头颈部恶性肿瘤的端粒酶活性检测

目的：检测头颈部恶性肿瘤组织端粒酶活性的阳性率表达率，分析其与临床分期、病理类型、分化程度等临床因素的关系。方法：用改良的PCR－TRAP法对36例头颈部肿瘤组织、正常组织和癌旁组织分别进行端粒酶活性检测。结果：定性分析发现36例头颈部恶性肿瘤组织中有88．89％的阳性表达，癌旁组织有13．89％的阳性表达，正常组织为2．78％。肿瘤组织与其对照的组织间端粒酶阳性表达率有显著差异（P＜0．01）；对30例磷癌不同临床分期、病理类型和分化程度的肿瘤组织进行端粒酶活性检测，其阳性表达虽然存在差异，但无统计学意义（P＞0．05）。结论：端粒酶的激活与头颈部恶性肿瘤的发生、发展可能密切相关；端粒酶活性有可能成为头颈部恶性肿瘤分子诊断的新的标志物和治疗的新靶点。     

PCR-ELISA法检测消化道恶性肿瘤端粒酶活性

目的 探讨端粒酶在各种消化道恶性肿瘤中的活性表达情况。方法 利用非放射性的ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ反应试剂盒检测７６例消化道恶性肿瘤及１０例患者的正常及癌旁组织的端粒酶活性。结果 经过一次ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ反应，７６例恶性肿瘤３１例呈阳性，正常及癌旁组织均阴性；对一次ＰＣＲ反应呈阴性的肿瘤组织２３例，正常及癌旁组织各１０例的ＰＣＲ产物再次进行ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测，发现前者有１７例反应为强阳性，后两者中     

肺癌组织端粒酶活性测定

①目的　探讨端粒酶作为肺癌诊断标记物的可行性及临床意义。②方法　用TRAP法检测 2 9例肺癌组织、2 7例癌旁组织和 35例正常组织标本中端粒酶活性表达。③结果　 2 9例肺癌组织中 2 1例 (72 .4 % )端粒酶活性表达阳性 ,2 7例癌旁组织中 6例 (2 2 .2 % )端粒酶活性表达阳性 ,35例正常组织均不表达端粒酶活性。癌组织、癌旁组织与正常组织标本端粒酶活性比较有显著差异 (χ2 =34.0 13、3.937,P <0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　端粒酶表达与肿瘤发生有关 ,其癌旁组织中端粒酶活性有可能成为判定肿瘤复发和预后的指标。     

检测端粒酶活性的PCR—ELISA方法的建立

建立一种更为敏感，特异的端粒酶检测方法。方法将分子生物学和免疫学方法有机地结合起来，建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法并检测多种肿瘤细胞株和部分组织中端粒酶活性。结论ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测端粒酶活性是一种简便，快速，无放射性污染的方法，适用于肿瘤早期诊断和普查。     

鼻咽癌组织端粒酶活性的表达

为探讨端粒酶在鼻咽癌发生发展过程的作用。方法采用端粒重片段扩增法对５０例鼻咽癌组织标本进行端粒酶活性检测。结果鼻咽癌慢性炎症,癌前病变组织端粒酶阳性率均为１００％,鼻咽癌端粒酶阳性率为８７．５％。     

胆管癌组织端粒酶活性检测及意义

目的　探讨端粒酶活性与胆管癌的关系及其诊断意义。方法　采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 3例胆管癌组织的端粒酶活性 ,同时以 5例胆管癌癌旁组织及 5例正常胆总管组织做对照。结果　 2 3例胆管癌组织中有 1 8例显示端粒酶活性(78.3% ) ,而癌旁组织、正常胆总管组织未显示活性。端粒酶阳性检出率与患者性别、肿瘤部位、分化程度、大小等因素无相关性 ,但肿瘤转移与端粒酶阳性检出率有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶见于大多数胆管癌组织中 ,其活性可能在胆管癌的发生发展中起重要作用 ,有望成为恶性肿瘤诊断的标记物     

卵巢上皮性肿瘤端粒酶活性定量检测

目的:探讨端粒酶在上皮性卵巢肿瘤发生发展中的作用,评价端粒酶作为卵巢癌诊断及预后指标的价值。方法:采用端粒酶PCR-ELISA法对25例卵巢上皮性肿瘤(8例良性、3例交界性和14例恶性)和6例正常卵巢表面上皮进行端粒酶活性定量检测。结果:2例良性、2例交界性和12例恶性卵巢上皮性肿瘤及1例正常卵巢上皮存在端粒酶活性增强,8例良胜、3例交界性、14例恶性和6例正常卵巢上皮端粒酶活性吸光值的x±s分别为0.080±0.070、0.408±0．208、1.659±0．930和0.086±0.060。统计学分析表明恶性卵巢癌中端粒酶活性明显高于良性、交界性肿瘤和正常卵巢组织;端粒酶活性和卵巢上皮性肿瘤组织学类型、临床分期无关;而与肿瘤的分化程度有关。结论:研究结果初步证明端粒酶活性增强在卵巢癌的无限增殖中是一重要环节,并提示端粒酶活性增强有可能成为卵巢癌的标志物之一。     

TRAP—ELISA法检测妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性

目的：探讨应用端粒重复序列扩增（TRAP）－酶联免疫吸附测定法（ELISA）定量检测妇科恶性肿瘤组织中的端粒酶活性的应用价值。方法：采用TRAP－ELISA法,对36例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）、25例非癌宫颈组织、25例卵巢上皮性肿瘤和6例正常卵巢的新鲜 组织及41例宫颈脱落细胞进行端粒酶活性定性量检测。结果：宫颈组织端粒酶活性总阳性率,CIN56.25％（9／16）,宫颈癌91.6％（33／36）,非癌宫颈组织4％（1／25）;宫颈脱落细胞,CIN61.54％（8／13）,宫颈癌82.35％（14／17）,正常0％（0／11）;卵巢组织端粒酶活性阳性率,良性卵巢上皮性肿瘤25％（2／8）,交界性66.67％（2／3）,恶性85.7％（12／14）,正常卵巢16.67％（1／6）。恶性肿瘤与正常或良性病变中端粒酶活性的差异有显著性。结论：妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性明显高于良性病变和正常组织。TRAP－ELISA法较传统的TRAR法更为简便快速,有材料多样,可定量,特异性强、敏感性高,无同位素污染等优点。     

人体涎腺肿瘤细胞端粒酶活性检测

目的：探讨端粒酶在涎腺肿瘤发生、发展中的作用,为早期诊断和开展涎腺肿瘤的基因治疗奠定实验基础。方法：用PCR－TRAP法,聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色法分析PCR产物,对人体涎腺腺样囊性癌细胞株ACC－M和20例涎腺肿瘤组织的端粒酶活性进行检测,并与自身正常涎腺组织相对照。结果：腺样囊性癌细胞株ACC－M的端粒酶活性为阳性,相对端粒酶活性为82％,涎腺恶性肿瘤端粒酶活性最性率最高（14／15）,瘤旁组织次之（4／20）,正常对照及良性肿瘤组织最低（2／25）。其相对端粒酶活性,涎腺鳞癌端粒酶活性值最高（87％）,涎腺恶性肿瘤明显高于自身正常对照和瘤旁组织以及良性肿瘤（P＜0．01）,而瘤旁组织也高于相邻的正常组织（P＜0．05）。结论：端粒酶可作为涎腺恶性肿瘤诊断的分子指标,也可作为阻断恶性转化形成的靶分子。     

TRAP-ELISA法检测妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性

目的 :探讨应用端粒重复序列扩增 (TRAP) 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)定量检测妇科恶性肿瘤组织中的端粒酶活性的应用价值。方法 :采用TRAP ELISA法 ,对 36例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)、2 5例非癌宫颈组织、2 5例卵巢上皮性肿瘤和 6例正常卵巢的新鲜组织及 41例宫颈脱落细胞进行端粒酶活性定量检测。结果 :宫颈组织端粒酶活性总阳性率 ,CIN 5 6 2 5 % (9/ 16 ) ,宫颈癌 91 6 7% (33/ 36 ) ,非癌宫颈组织 4% (1/ 2 5 ) ;宫颈脱落细胞 ,CIN 6 1 5 4% (8/ 13) ,宫颈癌 82 35 % (14/ 17) ,正常 0 % (0 / 11) ;卵巢组织端粒酶活性阳性率 ,良性卵巢上皮性肿瘤 2 5 % (2 / 8) ,交界性 6 6 6 7% (2 / 3) ,恶性 85 7% (12 / 14) ,正常卵巢 16 6 7% (1/ 6 )。恶性肿瘤与正常或良性病变中端粒酶活性的差异有显著性。结论 :妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性明显高于良性病变和正常组织。TRAP ELISA法较传统的TRAP法更为简便快速 ,有材料多样 ,可定量 ,特异性强、敏感性高 ,无同位素污染等优点     

不同肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶及端粒酶活性的检测及其意义

目的：检测5种肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达及端粒酶活性状态，为端粒酶抑制剂在肿瘤治疗学方面的应用研究提供理论基础。方法：分别用免疫细胞化学S-P法和TRAP-ELISA方法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株SMMC7721、人前列腺癌细胞株PC-3m和人骨肉瘤细胞株U2OS hTERT表达及端粒酶活性状态。 结果：HeLa细胞hTERT表达阳性率最高，为 (93.75±3.10) %；而U2OS阳性表达率最低,仅为(2.75±0.96) %，近于不表达；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的hTERT表达阳性率分别为(92.50±2.65)%、(53.75%±2.22)%和(23.50±2.89)%。与hTERT表达阳性率相似，HeLa细胞端粒酶活性最强，为(94.58±3.49)%；而U2OS 端粒酶活性近于阴性，为(3.02±0.43)%；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的端粒酶活性分别为 (73.90±4.50) %、(66.67±3.35) %和(50.62±1.96) %。结论：5种细胞系中hTERT表达及端粒酶活性状态差别很大，提示端粒酶抑制剂可适用于多数但并非所有恶性肿瘤的治疗学研究。     

人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901抗脱落凋亡的特性，为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础。方法：应用软琼脂集落形成实验，DNA ladder检测，流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变。结果：对照组细胞MDCK（狗的正常肾脏上皮细胞系）在软琼脂中不生长，没有形成细胞集落；悬浮培养15h后，可见有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现；流式细胞仪检测，悬浮培养24，48h可见有凋亡峰出现，而HGC27等4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落，脱落培养15h后，没有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现，流式细胞仪检测，与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显性差异。也没有凋亡峰的出现。结论：MDCK细胞属于锚着依赖性细胞，可出现脱落凋亡，胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901属于抗脱落凋亡细胞。     

胃癌组织端粒酶活性与催化亚基hTERT表达的关系

研究胃癌、胃黏膜肠化生及正常黏膜组织端粒酶活性与人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的相关性及端粒酶激活在胃癌发生中的作用.方法:通过端粒重复序列扩增(TRAP)和逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)方法测定3种胃癌细胞株、26例胃癌、10例胃黏膜肠化生和36例正常胃黏膜组织标本端粒酶活性和hTERT表达.结果:3种胃癌细胞株、24例胃癌组织有端粒酶活性;4例肠化生端粒酶活性较弱;36例正常胃黏膜标本未测到端粒酶活性.hTERT在26例胃癌组织、5例肠化胃黏膜中表达;正常胃黏膜无表达.端粒酶活性、hTERT表达与肿瘤的分期和病理分级无关.结论:hTERT在肿瘤形成的早期阶段表达,端粒酶的激活是胃癌形成的关键步骤.     

As2O3对乳腺癌细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的：探讨不同浓度As2O3对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231端粒酶及其亚单位hTERT-mRNA活性表达的影响,为临床治疗乳腺癌提供理论和实验依据。方法：将不同浓度的As2O3与MDA-MB-231细胞共培养不同时间后,MTT比色法检测As2O3对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后细胞端粒酶活性的改变;RT-PCR法测定MDA-MB-231细胞hTERT-mRNA的表达。结果：As2O3可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,且存在浓度、时间效应关系,其24 h IC50为24.73μmol/L,48 h IC50为6.99μmol/L;用终浓度分别为10、20、40μmol/L的As2O3与MDA-MB-231细胞作用24h、48 h,银染条带显示出端粒酶活性显著下降;RT-PCR产物电泳条带显示出hTERT-mRNA的表达明显下降。结论：As2O3在体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的生长,具有较明显的细胞毒作用;As2O3能显著抑制MDA-MB-231细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性,且抑制作用具有明显的时间和浓度依赖关系。     

银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究

目的：探讨应用简便，快速及无害化的非核素银染端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测人细胞端粒酶活性。方法：与枝素ＴＲＡＰ相比较，采用非核素银染ＴＲＡＰ检测了２９３细胞，并检测了经ＲＮａｓｅ和加热处理的阴性对照标本和ＱＧＹ７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１ ２株人肝癌细胞。     

TRAP法测定胃癌端粒酶的意义

目的　观察良恶性胃病端粒酶活性的表达。方法　TRAP法测定端粒酶活性。结果　胃癌组端粒酶阳性率为80 8%(2 1/2 6 ) ,慢性萎缩性胃炎伴中、重度不典型增生端粒酶阳性率为 44 4 %(8/18) ,慢性浅表性胃炎组无端粒酶表达 (0 /13) ,三组间差异显著 (P >0 0 5 )。结论　胃癌端粒酶活性高度表达 ,癌前病变组已有表达端粒酶活性 ,而正常组织不表达端粒酶活性 ,提示端粒酶可作为胃肠道肿瘤诊断的有力生物标志 ,对端粒酶活性阳性癌前病变进行监测有助于早期发现胃癌。     

hTERTp/TK/pGL3靶向抑制端粒酶活性及其对鼻咽癌干细胞的杀伤作用

［摘 要］ 目的:探讨hTERTp/TK/pGL3载体靶向抑制端粒酶活性及其杀灭鼻咽癌CD133+干细胞的作用机制。方法:将已构建的hTERTp/TK/pGL3载体及其对照处理因素（CMV/TK/pGL3和TK/pGL3载体）转染至鼻咽癌CD133+干细胞、CD133－肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(ECV)(对照组)和鼻咽癌SUNE未分选细胞中,采用Stretch PCR 法检测4种细胞端粒酶活性改变。MTT法测定CD133+干细胞和ECV细胞存活率。结果:CD133+鼻咽癌干细胞体外培养7 d后细胞逐渐增多,CD133+鼻咽癌干细胞体内成瘤实验阳性。CD133+鼻咽癌干细胞转染hTERTp/TK/pGL3或CMV/TK/pGL3后端粒酶活性降低;而ECV细胞端粒酶为阴性表达;CD133+鼻咽癌干细胞分别转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为（87.4±0.4）％、（20.5±0.4）％和（27.9±0.2）％,ECV对照细胞组转染TK/pGL3、CMV/TK/pGL3和hTERTp/TK/pGL3后细胞存活率平均为（90.7±0.1）％、（18.1±0.2）％和（86.2±0.1）％,hTERTp/TK/pGL3杀灭鼻咽癌CD133+干细胞效率明显高于ECV细胞组（P<0.01）。结论:hTERTp/TK/pGL3载体可以通过下调端粒酶活性靶向抑制端粒酶阳性的鼻咽癌CD133+干细胞。     

影响端粒酶活性的相关因素

端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖蛋白酶，已发现其活性与端粒和端粒酶的结构成分。细胞分化、细胞周期，细胞内外因子等因素相关，本文总结近年来端粒酶活性相关因素方面的进展。     

消化道平滑肌肿瘤190例病理学观察

目的：研究消化道平滑肌瘤(LA)和平滑肌肉瘤(LS)的鉴别。方法：采用肉眼,HE染色、特殊染色、免疫组织化学及电镜技术对消化道190例LA和LS进行形态学观察。结果：LA平均直径3.3cm,表面光滑,质地坚韧,壁间型、腔内型多见。细胞富裕1-2级多,细胞形态梭形或上皮样,细胞分化程度高,细胞核多为细棒状,肥胖形,核分裂计数平均0.47/25 HPF,无核分裂占75％。LS平均直径8.6cm,质地鱼肉样,哑铃型多见。细胞富裕2-3级多,细胞多形性,细胞核多不规则,巨核、多核,核分裂平均计数20/25 HPF,细胞分化程度低。应用特殊染色、免疫组化染色和电镜技术鉴别组织来源。结论：核分裂计数是诊断LA和分辨低度、中度、高度恶性LS的主要依据,免疫组化和电镜技术也是确定平滑肌组织来源的重要手段。