小鼠匹鲁卡品致痫后海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA的差异表达

目的观察癫癎持续状态(SE)后小鼠海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达的变化.方法采用匹鲁卡品诱导的SE小鼠模型,分别应用Western blot与RT-PCR观察SE后活化素A与抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达的动态变化.结果①活化素A蛋白于SE后3 h开始增高,6 h显著增高,24 h至高峰,48 h仍维持在较高水平;而未成SE的小鼠活化素A表达无明显变化.②抑制素A蛋白SE后无明显增加,同正常小鼠及未成SE的小鼠比较无显著差异.③活化素ⅡA受体mRNA在SE后表达无明显变化.结论SE后海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达存在差异性;活化素A可能对癎性脑损伤的保护与修复具有重要作用.     

小鼠匹鲁卡品致后海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA的差异表达

目的 :观察癫持续状态 (SE)后小鼠海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达的变化。方法 :采用匹鲁卡品诱导的SE小鼠模型 ,分别应用Westernblot与RT PCR观察SE后活化素A与抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达的动态变化。结果 :①活化素A蛋白于SE后 3h开始增高 ,6h显著增高 ,2 4h至高峰 ,48h仍维持在较高水平 ;而未成SE的小鼠活化素A表达无明显变化。②抑制素A蛋白SE后无明显增加 ,同正常小鼠及未成SE的小鼠比较无显著差异。③活化素ⅡA受体mRNA在SE后表达无明显变化。结论 :SE后海马活化素A、抑制素A蛋白及活化素ⅡA受体mRNA表达存在差异性 ;活化素A可能对性脑损伤的保护与修复具有重要作用。     

小鼠急性致痫后海马活化素βA基因表达的变化与意义初探

目的 探讨小鼠癫痫持续状态（Status epilepticus，SE）后海马活化素βA基因的表达与意义。方法 采用毛果芸香碱诱导的SE小鼠模型，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及原位杂交观察SE后海马活化素βA基因表达的动态变化；应用尼氏染色观察海马病理形态结构的变化。结果 SE后3h海马活化素SAmRNA表达即显著增高，6h达高峰，持续至约24h后开始回落，48h恢复近正常水平；活化素pAmR-NA表达最先在海马CA2及DG区上调，高峰时CA3区亦见明显表达，48h后仅CA2区仍可见阳性表达；海马活化素βA mRNA水平与神经元抗损伤力有关。结论 毛果芸香碱诱导的SE能明显上调海马活化素βA mRNA表达，其水平的上调可能有助于增强海马神经元抗兴奋性损伤的能力。     

小鼠急性致癎后海马活化素βA基因表达的变化与意义初探

目的探讨小鼠癫癎持续状态(Status epilepticus,SE)后海马活化素βA基因的表达与意义.方法采用毛果芸香碱诱导的SE小鼠模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及原位杂交观察SE后海马活化素βA基因表达的动态变化;应用尼氏染色观察海马病理形态结构的变化.结果SE后3 h海马活化素βA mRNA表达即显著增高,6 h达高峰,持续至约24 h后开始回落,48 h恢复近正常水平;活化素βA mR-NA表达最先在海马CA2及DG区上调,高峰时CA3区亦见明显表达,48 h后仅CA2区仍可见阳性表达;海马活化素βA mRNA水平与神经元抗损伤力有关.结论毛果芸香碱诱导的SE能明显上调海马活化素βAmRNA表达,其水平的上调可能有助于增强海马神经元抗兴奋性损伤的能力.     

小鼠急性致痫间后海马活化素βA基因表达的变化与意义初探

目的探讨小鼠癫持续状态(Statusepilepticus,SE)后海马活化素βA基因的表达与意义。方法采用毛果芸香碱诱导的SE小鼠模型,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及原位杂交观察SE后海马活化素βA基因表达的动态变化;应用尼氏染色观察海马病理形态结构的变化。结果SE后3h海马活化素βAmRNA表达即显著增高,6h达高峰,持续至约24h后开始回落,48h恢复近正常水平;活化素βAmRNA表达最先在海马CA2及DG区上调,高峰时CA3区亦见明显表达,48h后仅CA2区仍可见阳性表达;海马活化素βAmRNA水平与神经元抗损伤力有关。结论毛果芸香碱诱导的SE能明显上调海马活化素βAmRNA表达,其水平的上调可能有助于增强海马神经元抗兴奋性损伤的能力。     

活化素A对致痫小鼠行为、脑电及海马神经元损伤的影响

目的观察重组人活化素A(rhACT)对匹鲁卡品(PC)致癎小鼠行为、脑电及海马神经元损伤的影响.方法利用脑立体定位手段将rhACT注入侧脑室,1 h后腹腔注射PC.采用发作程度评分、脑电记录观察rhACT对癫癎发作与放电的影响;利用尼氏染色及组织原位凋亡检测观察rhACT对注射PC后24及48h海马神经元损伤的影响.结果预先脑室注射rhACT后PC诱导的癫癎发作显著减轻,癎样放电明显受抑制;24及48h海马神经元未见明显损害.结论rhACT可能有抗K诱导的癫癎发作及保护海马神经元的作用.     

百草枯对PC12细胞的活化素和受体ⅡA表达的影响

目的:观察百草枯对PC12细胞的活化素不同亚基和受体表达的影响。方法:将百草枯加入体外培养的PC12细胞中,用RTPCR法检测细胞的活化素βAmRNA、βBmRNA、抑制素αmRNA和受体ⅡAmRNA表达水平的变化,并以锥虫蓝排斥法检测细胞活力的变化。结果:百草枯损害后PC12细胞的活化素βAmRNA、βBmRNA和受体ⅡAmRNA表达水平明显下调,抑制素αmRNA的表达水平无明显变化。细胞活力在百草枯损害后12和24h下降。结论:百草枯可能通过引起PC12细胞的活化素和受体表达水平的下调,而导致细胞的损害。     

1-甲基-4-苯基吡啶离子对大鼠嗜铬细胞的抑制素、活化素及其受体ⅡA表达以及细胞活力的影响

目的观察1甲基4苯基吡啶离子(MPP )对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株(PC12细胞)的抑制素(inhibin)、活化素(Act)及其受体ⅡA(ActRⅡA)的表达以及细胞活力的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应法检测体外培养的PC12细胞在加入MPP 后3h、6h、12h及24h后细胞ActβAmRNA、βBmRNA、inhibinαmRNA和ActRⅡAmRNA表达水平的变化;应用台盼蓝排斥法检测PC12细胞活力,并与对照组比较。结果经MPP 处理后,各时间点PC12细胞ActβAmRNA、βBmRNA和ActRⅡAmRNA表达均明显下调(均P<0.05),inhibinαmRNA的表达无明显变化;细胞活力在12h和24h时明显下降(均P<0.05)。结论MPP 可能通过下调PC12细胞的Act和受体的表达水平而导致细胞的损害。     

活化素与活化素A对神经元的保护作用

活化素是转化生长因子 β超家族成员之一 ,已有较多的研究探讨了活化素在内分泌与自分泌及旁分泌方面的作用。近年研究发现 ,活化素 βA在脑损伤模型中表达明显上调 ,补充外源性活化素A对神经元有明显的保护作用。本文就近年来有关活化素与活化素受体的结构和类型、中枢神经系统的分布及对神经元的保护作用等研究作一综述     

活化素A对百草枯所诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察重组人活化素A(rhAct)对百草枯所诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:将百草枯、活化素A、Ldeprenyl加入体外培养的PC12细胞中,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力的变化;免疫细胞化学法和RTPCR评价细胞的酪氨酸羟化酶和Bcl2蛋白及mRNA表达水平的变化,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化,比较各组的差异。结果:预先给予活化素A和Ldeprenyl的两组细胞活力明显高于百草枯损害组,酪氨酸羟化酶和Bcl2蛋白及mRNA的表达强于损害组,同时两组的凋亡细胞明显减少,活化素A和Ldeprenyl两组间无显著差异。结论:活化素A和Ldeprenyl通过上调Bcl2的表达,抑制凋亡的发生,而对百草枯所诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

槲皮素对大鼠癫痫持续状态后海马XIAP mRNA与蛋白表达的影响

目的研究大鼠癫痫持续状态(SE)后海马组织XIAP的表达变化及槲皮素对其表达的影响。方法建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠SE模型,应用免疫组化和RT-PCR方法检测XIAP与caspase-3蛋白以及XIAP mRNA的表达。结果海马CA3区XIAP蛋白在SE后2 h(0.5503±0.0172)起逐渐增加,8 h(0.6221±0.0238)达高峰,与对照组比较(0.1507±0.0165),差异有统计学意义(P<0.01)。海马CA3区caspase-3活性蛋白在对照组未见明显表达,在SE后4~72 h明显增多。与对照组比较,SE组海马XIAP mRNA表达水平在2~8 h增加(P<0.01)。与SE组比较,槲皮素组海马XIAP mRNA表达水平及CA3区XIAP蛋白表达在8 h、24 h高于SE组(P<0.01),CA3区caspase-3活性蛋白表达在8 h、24 h、72 h低于SE组(P<0.01)。结论XIAP可能参与了SE后神经元凋亡的调控过程,槲皮素可以提高SE后海马神经元XIAP的表达。     

匹罗卡品致痫大鼠海马一氧化氮水平和caspase-3 mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠癫(疒间)持续状态(SE)后海马一氧化氮(NO)与caspase-3 mRNA表达的改变及相互关系.方法采用匹罗卡品腹腔注射建立大鼠SE模型,用比色法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术在不同时相点检测大鼠海马NO水平与caspase-3 mRNA的表达.结果大鼠海马NO含量在SE后6 h迅速升高,48～72 h虽有所降低,但仍明显高于对照组(均P<0.01);SE后7 d,海马NO含量仍高于正常,但差异无显著性.大鼠海马caspase-3 mRNA表达于SE后6 h开始增多(P<0.05),SE后48 h达到高峰(P<0.01),72 h开始降低,SE后7 d,caspase-3 mRNA表达仍高于对照组,但差异无显著性(P>0.05).结论 caspase-3 mRNA表达升高在NO水平升高之后,并与NO保持相似的变化趋势,提示SE后caspase-3的激活可能与NO神经毒性作用有关.     

脂联素对成骨细胞护骨素和核转录因子κB受体活化素配体表达的影响

背景：在骨组织中,护骨素的主要作用是抑制破骨细胞的形成和活性,核转录因子κB受体活化素配体的主要作用为刺激破骨细胞的分化和活性,抑制破骨细胞的凋亡。护骨素/核转录因子κB受体活化素配体在破骨功能调控中起重要作用。近来研究发现脂联素促进成骨细胞增殖和分化,脂联素与骨代谢相互偶联。但脂联素对破骨细胞的作用不明。 目的：观察脂联素对成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体和护骨素表达的影响,进一步分析其对破骨细胞生成的作用。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2007-06/2008-12在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所实验室完成。 材料：外科手术取正常成人髂前上棘松质骨用于细胞培养,临床标本由湘雅医院提供。 方法：分别用0,3,10和30 mg/L脂联素干预人成骨细胞48 h,检测护骨素和核转录因子κB受体活化素配体 mRNA与蛋白表达。并用脂联素干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统,观察其对破骨细胞生成的影响。 主要观察指标：分别采用荧光定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附法检测人成骨细胞护骨素和核转录因子κB受体活化素配体mRNA与蛋白表达,抗酒石酸磷酸酶染色确定为破骨细胞。 结果：脂联素呈剂量依赖性抑制人成骨细胞护骨素 mRNA与蛋白质的表达(P < 0.05)。脂联素呈剂量依赖性促进人成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体mRNA与蛋白的表达(P < 0.05)。脂联素干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统可诱导破骨细胞生成。 结论：脂联素可通过诱导成骨细胞核转录因子κB受体活化素配体表达、抑制护骨素表达,诱导破骨细胞生成。     

经鼻给予TGFβ1对氯化锂-匹罗卡品诱导的SE大鼠海马神经元凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨经鼻给予TGFβ1(Transforming growth factor-beta1,TGFβ1)对氯化锂-匹罗卡品诱导的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为TGF组、Pilo组和正常对照组(Control)。建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型。采用免疫组化方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果 (1)SE后24h、48h、72h,TGF组大鼠海马Bax阳性细胞均较Pilo组显著减少(P<0.05);72h最为明显(P<0.01)。HE染色是对各组大鼠海马神经元的形态结构变化的大体观察。(2)SE后24h、48h、72h,TGF组大鼠海马Bcl-2阳性细胞均较Pilo组显著增加(P<0.05);24h最为明显(P<0.01)。结论经鼻(IN)给予TGFβ1可以显著抑制癫痫持续状态诱导的大鼠海马神经元Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,从而发挥神经保护作用。     

姜黄素对癫痫持续状态后海马内质网应激相关分子表达的影响

目的探讨姜黄素对癫痫持续状态（SE）后海马内质网应激（ERS）标志分子免疫球蛋白结合蛋白（BiP）和ERS相关促凋亡分子如生长停滞、DNA损害可诱导基因153（GADD153）表达的影响。方法将90只SD大鼠随机分人SE组、姜黄素组和对照组。建立氯化锂一匹罗卡品大鼠SE模型。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）动态观察SE后海马BiP和GADD153的转录状况。结果（1）与对照组相比，SE组SE后2、4、6、24hBiPmRNA表达升高（P〈0．01），6h达高峰，24h开始下降（P〈0．01），72h恢复至正常水平；姜黄素组BiP mRNA表达的动态变化同SE组类似，但显著低于SE组（P〈0．05或0．01）。（2）与对照组比，SE组SE后2、4、6、24、72hGADD153mRNA显著上调（P〈0．01），SE后2h达高峰，24h开始下降（P〈0．01）。姜黄素组仅于SE后2、4hGADD153mRNA表达明显高于对照组（P〈0．01），且较SE组低（P〈0．01）。结论姜黄素有可能成为在体抑制ERS的有效药物；减轻ERS、抑制GADD153表达可能是姜黄素在SE后发挥神经元保护作用的重要机制。     

骨髓间充质干细胞对癫痫模型认知及海马区GABAA受体表达的影响

目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠癫痫模型认知功能及海马CA1区域γ氨基丁酸A受体(GABAARs)的表达的影响。方法成年雄性SD大鼠30只随机分为正常组(n=10),模型组(n=10)和实验组(n=10)。采用匹鲁卡品诱导癫痫模型,2 h后移植进行BMSCs移植,28 d后水迷宫检测认知变化,免疫组化和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测大鼠海马CA1区GABAARs的表达变化。结果 RT-PCR和免疫组化结果显示,模型组相比正常组GABAARα1表达水平(mRNA以及免疫组化染色强度)下调(P0.05)而GABAARα4上调(P0.05),移植组GABAARs相关改变比模型组轻微(P0.05),且认知功能改善明显(P0.05)。结论 BMSCs移植可调节大鼠癫痫模型中海马区域GABAARs表达水平并减轻癫痫相关认知障碍。     

颞叶癫痈大鼠海马内Rnd1 mRNA及蛋白表达变化

目的：动态观察小分子GTPase Rho家族的Rnd1 mRNA及其蛋白在氯化锂-毛果芸香碱（匹罗卡品）致痫大鼠模型海马中的表达变化，探讨其在颞叶癫痫发生发展中的作用。方法：在氯化锂-毛果芸香碱颞叶癫痫模型中应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测癫痫持续发作（SE）后各时间点海马内Rnd1 mRNA的表达变化，并运用免疫组织化学染色法及Neo—Timm染色法分别检测齿状回门区、CA1区及CA3区中该蛋白在不同时间点的表达变化及苔藓纤维出芽（MFS）情况。结果：实验发现模型组于SE后8h内即出现Rnd1表达上调，SE后约1d达高峰，7d左右回复至对照组水平，此后其mRNA表达水平与对照组相似；而免疫组化染色发现Rnd1蛋白表达从SE后8h内即开始上调，约3d达高峰，至7d虽略有回落，但仍高于对照组水平，且这种情况可一直持续至慢性期。结论：急性期海马齿状回门区Rnd1表达上调可能通过促进MFS的发生参与了颞叶癫痫的发生。     

活化素A对MPP^＋所诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的观察重组人活化素A(rhAcT)对MPP+所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法将MMP+或活化素A,L-deprenyl加入体外培养的PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力的变化;用免疫细胞化学法和RT-PCR评价细胞的酪氨酸羟化酶和bcl-2蛋白及mRNA含量的变化,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化,比较各组的差异.结果预先给予rhAcT和L-deprenyl的两组细胞活力明显高于MPP+损害组,酪氨酸羟化酶和bcl-2的蛋白及mRNA表达强于损害组,同时两组的凋亡细胞明显减少,rhAcT和L-deprenyl两组间无显著差异.结论rhAcT和L-deprenyl通过上调bcl-2的表达,抑制凋亡的发生,而对MMP+所诱导的PC12细胞的损伤具有保护作用.     

颞叶癫癇大鼠海马区NCX3 mRNA和蛋白的表达变化

目的：动态观察钠-钙交换体（NCX）mRNA和蛋白在氯化锂-匹罗卡品致癇模型大鼠海马CAl、CA3及齿状回区表达的变化，探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法：用氯化锂-匹罗卡品制备癫癇动物模型；应用原位杂交和免疫组化技术检测各时间点NCX3 mRNA和蛋白的表达。结果：急性期（6～24h）海马各区NCX3 mRNA表达均随时间的延长逐渐减少；进入静止期各区表达趋向回升，慢性反复自发发作期（30、60d）各区表达又出现不同程度的两次下调。除致癇后6h大鼠海马各区的NCX3蛋白表达无明显变化外，NCX3蛋白变化趋势与NCX3mRNA基本一致。结论：NCX3表达下调可能通过增加神经元钙超载，改变海马神经元的兴奋性，促使癫癇发生。     

癫(癎)大鼠海马凋亡诱导因子水平的改变及聚腺苷二磷酸核糖多聚酶抑制剂对其的影响

目的 探讨癫(癎)大鼠海马凋亡诱导因子(AIF)水平的改变及聚腺苷二磷酸核糖多聚酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对其的影响.方法 (1)30只Wistar大鼠随机分为对照组及癫(癎)发作后3 h(Ep 3 h组)、8 h(Ep 8 h组)、24 h(Ep24 h组)和72 h(Ep 72 h组)组,每组6只.应用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射建立癫(癎)模型.分别于相应时间点处死大鼠取脑,应用免疫印记法(Western blot)检测大鼠海马线粒体和细胞核AIF的水平.(2)18只Wistar大鼠随机分为对照组、匹鲁卡品致(癎)组、3-AB干预组,每组6只.3-AB干预组大鼠于致(癎)前30 min腹腔注射3-AB 40 mg/kg.于癫(癎)发作24 h后处死并应用Western blot检测大鼠海马线粒体和细胞核AIF的水平.结果 与对照组比较,Ep 24 h组和Ep 72 h组大鼠海马线粒体AIF水平明显减低,而细胞核AIF水平显著增高(均P<0.05);Ep 3 h组、Ep 8 h组与对照组大鼠海马线粒体及细胞核AIF表达水平比较,差异无统计学意义.与匹鲁卡品致(癎)组比较,3-AB干预组大鼠海马线粒体AIF水平显著增高,而细胞核AIF水平显著降低(均P<0.05);匹鲁卡品致(癎)组与对照组大鼠海马线粒体及细胞核AIF表达水平比较,差异无统计学意义.结论 癫(癎)发作使海马线粒体AIF水平降低,细胞核AIF水平增高,3-AB能明显抑制这一变化.