抗P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MDR的研究

为了证实抗Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）单克隆抗体协同环孢素Ａ（ＣｓＡ）逆转人膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＲ的治疗方案，对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ８７细胞系和ＢＩＵ８７／ＡＤＭ耐药细胞亚株经柔红霉素（ＤＮＲ）与抗Ｐｇｐ单克隆抗体ＪＳＢ１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ１和单独或联合异搏定（Ｖｅｒ）处理后，采用ＭＴＴ法评价细胞毒作用，荧光分光光度计检测细胞内ＤＮＲ的聚集量。结果：ＪＳＢ１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲ对ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的抗肿瘤作用，但ＪＳＢ１和Ｖｅｒ联合应用却不存在这种协同效应。结果显示：ＪＳＢ１和ＣｓＡ联合应用能增加细胞毒剂对具有Ｐｇｐ表达的ＭＤＲ肿瘤的抗肿瘤效应，是适合于临床应用的多药抗性逆转方案。     

Fas/APO-1 在泌尿系肿瘤细胞中的表达

为了探讨Ｆａｓ／ＡＰＯ１在泌尿系恶性肿瘤发生发展中的作用，采用免疫细胞化学方法对６种泌尿系肿瘤细胞，膀胱癌（Ｔ２４，ＥＪ，ＢＩＵ８７），肾癌（ＧＲＣ１，ＲＣＣ９４９），前列腺癌（ＰＣ３Ｍ）和一种原代培养正常肾间质成纤维细胞Ｆａｓ／ＡＰＯ１分子的表达进行了检测。结果显示原代培养正常肾间质成纤维细胞和Ｔ２４细胞系Ｆａｓ／ＡＰＯ１分子表达较强，ＰＣ３Ｍ属中等强度表达，ＲＣＣ９４９与ＢＩＵ８７属微弱表达，而ＥＪ及ＧＲＣ１则不表达。Ｆａｓ／ＡＰＯ１在泌尿系恶性肿瘤培养细胞中的表达强度偏低或完全不表达，可能参与了泌尿系恶性肿瘤的发生和发展。     

单核细胞趋化蛋白-1在肾小球内皮细胞中表达的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对培养的人肾小球内皮细胞（ＨＵＧＥＣ）表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ１）的影响以及ＨＵＧＥＣ的条件培养基对单核细胞（ＭＣ）的趋化作用及抗ＭＣＰ１抗体对单核细胞迁移的影响。方法（１）采用原位杂交技术、免疫细胞化学、细胞ＥＬＩＳＡ法观察ＭＣＰ１基因及蛋白表达。（２）用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室微孔滤膜法测定ＴＮＦα刺激ＨＣＧＥＣ后的条件培养基对ＭＣ的趋化作用及抗ＭＣＰ１抗体对ＭＣ迁移的影响。结果（１）在不加刺激条件下培养的ＨＵＧＥＣ弱表达ＭＣＰ１基因及蛋白,５０ｎｇ／ｍｌＴＮＦα刺激后,６小时即有ＭＣＰ１蛋白表达增强,于１２小时达高峰,不同浓度的ＴＮＦα（２５、５０、１００ｎｇ／ｍｌ）刺激ＨＵＧＥＣ６小时后,与正常对照组相比差异显著（Ｐ＜００１）。（２）ＴＮＦα刺激ＨＵＧＥＣ后的条件培养基对ＭＣ有明显趋化作用,并被抗ＭＣＰ１抗体抑制。结论ＨＵＧＥＣ在ＴＮＦα诱导下,其ＭＣＰ１的表达增强,其条件培养基对ＭＣ有趋化作用,从而可能招引单核细胞迁入内皮下间隙。     

α-干扰素对膀胱癌细胞多药耐药性逆转的研究

目的研究α干扰素（αＩＦＮ）对膀胱癌多药耐药性的逆转作用。方法应用ＭＴＴ法检测阿霉素（ＡＤＭ）的细胞杀伤作用。荧光法检测细胞内阿霉素浓度和斑点杂交法检测ｍｄｒ１ｍＲＮＡ相对含量。结果５００ＩＵ／ｍｌαＩＦＮ能明显增强阿霉素对耐药细胞ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的杀伤作用,但不能增强阿霉素对敏感细胞ＢＩＵ８７的杀伤作用;αＩＦＮ能增加阿霉素在ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞内的积聚,但不改变ｍｄｒ１ｍＲＮＡ在细胞内表达量。结论αＩＦＮ对膀胱癌细胞多药耐药性具有逆转作用,其机制与αＩＦＮ增加细胞内抗癌药物浓度有关,与增加ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达量无关。     

利用受精抗原-1清除不育男性精子中自身抗精子抗体提高精子顶体反应发生率

抗精子抗体可通过影响精子运动、精子通过宫颈管及抑制精子与卵子结合而影响生育力,全身运用激素治疗免疫因素所致不育效果差,且副作用大,而ＩＣＳＩ目前是最有效的办法,但具有损伤性,费用高,为了寻找一种合适的克服抗精子抗体阳性所致的免疫性不育的方法,作者评估了受精抗原１（Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１,ＦＡ１）对不育男性精液抗精子抗体ＩｇＡ、ＩｇＧ的吸附作用。将１８名精液中抗精子抗体阳性患者和２名正常自愿者（对照组）精子与含ＦＡ１的精液介质或不含ＦＡ１精液介质在３７℃下孵育半小时…     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

抗人精浆蛋白单链抗体的构建及表达

目的构建抗人精浆蛋白单链抗体（γＳｍＳｃＦｖ）,为进一步应用基因工程抗体研究打下基础。方法从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体γＳｍＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ,经ＲＴＰＣＲ分离获得了γＳｍＭｃＡｂ轻、重链可变区（ＶＬ、ＶＨ）基因,用连接肽将其构建成具有ＶＨＬｉｎｋｅｒＶＬ结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ４Ｔ１中进行表达。结果经测序表明,ＶＨ、ＶＬ及Ｌｉｎｋｅｒ的序列均正确。ＳｃＦｖ在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的４０％。结论构建的抗人精浆蛋白单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础     

生长因子Wnt-5A在六种泌尿肿瘤细胞系中的异常表现

为了探讨生长因子Ｗｎｔ５Ａ在泌尿系肿瘤发生中的作用,采用半定量ＲＴＰＣＲ（逆转录多聚酶链反应）方法对６种泌尿肿瘤细胞系、一种原代培养肾纤维母细胞（ＰＲＦ）及１例正常人肾组织（ＮＲＴ）进行Ｗｎｔ５Ａ检测。材料与方法　６种泌尿恶性肿瘤细胞系：膀胱癌（Ｔ２４、ＥＪ、ＢＩＵ８７）、肾细胞癌（ＧＲＣ１、ＲＣＣ９４９）和前列腺癌（ＰＣ３Ｍ）取自本所免疫室。所有的细胞系均用ＲＰＭＩ１６４０含有１６％ＦＣＳ,１０ｍｍｏｌ／ＬＨｅｐｅｓ和２ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺的培养液培养于３７℃的ＣＯ２孵箱内。取…     

蛋白激酶A在转化生长因子β-1刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖中的作用

目的：探讨蛋白激酶Ａ在转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）刺激增生性瘢痕和正常人皮肤皮纤维细胞（ＨＳ＿ＦＢ和ＮＳ－ＦＢ）增殖中的信号转导作用。方法：利用＾３２Ｐ掺入底物法测定ＨＳ－ＦＢ和ＮＳ－ＦＢ的ＰＫＡ活性;使用直接计数法和ＭＴＴ法测定ＴＧＦ－β１和ｃＡＭＰ、Ｈ７等刺激两种细胞后增殖能力的变化。结果：ＮＳ－ＦＢ被ＴＧＦ－β１刺激后ＰＫＡ的活性短暂升高后很快恢复（３０ｍｉｎ内,但Ｐ〉０．０５）。ＨＳ－ＦＢ则在３０～６０ｍｉｎ降低（Ｐ〈０．０５）,１ｈ后恢复;ＨＳ－ＦＢ的ＰＫＡ活性比ＮＳ－ＦＢ低（但Ｐ〉０．０５）。ＴＧＦ－β１能强烈刺激两种细胞增殖（３０ｍｉｎ后Ｐ〈０．０５）,对ＨＳ－ＦＢ的刺激作用更强（刺激６０ｍｉｎ后Ｐ〈０．０５）。ｃＡＭＰ可抑制两种细胞增殖（６０ｍｉｎ后Ｐ〈０．０５）,Ｈ７有拟ＴＧＦ－β１的刺     

动脉硬化闭塞症与血管内皮细胞活性因子关系的研究

目的　探讨动脉硬化闭塞症（ＡＳＯ） 与内皮素１（ＥＴ１） 、一氧化氮（ＮＯ） 等血管内皮细胞活性因子的相互关系。方法　选择９６ 例ＡＳＯ 患者，采用密度梯度法检测循环内皮细胞计数（ＣＥＣ），采用放射免疫测定法检测血浆ＥＴ１ 、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６酮前列腺素Ｆ１α（６ＫＰＧＦ１α） ，降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ） 、血管紧张素Ⅱ（ＡＴⅡ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），采用酶联免疫检测细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）、Ｐ选择素（ＰＳ）。采用Ｇｒｉｓｓ 法检测血浆ＮＯ水平。结果　所有患者均存在高ＥＴ１、ＴＸＢ２ 、ＡＴⅡ、粘附分子、ＣＥＣ血症，存在低ＮＯ、ＣＧＲＰ、６ＫＰＧＦ１α血症，且以Ⅲ期病人最明显。结论　ＡＳＯ 的发生发展同血管内皮细胞活性因子密切相关，ＥＴ１、ＮＯ 等血管活性因子的检测有助于ＡＳＯ发病机制的探讨和病情严重程度的判别。     

肿瘤坏死因子单克隆抗体对急性胆管炎大鼠的器官保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）单克隆抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ,ＭｃＡｂ）对急性胆管炎大鼠多器官损害是否具有保护作用。方法ＳＤ大鼠２４只,随机分成假手术组、急性胆管炎组和ＴＮＦＭｃＡｂ防治组。分别测定血浆ＴＮＦ、血清ＡＬＴ和ＢＵＮ,并行肝、肺、肾病理变化观察。结果ＴＮＦＭｃＡｂ防治组血浆ＴＮＦ明显低于急性胆管炎组（Ｐ＜００１）,血清ＡＬＴ、ＢＵＮ亦明显低于急性胆管炎组（Ｐ＜００５）,肝、肺、肾病理变化明显减轻。结论ＴＮＦ是导致急性胆管炎多器官损害的重要介质,ＴＮＦＭｃＡｂ对多器官损害具有保护作用     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。     

肝胆管癌Fas和突变型p53蛋白表达及与Ki—67表达和HCV感染的关系

本研究采用免疫组织化学法对２９例肝内胆管癌组织中Ｆａｓ、ｐ５３、Ｋｉ６７及ＨＣＶ相关抗原（ＮＳ５Ａｇ）的表达进行原位观察,并对它们之间的关系进行了探讨。材料与方法１．选自我院手术切除及活检标本肝内胆管癌２９例。按ＷＨＯ分类法分类,高分化癌６例,中等分化癌１４例,低分化癌９例。标本经甲醛溶液固定,石蜡包埋,４μｍ切片。２．免疫组织化学染色。试剂：第一抗体Ｆａｓ多克隆抗体（ＳｅｎｔａＣｒｕｚ产品）、ＮＳ５Ａｇ单克隆抗体（北京市肝炎研究所）,ｐ５３单克隆抗体和ＳＰ染色试剂盒（Ｍａｘｉｍ产品）。方…     

ICAM-1和VCAM-1测定在肾移植急性排斥反应中的临床意义

目的探讨血清可溶性细胞间粘附分子１（ｓＩＣＡＭ１）和可溶性血管细胞粘附分子１（ｓＶＣＡＭ１）在肾移植急性排斥反应中的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）动态监测５６例肾移植患者术后ｓＩＣＡＭ１和ｓＶＣＡＭ１水平的变化。结果肾移植患者术后ｓＩＣＡＭ１和ｓＶＣＡＭ１水平呈规律性变化,急性排斥反应组ｓＩＣＡＭ１为（３９０．６±９１．０）ｎｇ／ｍｌ,ｓＶＣＡＭ１为（１９５７．１±４０３．１）ｎｇ／ｍｌ,明显高于移植肾功能稳定组的（１３７．３±１６．８）ｎｇ／ｍｌ、（１１１８．４±２１０．４）ｎｇ／ｍｌ和ＣｓＡ肾中毒组的（１３２．７±２４．８）ｎｇ／ｍｌ、（１２８５．８±２７０．５）ｎｇ／ｍｌ,差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１）。结论ｓＩＣＡＭ１和ｓＶＣＡＭ１可以作为肾移植术后急性排斥反应的免疫学监测指标。     

白介素1β对肾小球系膜细胞表达纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物-1和纤维连接蛋白的影响

目的探讨白介素１β（ＩＬ１β）对人肾小球系膜细胞表达纤维蛋白溶解酶原（纤溶酶原）激活物抑制物１（ＰＡＩ１）和纤维连接蛋白（ＦＮ）的影响。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测体外培养的肾小球系膜细胞在ＩＬ１β刺激后ＰＡＩ１和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达,采用纤维蛋白平板法检测系膜细胞培养上清中ＰＡＩ１的活性,利用ＥＬＩＳＡ法检测ＦＮ的水平。结果ＩＬ１β刺激组系膜细胞ＰＡＩ１和ＦＮｍＲＮＡ的表达显著增高（与对照组比,Ｐ＜００５）,细胞培养上清中ＰＡＩ１的活性和ＦＮ的水平亦明显增加（与对照组比,Ｐ＜００１）。结论ＩＬ１β可以上调系膜细胞ＰＡＩ１和ＦＮ蛋白质及ｍＲＮＡ的表达,提示ＩＬ１β可能通过抑制细胞外基质降解和增加细胞外基质合成而导致细胞外基质的积聚。     

细胞周期对Fas/APO-1在前列腺癌细胞系PC-3M中表达的影响

目的研究细胞周期对ＰＣ３Ｍ细胞表面Ｆａｓ／ＡＰＯ１蛋白表达的影响。方法采用直接免疫荧光流式细胞术对前列腺癌细胞系ＰＣ３Ｍ未同步化的细胞,及经改良的笑气阻断及ＴｄＲ双阻断方法同步化的不同细胞周期细胞表面Ｆａｓ／ＡＰＯ１表达情况进行检测。结果未同步化的ＰＣ３Ｍ细胞Ｆａｓ／ＡＰＯ１表达阳性率为３４２０％;ＰＣ３Ｍ细胞系不同细胞周期的细胞表面Ｆａｓ／ＡＰＯ１表达明显不同,以Ｓ期最高达８５０５％,Ｇ１及Ｍ期较低,分别为３３２％和４９５％。结论细胞周期对细胞表面Ｆａｓ／ＡＰＯ１的表达情况有明显影响。深入研究细胞周期对肿瘤细胞Ｆａｓ／ＡＰＯ１表达情况的影响,对于采用Ｆａｓ／ＡＰＯ１系统途径治疗恶性肿瘤有重要意义。     

白细胞介素10抑制核因子кB介导的肾小管上皮细胞表达细胞间黏附分子1

目的研究白细胞介素１０（ＩＬ－１０）对人近端肾小管上皮细胞（ＨＫ－２细胞）在促炎症因子肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作用下表达细胞间黏附分子１（ＩＣＡＭ－ｌ）及其相关核转录途径的影响。方法 用ＨＫ－２细胞作靶细胞，用细胞酶联免疫吸附法（ＥＩＪＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交观察ＩＣＡＭ－１的蛋白和基因的表达，以电泳迁移率变动法测定转录因子核因子ｋＢ （ＮＦｋＢ）和激活蛋白 Ｉ（ＡＰ－１）的活性。结果ＴＮＦα呈剂量依赖地诱导ＨＫ－２细胞ＮＦｋＢ的活化及ＩＣＡＭ－１的基因和蛋白表达，这些作用可以被ＮＦｋＢ的抑制剂对甲苯磺－Ｌ－苯丙氨酸氯甲基甲酮（ＴＰＣＫ）所抑制，但ＴＮＦα对ＨＫ－２细胞的ＡＰ－１活性无影响。 ＩＬ－１０（１～ ２０ｎｇ／ｍｌ）可抑制 ＴＮＦα诱导的 ＨＫ－２细胞 ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达及 ＮＦｋＢ的活化。结论ＴＮＦα诱导人肾小管上皮细胞ＨＫ－２的ＮＦｋＢ活化，进而促进ＩＣＡＭ－ｌ基因和蛋白表达，ＩＬ－１０可抑制ＴＮＦα诱导的上述炎症效应。     

精子抗原作为候选免疫避孕疫苗的研究进展

以精子抗原为基础的免疫避孕疫苗开发是一种大有希望的避孕途径。已被鉴定的几种涉及生育的精子表面抗原有：乳酸脱氢酶（ Ｌ Ｄ Ｈ） Ｃ４,兔精子自身抗原（ Ｒ Ｓ Ａｓ）, Ｐ Ｈ ２０, Ｓ Ｐ １０, Ｈ Ｓ Ａ ６３,受精抗原 １（ Ｆ Ａ １）, Ｆ Ａ ２,卵裂信号蛋白 １（ Ｃ Ｓ １）, Ｈ Ｓ Ｇ３ 等。本文综述了这些抗原对开发免疫避孕疫苗的重要意义。     

肾移植后特定尿微量蛋白分析的临床意义

为探讨尿微量排泄蛋白与肾移植的关系，应用免疫散射测浊技术检测了３０例肾移植患者四种特定尿微量蛋白：尿微量白蛋白（ＵＡＬＢ）、尿转铁蛋白（ＵＴｆ）、尿α１微球蛋白（Ｕα１Ｍ）、尿免疫球蛋白Ｇ（ＵＩｇＧ）。结果显示，除ＵＩｇＧ外，ＵＡＬＢ、Ｕα１Ｍ与ＵＴｆ均与血清肌酐（Ｓｃｒ）呈显著正相关。动态观察发现，Ｓｃｒ升高前１周左右，在常规蛋白尿尚不明显时，特定尿微量蛋白已开始出现异常，并于Ｓｃｒ增高期间达到高峰。肾移植急性排斥以ＵＡＬＢ增幅最大（２０７５±１１２７ｍｇ／Ｌ），而慢性ＣｓＡ肾中毒则以Ｕα１Ｍ增高为主（９５０±３４１ｍｇ／Ｌ）。结果认为：特定尿微量蛋白变化与移植肾功能密切相关，对移植后并发症的鉴别有一定帮助     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。