胎组织时间不超过10分钟时,胚胎温度均不超过40℃。幅照7分钟,胎盘血管破裂;幅照10分钟。胎盘与子宫壁间出血和出现间隙,台盘与子宫壁分离,胎盘细胞内未见明显空泡。结论：220KHz,9W/cm^2超声幅照胚胎7－10分钟,可主要通过机械效应而终止妊娠。     

超声造影剂促进野生型p53基因转染抑制大鼠卵巢癌生长的实验研究

目的 探讨超声辐照造影剂微泡促进野生型p53基因转染进而抑制大鼠卵巢癌生长的有效性。方法构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，将40只卵巢癌荷瘤大鼠分成4组。第1组瘤体内注入造影剂微泡和野生型p53质粒混合物，并用超声辐照大鼠腹部瘤区；第2组注入裸质粒后予以超声辐照瘤体；第3组注射超声造影剂和基因混合物后无超声辐照；第4组仅注入裸质粒而无超声辐照。每组进行基因转染每周1次，共进行8次。2月后用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测野生型p53 mRNA在卵巢癌组织中的表达，Western Blot检测野生型p53基因蛋白表达。结果成功构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，埋线法建立卵巢癌动物模型；用超声波辐照微泡促进基因转染后见p53基因转录及表达。第1组p53 mRNA的表达明显增强，高于其他3组，约是第2组的2．65倍，第4组的5．95倍。第2组高于未行超声辐照组，是第4组的2．23倍。第3、4组基因表达差异无统计学意义；Western Blot分析示p53基因蛋白表达的差异模式基本同mRNA，即第1组p53 mRNA的表达增强，高于其他3组，约是第2组的1．75倍，第4组的3．13倍；第2组高于未行超声辐照组，是第4组的1．79倍；第3、4组基因表达差异无统计学意义。结论瘤体内注射造影剂微泡和野生型p53质粒混合物后行超声辐照，可明显增加质粒基因在癌瘤组织中的导人及表达，超声联合造影剂微泡可作为卵巢癌基因治疗中促进基因转移的辅助方法。     

高强度聚焦超声抗大鼠早孕的形态学研究

目的:探讨高强度聚焦超声(HIFU)终止妊娠的可能性。方法:利用HIFU治疗机(780kHz)6种声功率各60s体内直接照射妊娠第8天大鼠胚胎,妊娠16d时观察各组胚胎死亡率和胎盘、子宫的形态学变化。结果:对照组胚胎总死亡率为10.31%(43/417);实验组中声功率4、8W/cm2及≥12W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.35%(18/71)、72.60%(53/73)和100.00%(69/69、71/71、71/71、72/72)。超声照射后8d的改变,光镜下主要为胎盘出血、变性、坏死,变化随剂量的增加而明显。结论:胎盘较子宫对HIFU更敏感,更易受损,HIFU抗早孕具有潜在的可行性,值得进一步研究。     

诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响

目的 研究诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响,探讨诊断超声诱导细胞凋亡的机制.方法 采用频率为3.5 MHz超声分别照射孕7 d大鼠腹部子宫体表投影区,分为照射0 min组、10 min 组、20 min 组、30 min 组,超声照射后24 h取胚胎组织,SP免疫组织化学检测Bcl-2蛋白表达水平的变化.结果 随着照射时间的延长,各组Bcl-2阳性表达率逐渐下降,与照射时间呈负相关.其中10 min组与0 min组相比差异无显著性(P>0.05),20 min组、30 min组与0 min组相比差异有非常显著性(P<0.01).结论 诊断超声持续照射大鼠早孕胚胎超过20 min使Bcl-2 蛋白水平表达下调,提示诊断超声长时间照射能抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡.     

低频超声干预兔颈动脉粥样斑块的实验研究

目的观察不同强度的体外低频低强度超声对颈动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法将新西兰大白兔按照高脂饮食加空气干燥法建立颈动脉粥样硬化模型，随后随机分成正常对照组（对照组，6只）和4个超声组（每组6只），4个超声组根据超声的强度和时间分别为A组（0．5W／cm^2，5min／d）、B组（0．5W／cm^2，10min／d）、C组（1W／cm^2，5min／d）和D组（1W／cm^2．10min／d），超声作用每日1次，20d之后取颈动脉手术部位做病理切片。分别用增殖细胞核抗原（PCNA）染色和末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷（dUTP）-生物素平移末端标记法（TUNEL）染色分析血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡情况，并计算细胞增殖率（PCNA％）和细胞凋亡率（TUNEL％）。结果各超声组颈动脉内膜内PCNA阳性细胞率较对照组有不同程度的减少，其中B、C、D组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；各超声组颈动脉内膜中TUNEL阳性细胞率较对照组有不同程度增加，其中B、C、D组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。B、C、D组相互比较PCNA％和TUNEL％，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外低频低强度（0．5W／cm^2，10min／d）超声具有明显诱导家兔颈动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡和抑制增殖的作用。     

超声微泡介导EGFP 质粒对视网膜母细胞瘤细胞转染效率的实验研究

目的探讨不同浓度的超声微泡造影剂，在不同声强的超声辐照下，介导DNA质粒转染视网膜母细胞瘤（RB）细胞的效率及可行性，为实现外源基因高效、定向的转移奠定基础。方法将培养的RB细胞分别予以超声条件为0．25，0．5，0．75，1．0，1．25W／cm^2，60S的连续波辐照，微泡造影剂浓度为1％，100．4，20％，30％，以筛选出对RB细胞活性无明显抑制的最适超声声强、辐照时间和微泡浓度。根据以上筛选条件，转染EGFP基因入RB细胞，24～48h后，在荧光显微镜下观察EGFP表达情况，并用RT-PCR对EGFPmRNA进行半定量检测。结果声强〈0．75W／cm^2（60s），以及微泡浓度〈20％时，对RB细胞的活性无明显抑制。当微泡浓度10％，超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2时，介导的DNA质粒对RB细胞转染具有较高的转染效率，明显高于其他实验组。超声声强为0．5W／cm^2或0．75W／cm^2介导的转染效率，在统计学上差异无显著性意义。结论浓度适当的微泡在优化的声强条件下，能够有效地提高DNA质粒在RB细胞中的转染效率。     

茵陈蒿汤对妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘中p53, Bax和Bcl-2表达的影响

[目的]探讨p53,Bax和Bcl-2在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘组织上的表达及茵陈蒿汤对其调控作用.[方法]选择三组病例,即正常妊娠组30例(对照组)、ICP未用茵陈蒿汤治疗组30例(未服药组)和ICP用茵陈蒿汤治疗组30例(服药组).采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定孕妇血清胆汁酸水平.采用免疫组化EnVision法分别检测三组胎盘组织细胞凋亡调控基因p53,Bax和Bcl-2的表达.[结果]①ICP患者血清胆汁酸水平明显高于正常对照组(P<0.01);ICP服药组治疗前与治疗后血清胆汁酸水平比较有差异(P<0.01).②未服药组p53、bax在胎盘组织的表达高于对照组和高于服药组,差异有统计学意义(P<0.05);③未服药组Bcl-2在胎盘组织的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]①ICP患者的胎盘功能减退可能与胎盘组织细胞在外界有害物质作用下对细胞凋亡的敏感性增加有关系;②茵陈蒿汤治疗ICP可能是通过下调细胞凋亡调控基因bax和p53,延缓细胞凋亡,改善胎盘功能而发挥作用.     

微泡造影剂联合超声辐照介导的绿色荧光蛋白质粒转染小鼠肝癌的实验研究

目的探讨微泡造影剂SonoVue联合超声辐照在介导体内基因转染中的作用。方法建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，尾静脉注入绿色荧光蛋白质粒（pEGFP），添加或不添加SonoVue，脉冲多普勒超声辐照（1MHz，2W／cm^2）瘤组织。持续时间1、5、10min，7d后流式细胞仪、荧光显微镜评价pEGFP转染率。HE染色行肿瘤病理学检查。结果SonoVue联合超声辐照组pEGFP的转染率显著高于单纯超声辐照组（P〈0．01）；仅SonoVue与单纯pEGFP2组间转染率无显著差异（P〉0．05）；辐照时间5、10min时pEGFP表达明显高于1min（P〈0．05）。5与10min组间pEGFP表达无显著差异（P〉0．05）。HE染色肿瘤组织无坏死灶出现。结论微泡造影剂联合超声辐照可明显提高基因转染率，且对组织无损害。     

超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721 细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 研究超声辐照载羟基喜树碱微泡对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法 SMMC-7721细胞随机分为6组,即对照组、空白脂质微泡+超声组、载羟基喜树碱微泡组、羟基喜树碱组、羟基喜树碱+超声组及载羟基喜树碱微泡+超声组.采用Annexin V-FITC/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡状况;免疫细胞化学法检测Bel-2、Bax蛋白表达.结果 载羟基喜树碱微泡+超声组用Annexin V-FITC/PI检测细胞早期凋亡率为(12.18±1.38)%;TUNEL法显示染成棕黄色的凋亡细胞,细胞中晚期凋亡率为(34.25±1.83)%;免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bel-2/Bax比值明显下降.以上结果与其他组的检测结果相比,差异具有统计学意义.结论 超声辐照载羟基喜树碱微泡能明显诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值有关.     

不同强度低功率聚焦超声辐照牛肝脏组织的初步实验研究

目的采用不同强度低功率聚焦超声辐照离体牛肝脏组织,观察超声辐照前后牛肝组织的大体及病理学改变,探讨自制低功率聚焦超声治疗仪的聚焦特性及基本生物学效应。方法采用不同强度低功率聚焦超声辐照牛肝组织不同时长,观察辐照靶区大体改变。结果超声声强16．8w／cm^2以上,辐照时间15min,可见靶区肝组织呈灰红色,与周围肝组织界限清晰。结论证实我所自行研制的低功率聚焦超声治疗仪的聚焦特性及基本生物学效应,并为后期联合微泡造影剂治疗提供基本实验参数。     

早期胚胎停育绒毛中Survivin与Bcl-2基因表达的研究

目的探讨Survivin及Bcl-2在早期胚胎停育中的临床意义。方法前瞻性研究,采用免疫组化法检测济南市第五人民医院妇科30例正常早期妊娠、27例早期胚胎停育绒毛中Survivin及Bcl-2的表达情况。结果 Survivin在胚胎停育组绒毛中的表达阳性率(51. 85%)低于正常早期妊娠组(93. 33%),差异具有统计学意义(P <0. 01);正常早期妊娠组中,Survivin++表达率、+++表达率均高于胚胎停育组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。Bcl-2在胚胎停育组绒毛中的表达阳性率(62. 96%)低于正常早期妊娠组(96. 67%),差异具有统计学意义(P <0. 01)。胚胎停育组绒毛中Bcl-2++表达率低于正常早期妊娠组(P <0. 01)、+++表达率低于正常早期妊娠组(P <0. 05),差异均具有统计学意义。结论 Survivin、Bcl-2在胚胎早期发育过程中起重要作用,两者低表达或缺失可能导致胚胎停育。     

聚焦超声激活血卟啉对H-22肿瘤细胞的杀伤作用

目的 研究声动力学疗法（SDT）杀伤肿瘤细胞的最佳声照处理时间点，探讨不同强度的聚焦超声激活血卟啉对H-22肝癌腹水瘤细胞的杀伤作用。方法采用荧光分光光度法测定血卟啉衍生物（HpD）在H-22肿瘤细胞内的富集时间，选择最佳声照处理时间点。采用频率为1．43MHz，强度分别为1W／cm^2、2W／cm^2和3W／cm^2的聚焦超声结合血卟啉作用于H-22肿瘤细胞，于不同时间段取材，通过扫描电镜观察细胞表面的超微结构变化，并与单纯血卟啉或单纯超声处理后的细胞进行比较。结果加入HpD后45min，肿瘤细胞内药物含量最高，作为最佳声照处理时间点。形态学观察显示：单纯血卟啉处理对H-22肿瘤细胞仅有轻微影响；单纯超声处理对细胞有一定的损伤作用，并且细胞受损程度随着超声强度的增大和取材时间的延迟而逐渐加重；超声结合血卟啉对细胞的协同杀伤效应在同等条件下显著高于单纯超声处理的细胞。结论SDT对H-22肿瘤细胞的损伤效应依赖于超声强度以及声敏剂在细胞内的含量，并且表现出一定的时间相关性变化。     

低频超声联合微泡造影剂促进增强型绿色荧光蛋白质粒转染裸鼠人前列腺癌皮下移植瘤的实验研究

目的 探讨低频超声联合微泡造影剂促进增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）转染裸鼠人前列腺癌皮下移植瘤的可行性,并观察不同超声声强对转染率的影响。方法 BABL/c裸鼠30只建立人前列腺癌皮下移植瘤模型,然后随机分为单纯低频超声组和低频超声＋微泡组2组,每组各15只。单纯低频超声组裸鼠分别经尾静脉注射质粒与0.9%氯化钠混悬液250μl（其中含pEGFP质粒50μg）,低频超声＋微泡组裸鼠分别经尾静脉注射质粒与微泡混悬液250μl（其中含pEGFP质粒50μg）。每组裸鼠再分为3个亚组,每组各5只,分别以声强为1、2、3 W/cm^2的超声（频率80 kHz,占空比50%）辐照10 min。超声辐照后第3天采用激光共聚焦显微镜观察各组绿色荧光蛋白表达情况并分析各组平均荧光强度,同时进行常规病理学检查。采用单因素方差分析比较单纯低频超声组及低频超声＋微泡组平均荧光强度,进一步组间两两比较采用SNQ-q检验。结果 1、2、3 W/cm^2低频超声＋微泡组平均荧光强度分别为23.75±2.54、30.25±1.67、59.60±2.03,均高于相对应的1、2、3 W/cm^2单纯低频超声组平均荧光强度14.04±1.35、14.66±0.98、14.32±1.20,且差异均有统计学意义（q值分别为18.26、14.12、13.88,P均＜0.05）;且随着超声声强的增加,低频超声＋微泡组平均荧光强度也增高,且差异均有统计学意义（q值分别为15.33、17.81、13.79,P均＜0.05）,说明随着超声声强的增强,低频超声＋微泡组转染率明显增高。单纯低频超声组均未见明显的绿色荧光。常规病理学检查显示各组均未对组织造成明显的损伤。结论 超声联合微泡造影剂能有效促进pEGFP质粒转染裸鼠人前列腺癌皮下移植瘤,而在一定范围内增高声强能提高转染率。     

脉冲电场联合野生型p53基因诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

背景:在前期研究基础上,设想将基因电转染作为脉冲电场治疗恶性肿瘤的辅助方法。目的:探讨脉冲电场联合抑癌基因野生型p53基因诱导人宫颈癌hela细胞发生凋亡及相互作用。方法:采用空质粒及含有野生型p53的质粒转染Hela细胞得到Hela-vector、Hela-p53细胞,将Hela细胞、Hela-vector和Hela-p53细胞分别施加固定脉宽100μs、频率1Hz、脉冲数8个、电场强度为1500V/cm的脉冲电场处理。结果与结论:相同参数脉冲电场作用于各组细胞12h后,MTT结果显示Hela-p53组细胞吸光度明显低于Hela组(P<0.05);流式细胞仪及RT-PCR检测结果显示Hela-p53组的早期凋亡率和p53mRNA表达较Hela组明显增加;Westernbolt及激光共聚焦显微镜结果显示与Hela组比较,Hela-p53组细胞Bax蛋白表达明显上升,而Bcl-2蛋白则明显下降,Casepase-3相对荧光强度明显增强。表明野生型p53基因对宫颈癌Hela细胞生长有明显的抑制作用,野生型p53基因可以提高脉冲电场诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的作用。     

超声波终止小鼠早孕的组织学研究

本文报道了一种应用治疗剂量超声抗鼠早孕的方法。结果显示:用12W/cm~2、16W/cm~2、20W/cm~2三组声强辐照小鼠妊娠第7天在体胚胎着床点的组织学急性改变为胎盘出血,电镜下见胎盘和胚胎细胞多数受到严重损伤和细胞质膜失去连续性、细胞核碎裂等;子宫内膜和平滑肌细胞出现线粒体肿胀、内膜细胞的胞质内有的局灶性坏死.受辐照小鼠继续妊娠至第16天时处死发现受辐照的胚胎100%死亡,光镜下见胎盘、胚胎结构解体、塌陷、吸收,细胞核多数溶解,部分呈核淡染、固缩,碎裂或仅存空的子宫腔,子宫内膜增生,平滑肌无明显改变,电镜下见胚胎和胎盘失去正常细胞结构,多为细胞碎片,子宫内膜细胞和平滑肌细胞未见明显异常。结果表明,孕体较母体组织对超声更敏感,更易受损。同时,也说明超声波抗鼠早孕是可行的。     

超声辐照和SonoVue微泡在介导hAng-1基因体外转染时的作用和量效关系探讨

目的 探讨超声辐照和SonoVue微泡分别使用和联用在介导hAng-1基因体外转染过程中的作用以及辐照强度和微泡浓度对转染效率和细胞活性的影响.方法 实验分四组A组:单纯超声辐照+质粒组;B组:微泡+质粒组;C组:超声辐照+微泡+质粒组和空白对照组D组. C组内转染参数分别设置为超声照射强度0.5、1.0 、1.5和2.0 W/cm~2,微泡浓度5%、10%、20%、30%和40%.将连接有eGFP-C_3-hAng-1质粒的SonoVue微泡对293T细胞进行转染,48 h后检测各组基因转染效率和细胞存活率. 结果转染48 h后C组转染效率最高,荧光阳性细胞数最多,强度最大;A组转染效率很低,见少量荧光表达;B、D组无明显基因转染发生.随着超声照射强度和微泡浓度的增加,基因转染效率会逐步升高,具有统计学意义.微泡浓度大于20%、超声照射强度超过1.5 W/cm~2后基因转染效率不再升高甚至降低,细胞死亡率显著增高(P<0.01).结论 SonoVue微泡介导外源基因转染必须联合超声辐照才能获得较好的转染效率.对于hAng-1基因和SonoVue微泡,选择声强1.5 W/cm~2,微泡浓度20%是相对最佳转染条件.     

THE RELATIONSHIP BETWEEN EXPRESSION OF P53/BCL-2 AND HISTOPATHOLOGICAL CRITERIA IN BREAST INVASIVE DUCTAL CARCINOMAS

Seventy-five cases of invasive ductal carcinoma (IDC) on whom axillary lymph node dissection and mastectomy were performed between 1996 and 2000 were reviewed histopathologically. The slides were stained immunohistologically with p53 and Bcl-2. In 40 cases we observed 53% Bcl-2 and 69% p53 positivity. There were correlations between p53 and tumour grade, and also between p53 and Bcl-2. We did not observe any connection between the main histopathological prognostic factors – lymph node metastasis, tumour size, tubule formation, pleomorphism – and p53/Bcl-2. In our study, IDC with a high mitotic index and poor differentiation showed mutant p53 positive staining. Expression of Bcl-2 is associated with low nuclear grade and absence of mutant p53. This study was designed to reveal the correlation between histopathological findings and the expression of p53/Bcl-2 on prognosis.