LINC01106靶向miR-744-5p影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨LINC01106对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 收集39例乳腺癌组织及癌旁组织,RT-qPCR法检测组织中LINC01106和miR-744-5p表达水平.体外培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别转染si-LINC01106、miR-744-5p模拟物、或共转染si-LINC01106与anti-miR-744-5p,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,免疫印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证LINC01106和miR-744-5p调控关系.结果 乳腺癌组织中LINC01106的表达高于癌旁组织(P＜0.05),miR-744-5p的表达低于癌旁组织(P＜0.05).干扰LINC01106或过表达miR-744-5p可降低MDA-MB-231细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及细胞中N-cadherin蛋白表达(P＜0.05),而促进了 E-cadherin蛋白表达(P＜0.05).LINC01106靶向负调控miR-744-5p,干扰miR-744-5p可逆转干扰LINC01106对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 LINC01106在乳腺癌组织中表达升高,其可能通过靶向负调控miR-744-5p促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,有可能成为乳腺癌治疗的新分子靶点.     

miR-17-5p通过靶向调控PTEN表达抑制乳腺癌的增殖、侵袭及迁移

目的 探讨miR-17-5p在乳腺癌中的表达和对乳腺癌细胞的调控作用及其作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot方法检测乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p和PTEN的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移。Western blot检测PTEN蛋白表达变化;采用荧光素酶活性检测miR-17-5p与PTEN的相互作用。结果 与对照组相比,乳腺癌组织和细胞中miR-17-5p表达升高,同时PTEN水平降低。体外实验发现,miR-17-5p的敲减能够抑制乳腺癌细胞增殖和转移。荧光素酶报告基因实验发现PTEN是miR-17-5p的靶点。miR-17-5p下调促进乳腺癌细胞PTEN蛋白的表达。结论 miR-17-5p与乳腺癌患者预后相关,同时miR-17-5p下调能显著抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移。     

miR-96-5p靶向HOXA9促进乳腺癌细胞增殖侵袭的机制研究

目的 探究miR-96-5p靶向同源盒基因A9(HOXA9)促进乳腺癌细胞增殖侵袭的机制。方法 收集2022年9—12月经手术切除的60例乳腺癌、癌旁组织样本及患者完整临床资料,miRNA微阵列分析2对乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNA。qRT-PCR检测乳腺癌、癌旁组织及乳腺癌细胞系miR-96-5p表达水平,分析miR-96-5p表达与临床病理特征的关系。通过MTT、克隆形成、EdU法、划痕、Transwell实验与体内异种移植实验检测miR-96-5p对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的影响,分析预测miR-96-5p与HOXA9的靶向作用关系。WB检测乳腺癌、癌旁组织、细胞HOXA9、Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路蛋白表达,统计裸鼠成瘤体积、质量、肝转移灶数量,免疫组化检测肿瘤HOXA9、β-catenin表达情况。结果 qRT-PCR检测结果显示,乳腺癌组织miR-96-5p水平升高（P<0.05）,HOXA9水平降低（P<0.05）。miR-96-5p高表达与肿瘤大小≥3 cm、淋巴结转移阳性、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期相关（P<...     

LINC00667靶向miR-154-5p调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的分子机制研究

目的 探讨LINC00667调控乳腺癌细胞增殖及凋亡的可能作用机制。方法 收集2020年5月至2020年8月邯郸市中心医院收治的51例乳腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测LINC00667、miR-154-5p的表达量;体外培养人乳腺癌细胞T-47D,si-NC、si-LINC00667、miR-NC、miR-154-5p mimics分别转染至T-47D细胞,si-LINC00667和anti-miR-NC、si-LINC00667和anti-miR-154-5p分别共转染至T-47D细胞;MTT法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-154-5p过表达对野生型载体WT-LINC00667与突变型载体MUT-LINC00667荧光素酶活性的影响;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中LINC00667的表达量升高（P<0.05）,miR-154-5p的表达量降低（P<0.05）;转染si-LINC00667或转染miR-154-5p mimi...     

miR-32-5p靶向ZEB1、ZEB2基因调控乳腺癌增殖和侵袭能力的机制

目的探讨ZEB1和ZEB2在乳腺癌中的作用及miR-32-5p对乳腺癌调控的分子机制。方法通过Western blot和qRT-PCR检测乳腺癌和癌旁组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p的表达,筛选出ZEB1和ZEB2高表达的乳腺癌细胞系,采用Western blot和qRT-PCR检测敲减效率。应用克隆形成、迁移和侵袭实验检测敲减ZEB1或ZEB2后对乳腺癌细胞生物学行为的影响,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统检测miR-32-5p与ZEB1或ZEB23′UTR区域的结合。Western blot、迁移和侵袭实验检测抑制miR-32-5p后对上皮-间质转化相关蛋白、迁移和侵袭的影响。结果乳腺癌组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p mRNA表达高于癌旁组织。乳腺癌组织中miR-32-5p表达和ZEB1、ZEB2表达呈正相关。MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7三种细胞中,MCF-7细胞ZEB1和ZEB2表达水平较高。敲减ZEB1或ZEB2后,形成的克隆数目减少,迁移和侵袭能力减弱,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。ZEB1或ZEB23′UTR区域存在miR-32-5p的结合位点,抑制miR-32-5p会增加迁移和侵袭能力,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。增加ZEB1或ZEB2表达会使抑制作用减弱。结论miR-32-5p通过靶向ZEB1和ZEB2调控E-cadherin和vimentin蛋白表达,抑制乳腺癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

miR-342-3p 在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征、 远期预后的相关性

目的研究 miR-342-3p 在乳腺癌中表达及其与临床病理特征、 远期预后的相关性。方法选择 2014 年 1 月 ~ 2015 年 2 月期间在南平市第一医院接受乳腺癌根治术的患者作为乳腺癌组, 同期接受手术切 除的乳腺良性肿瘤患者作为对照组, 检测乳腺癌组织及乳腺良性肿瘤组织中 miR-342-3p 的表达水平, 随访 乳腺癌患者的总生存 (OS) 及无病生存 (DFS), 采用 Kaplan-Meier 曲线分析 miR-342-3p 的表达水平与 OS、 DFS 的关系, 采用 COX 比例风险模型分析 OS、 DFS 的影响因素。 在乳腺癌 MCF7 细胞中转染 miR-NC 序列及 miR-342-3p 模拟物, 检测细胞活力水平及 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平。结果乳腺癌组织 中 miR-342-3p 的表达水平明显低于乳腺良性肿瘤组织 (P< 0. 05), 且不同 T 分期、 淋巴结转移、 分子分 型、 Ki-67 表达的乳腺癌组织间比较, miR-342-3p 表达水平有显著差异 (P< 0. 05)。 Kaplan-Meier 曲线分析 显示, 相比于 miR-342-3p 高表达患者, miR-342-3p 低表达患者的 DFS 和 OS 均缩短。 COX 比例风险模型分 析显示, 淋巴结转移、 Ki-67 表达、 miR-342-3p 表达是乳腺癌患者 DFS 和 OS 的影响因素。 miR-342-3p 高表 达的乳腺癌组织中 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平低于 miR-342-3p 低表达的乳腺癌组织。 miR-342-3p 组 MCF7 细胞中细胞活力及 AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 的表达水平均低于 miR-NC 组。结论乳腺癌中 miR-342-5p 低表达且其低表达与病理特征恶化有关, miR-342-5p 低表达是乳腺癌患者预后的影响因素, AKT2、 Bcl2L1、 FOXQ1 可能是 miR-342-5p 参与乳腺癌发展的潜在分子机制。     

卵巢癌组织中miR-574-5p的表达及其下调后对SKOV-3细胞增殖与侵袭的影响

目的观察miR-574-5p在卵巢组织中的表达及下调miR-574-5p表达对卵巢癌细胞株SKOV-3增殖与侵袭的影响。方法实时PCR检测41例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织miR-574-5p的表达;随机将SKOV-3细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-574-5p抑制物组,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。结果卵巢癌组织中miR-574-5p相对表达量为1.29±0.18,显著高于癌旁正常卵巢组织的0.51±0.07(P0.01);转染miR-574-5p抑制物后,SKOV3细胞的增殖能力明显下降,穿膜能力亦明显减弱(P0.01)。结论卵巢癌组织中miR-574-5p的表达水平异常增高,抑制miR-574-5p的表达能够降低SKOV3细胞的增殖与侵袭。     

miR-7-5p、ABCC1在子宫内膜癌组织中的表达及对Ishikawa细胞增殖、EMT的影响

目的 探讨微小RNA-7-5p(miR-7-5p)、ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)在子宫内膜癌（EC）组织表达及其对EC细胞（Ishikawa）增殖及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 选取2018年6月至2021年12月期间在保定市妇幼保健院进行手术治疗的120例EC患者作为观察对象，手术取癌组织及癌旁组织，检测EC组织与癌旁组织miR-7-5p、ABCC1 mRNA及蛋白表达水平，分析miR-7-5p、ABCC1与EC临床病理特征的关系。将Ishikawa细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-7-5p mimics组、si-NC组，si-ABCC1组、miR-7-5p mimics+pcDNA组、miR-7-5p mimics+ABCC1组，RT-qPCR检测各组细胞miR-7-5p、ABCC1mRNA表达水平，MTT法与流式细胞仪分别检测细胞增殖与凋亡，Western blot检测ABCC1、E-cadherin、α-catenin、Vimentin蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-7-5p与ABCC1的靶向关系。结果 与癌旁组织比较，EC组织中m...     

miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法应用qRT-PCR法检测96例肝癌组织及癌旁组织中miR-212-5p表达水平,同时设HepG2细胞组、miR-212-5pmimics组与miR-212-5pinhibitor组。培养72h后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭与迁移水平;qRT-PCR法检测细胞miR-212-5p表达水平。结果 肝癌组织中miR-212-5p表达水平升高,肿瘤最大径≥2cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越低、有淋巴结转移、有复发的肝癌患者miR-212-5p高表达率更高（P<0.05）。miR-212-5p模拟物能增强HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制HepG2细胞凋亡（P<0.05）;miR-212-5p抑制剂能抑制HepG2细胞活力、增殖、侵袭及迁移能力,促进HepG2细胞凋亡（P<0.05）。结论 miR-212-5p在肝癌组织中高表达,miR-212-5p可促进HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制...     

miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭

目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的m RNA(P3 m RNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、Hep G2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 m RNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 m RNA与miR-483-5p表达水平之间的关系。(2)将IGF2基因P3 m RNA的5’端非翻译区(5’UTR)克隆入p GL3启动子载体,构建P3 m RNA 5’UTR野生型(p GL3-P3-5’UTR-WT)及P3 m RNA 5’UTR突变型(p GL3-P3-5’UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染He La、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性。(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 m RNA表达水平的变化。(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 m RNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 m RNA稳定性影响。(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 m RNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关。(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3m RNA 5’UTR的同源位点互补结合可促进P3 m RNA的表达。(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 m RNA表达水平的增高。(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 m RNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 m RNA稳定性。(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力。结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 m RNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生。