CISD2基因沉默通过AKT通路抑制人骨肉瘤细胞U2OS的增殖

目的检测CDGSH铁硫结构域2 (CDGSH iron sulfur domain 2, CISD2)基因对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。方法应用化学合成小干扰RNA技术沉默人骨肉瘤细胞系U2OS中CISD2基因的表达,分别通过免疫荧光染色与Western blot实验检测基因沉默效率;通过MTT实验与克隆形成实验,研究沉默CISD2基因对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot实验检测AKT,p-AKT蛋白的表达。结果设计的siRNA抑制人类骨肉瘤细胞系U2OS细胞CISD2基因表达。沉默CISD2基因抑制U2OS细胞的增殖能力与克隆形成能力;流式细胞术实验结果表明沉默CISD2可以诱导U2OS细胞G_0/G_1期抑制;Western blot实验显示沉默CISD2可以抑制p-AKT蛋白的表达。结论沉默CISD2基因抑制骨肉瘤细胞系U2OS的增殖能力与抑制AKT信号传导通路相关。     

下调HMGA2基因表达对改善骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验研究

目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;经Cell Counting Kit-8(CCK8)测定、Hoechst33342染色荧光显微镜观察及Boyden小室法分别检测细胞增殖、凋亡及迁移情况;实时定量RT-PCR检测mRNAs表达水平。结果:稳定转染靶向HMGA2的shRNA可特异性下调U2OS细胞HMGA2 mRNA表达水平;其作用结果使细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,自发凋亡率及Caspase 3和Caspas 9基因表达水平显著升高。结论:HMGA2基因异常表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中起重要作用,靶向HM-GA2的基因治疗可能为骨肉瘤治疗带来新希望。     

RNA干扰组蛋白去乙酰化酶4诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的探讨沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)对骨肉瘤细胞HOS,U2OS生物学行为的影响。方法用脂质体瞬时转染法将化学合成HDAC4-siRNA转染至骨肉瘤HOS及U2OS细胞中,实时荧光定量PCR(q-PCR)法检测细胞中HDAC4 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞HDAC4及其下游基因HIF-1α的蛋白表达;CCK-8法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果转染后HOS及U2OS细胞中HDAC4 mRNA表达明显降低(P0.01)。沉默HDAC4后HOS细胞早期凋亡率为(16.8±2.1)%,较si-control组(10.2±2.5)%明显增加(P0.05);U2OS细胞早期凋亡率为(21.4±3.1)%,较si-control组(12.5±2.3)%明显增加(P0.05);HOS细胞si-con组及si-HDAC4组细胞的穿膜细胞数分别为(146±34)个、(45±20)个,U2OS细胞为(207±35)个、(121±23)个,分别显著低于si-con组(P0.05)。si-HDAC4能够明显降低HDAC4以及下游基因HIF-1α的表达。结论针对HDAC4基因的特异性RNA小干扰片段能够下调HDAC4mRNA及蛋白的表达,并抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,诱导细胞凋亡。     

下调LRH1 对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法：采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组（Ctrl）、阴性对照（NC）-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果：与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-...     

莪术醇抑制人骨肉瘤细胞系的增殖和促凋亡

目的 探究莪术醇对人骨肉瘤细胞系MG-63和U2OS体外增殖、凋亡的影响和作用机制。方法 将MG-63细胞和U2OS细胞分为对照组、莪术醇20、40、80和160μmol/L干预组;MTT法检测MG-63、U2OS细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞测量细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、caspase和β-catenin的mRNA和蛋白表达。结果 莪术醇呈浓度依赖性地抑制MG-63和U2OS细胞增殖,IC₅₀值分别为128.03μmol/L、117.95μmol/L。与对照组相比,莪术醇显著抑制MG-63、U2OS细胞的体外迁移和侵袭(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,莪术醇组促进Bax、caspase 3表达,抑制Bcl2表达(P<0.05),MG-63、U2OS细胞内β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达均被显著抑制(P<0.05)。结论 莪术醇显著抑制人骨肉瘤细胞系MG-63、U2OS增殖,诱导细胞凋亡。     

骨肉瘤中PRR11蛋白的表达及对骨肉瘤进展的影响

目的研究PRR11基因在骨肉瘤中的表达情况,观察PRR11对骨肉瘤细胞增殖及转移的影响。方法采用免疫组化方法观察75例骨肉瘤及配对肉瘤旁组织中的PRR11蛋白表达情况;Western blot检测不同骨肉瘤细胞系中PRR11的蛋白表达水平;利用慢病毒建立稳定低表达PRR11的SaOS2细胞模型并检测低表达PRR11对骨肉瘤细胞SaOS2细胞增殖能力的影响。结果 PRR11在骨肉瘤组织中的表达明显高于肉瘤旁组织,其在骨肉瘤及对应肉瘤旁组织中的表达率分别为76.00%(57/75)和9.33%(7/75),差异有统计学意义(P0.05)。PRR11表达与肿瘤的病理分级及淋巴结转移有关。PRR11在SaOS2、143B、U2OS、MG63这4株骨肉瘤细胞系中均有表达,并在SaOS2中表达最高。干扰SaOS2细胞的PRR11基因表达后,细胞的增殖及克隆形成能力相应降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论骨肉瘤的发生发展是多基因、多步骤的复杂过程,PRR11在骨肉瘤中高表达,且与肿瘤的进展相关,可作为骨肉瘤早期诊断与临床干预的新靶标。     

沉默Cat D对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及相关信号通路

研究组织蛋白酶D(cathepsin D,Cat D)在骨肉瘤细胞中的表达，并通过shRNA技术沉默Cat D,探讨该分子对骨肉瘤细胞MG63和U2OS增殖、凋亡及侵袭的作用和机制。构建sh-Cat D质粒及阴性对照质粒sh-NC并转染至骨肉瘤细胞MG63和U2OS中，RT-PCR和Western blotting检测Cat D在骨肉瘤细胞中的表达；CCK-8法、克隆形成实验和EdU荧光染色实验检测骨肉瘤细胞的增殖活性；Transwell实验检测肿瘤细胞的侵袭能力；FACS检测肿瘤细胞的凋亡情况；Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达及Akt/mTOR信号通路相关蛋白(Akt和mTOR)的磷酸化水平。结果显示，相较健康人成骨细胞hFOB,Cat D在骨肉瘤细胞中的表达显著升高，尤其是MG63和U2OS细胞中Cat D的高表达均显著(均P<0.001)。与sh-NC组相比，Cat D沉默显著抑制MG63和U2OS细胞的增殖和侵袭(均P<0.001)。与sh-NC组相比，Cat D沉默通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达促进肿瘤细胞的...     

探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制

目的 探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制。方法 在骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、筛选稳定顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)、慢病毒转染稳定FoxM1过表达细胞株(HOS/FoxM1、U2OS/FoxM1)及空载体对照(HOS/NC、U2OS/NC)中，采用Western blot法检测FoxM1和c-myc蛋白的表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测FoxM1抑制剂RCM-1对骨肉瘤细胞顺铂敏感性的影响；采用生物信息学方法分析FoxM1和c-myc表达与患者预后的关系。结果 FoxM1和c-myc在骨肉瘤顺铂耐药细胞中的蛋白表达比亲本细胞明显升高。与空载体对照组中FoxM1(0.26±0.03 vs 0.37±0.02)、c-myc(0.35±0.07 vs 0.59±0.03)相比，FoxM1过表达细胞中FoxM1(0.81±0.13 vs 0.61±0.01)和c-myc(1.19±0.08 vs 1.61±0.13)蛋白表达升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。采用10μmol/L FoxM1抑制剂RCM-1处理后，顺铂耐药细胞(Fo...     

FOXM1与CENP-A在骨肉瘤化疗耐药中的关系及其作用机制

目的 探讨CENP-A是否参与骨肉瘤细胞化疗耐药及与叉头框蛋白M1(forkhead box M1, FOXM1)的调控关系。方法 采用Western blot法检测骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)和稳定FOXM1过表达细胞(HOS/FOXM1、U2OS/FOXM1)中CENP-A蛋白表达。转染siRNA后检测CENP-A蛋白表达；运用CCK-8细胞增殖实验观察siRNA敲低CENP-A后耐药骨肉瘤细胞对顺铂敏感性的影响；FOXM1抑制剂RCM1处理后检测CENP-A蛋白表达。Kaplan-Meier法分析GEPIA数据库中CENP-A表达与患者预后的关系，Spearman相关性分析CENP-A和FOXM1两者之间的关系。结果 骨肉瘤顺铂耐药细胞中CENP-A蛋白表达比亲本细胞明显升高(0.52±0.03 vs 0.92±0.01, 0.33±0.02 vs 1.12±0.01),FOXM1过表达细胞中CENP-A表达较空载体对照亦明显增高；在骨肉瘤顺铂耐药和FOXM1过表达细胞中转染siRNA-CENP-A后，CENP-A蛋白表达均明显降低...     

Gab2在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及意义

目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Gab2)在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法:应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞,采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表达水平;体外细胞趋化运动实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:Gab2在人骨肉瘤U2-OS细胞系中高表达,且转染Gab2 siRNA后的细胞(Si Gab2/U2-OS)中Gab2蛋白及mRNA的表达水平低于转染scramble siRNA细胞(Scr/U2-OS)和U2-OS;趋化运动实验发现在10μg/L表皮生长因子(EGF)的诱导下Si Gab2/U2-OS细胞的迁移能力较U2-OS和Scr/U2-OS细胞明显下降,差异有统计学意义(P0.01);Si Gab2/U2-OS细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比Scr/U2-OS细胞和U2-OS细胞少,Si Gab2/U2-OS细胞的体外侵袭能力显著降低(P0.01)。结论:利用siRNA干扰技术降低Gab2的表达对人骨肉瘤U2-OS细胞的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。     

抗核糖体P蛋白及亚型抗体在系统性红斑狼疮临床诊断中的价值

目的:探讨抗核糖体P蛋白(Rib-P)及亚型(Rib-P0、 P1和P2)抗体在系统性红斑狼疮(SLE)中的诊断价值.方法:分别检测375例SLE患者血清中的抗Rib-P、 P0、 P1和P2抗体, 分析抗Rib-P系列抗体在SLE诊断中的意义.结果:(1)抗Rib-P、 P0、 P1和P2抗体的敏感性分别为:32.8%、 39.4%、 55.1%和37.4%, 特异性分别97.7%、 97.7%、 95.5%和94.9%.SLE患者血清中抗Rib系列抗体的敏感性和特异性无统计学差异.(2)抗Rib-P0、 P1、 P2抗体在133例抗Rib-P抗体阴性的SLE中阳性率分别为18.0%、 36.1%和15.8%.抗dsDNA抗体或抗Sm抗体阴性的SLE中有20.3%～44.6%的抗Rib-P系列抗体呈阳性.(3)抗Rib-P0, P1, P2蛋白抗体中阳性组狼疮精神损害的发生率均高于阴性组(P＜0.05).其中抗Rib-P和P2抗体阳性组的发生率显著高于阴性组(P＜0.01).结论:抗Rib-P蛋白及亚型抗体均为SLE特异性的自身抗体, 该系列抗体对抗dsDNA抗体或抗Sm抗体阴性的SLE患者诊断有参考意义, 并且与狼疮精神损害相关.     

P504S,34βE12,P63及前列腺特异性抗原在前列腺癌中的表达特点及诊断意义

目的:观察α-甲基-辅酶A-消旋酶(alpha-methylacyl-CoA racemase,P504S)、角蛋白-903(34βE12)、P63及前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)在不同性质前列腺穿刺标本中的表达特点,探讨它们在前列腺癌病理诊断及鉴别诊断中的意义.方法:收...     

尼莫地平对癫痫太鼠海马P75NTR和P513蛋白表达的影响

目的：探讨尼莫地平（NM）对戊四氮（PTZ）点燃癫痫持续状态（SE）大鼠海马P75NTR和P53蛋白表达的影响,以期为临床应用尼莫地平治疗癫痫提供充分的理论依据。方法：动物分为正常对照组,PTZ组和NM组,模型诱导成功后,观察大鼠行为学改变,并取脑常规HE染色,并用免疫组化方法分别检测各组大鼠海马神经元凋亡相关基因P75NTR和P53的表达。结果：PTZ组大鼠有典型的SE发作,其海马P75NTR和P53表达较对照组明显增加（P〈0．05）,与PTZ组比较,NM组大鼠海马P75NTR和P53表达均减少（P〈0．05）。结论：NM有神经保护作用,其机理可能与抑制癫痫大鼠海马凋亡相关基因的发生有关。     

Effects of substance P antagonists on the atropine-sensitive and atropine-resistant responses of guinea-pig ileum to substance P

The effects of substance P (SP) antagonists on the atropine-sensitive and atropine-resistant responses to SP of guinea-pig isolated ileum were investigated. The atropine-resistant response to SP was the contractile response on untreated preparations, and the atropine-sensitive response was the response to high concentrations of SP (5 X 10(-7) M) on preparations desensitized to SP with a concentration of SP of 3 X 10(-7) M. The SP antagonists tested, (D-Pro2,D-Phe7,D-Trp9)-SP, (D-Pro2,D-Trp7,9)-SP, (D-Arg1,D-Pro2,D-Trp7,9,Leu11)-SP and (D-Arg1,D-Trp7,9,Leu11)-SP (spantide), did not have similar orders of potency on the atropine-sensitive and atropine-resistant responses to SP, spantide being more potent than the other antagonists on the atropine-resistant response but no more potent on the atropine-sensitive response than (D-Pro2,D-Phe7,D-Trp9)-SP or (D-Arg1,D-Pro2,D-Trp7,9,Leu11)-SP. These findings are consistent with the hypothesis that neuronal receptors for SP differ from those on smooth muscle in guinea-pig ileum.     

抑郁症患者的多导联听觉P3a和P3b事件相关电位研究

目的：研究抑郁症患者的16导联听觉事件相关电位P300的脑区强度分布。方法：选择抑郁症患者27例和正常人30名，用脑诱发电位仪记录受试者16导事件相关电位P3a和P3b，分析受试者在额区、颞区、中央区和顶区的P300幅度分布，比较抑郁症患者和正常对照组的显著差异。结果：抑郁症患者的P3a、P3b幅度的额区／顶区比值较正常对照组都发生显著降低（P〈0．01），颞区／顶区比值也显著降低（P〈0．01），中央区／顶区比值同样显著降低（P〈0．01），另外，抑郁症患者的额1区／额2区P3b幅度比值显著降低。结论：通过多导联记录P300，并分析P300幅度在脑区间的相对强弱关系，将能获得抑郁症患者的异常ERPs特征，并能提示主要相关脑区的功能状况，因此，有助于提高P300诊断抑郁症的特异性水平。     

Functional Differences Between Members of the P300 Complex: P3e and P3b

The main findings of this study bear upon differences in the functional roles of P3b and a shorter latency, more centrally distributed endogenous positive component denoted as P3e. At the present writing, we have observed P3e only in conjunction with P3b. As in the case of P3b, P3e is fully endogenous in that it can be- elicited by omission of a stimulus if stimulus omission conveys relevant information to the subject. It was found that P3e and P3b relate differently to information delivery. Information delivery was manipulated by varying event probabilities and the discriminability of the events. The well known properties of P3b, namely that its amplitude is large when elicited by low probability (high information content) events and is reduced by perceptual difficulty (information loss-equivocation), were replicated in the current study. In contrast to P3b, variation of event probability had no effect upon P3e amplitude, but increased perceptual difficulty markedly reduced P3e amplitude. In addition, two CNV-type negativities were observed in the epochs prior to presentation of the informative signal event: 1) A negativity that was maximal over central scalp related to the subject's prediction that a rare or frequent event would be presented; 2) A negativity that was maximal over occipital scalp related to a stimulus that informed the subject whether the subsequent discrimination of the signal would be easy or difficult. Finally, there was a serendipitous Hading of an apparently new short duration component, tentatively labeled Px, which is elicited by presentation of the signal that informs the subject whether the subsequent discrimination will be easy or difficult.     

P53、端粒酶与胃癌及癌前病变关系的研究进展

胃癌是常见的恶性肿瘤之一，胃癌的发生是一个多因素、多阶段、多基因变异的病理过程。近年来人们一直在不断地研究与胃癌有关的基因。自1983年Warran和Mashall发现幽门螺杆菌（Hpylon）以来，人群和动物实验均证明Hpylori的感染与胃癌的发生密切相关。1994年国际癌症研究机构将H．pytori明确为I类人类致癌原目前，Hpylori已经被国际上确认为胃癌的主要病因之一．现有的研究表明端粒酶的激活是细胞获得永生化以及形成恶性肿瘤的一个重要步骤，端粒酶的阳性表达与人类恶性肿瘤的发生有着非常密切的关系，而P53基因能够维持细胞的正常生长，抑制恶性增殖，启动细胞的程序性死亡，P53基因的失活可导致细胞的恶性转化，与胃癌的发生密切相关。作者通过翻阅国内外最新的文献就P53、端粒酶与胃癌及癌前病变三者的关系做一综述。     

女性主观性唤起状态下的听觉事件相关电位研究

目的:研究性感听觉材料引起的女性主观性唤起状态的听觉事件相关电位特征。方法:编制性感听觉材料;用主观性唤起多元评价指标调查广告招募的30名女性聆听性感听觉材料后的主观性唤起状态;应用德国Brain-Product,BP-ERP工作站,测量并分析25名女性由纯音、放松音乐及性感听觉材料引发的听觉事件相关电位;采用单个重复测量因素方差分析的方法对P3潜伏期进行分析,采用多个相关样本的非参数检验的方法对P3波幅作分析。结果:(1)主观性唤起多元评价指标显示被试听性感听觉材料后达到轻中度主观性唤起水平;(2)性感听觉材料背景下多导联P3波幅低于放松音乐背景;两者潜伏期差异无统计学意义;(3)Odd-ball范式被试报告靶刺激的正确率在性感听觉材料背景下最低。结论:性感听觉材料能引起女性主观性唤起;女性在主观性唤起状态时P3波幅明显降低,比一般的放松状态更集中于对自身的体验。     

肝性脑病患者事件相关电位P300初探

目的:探讨肝性脑病(HE)患者事件相关电位(ERP)P300表现特征,为了解HE诊断、治疗中的脑功能状况提供客观依据.方法:对36例HE患者进行ERP的P300测定,并与30例年龄、性别等相匹配的正常人作对照.结果:HE患者P300潜伏期(PL)为(410.34±47.07)ms,波幅(Amp)为(3.72±O.1μV),与止常对照组相比差异有显著意义;P3D0异常率为83%,其中PL延长者占40%(15例),PL及Amp均异常者占33%(10例),仅Amp降低者占16%(5例);P300异常(PL延长及Amp降低)与代谢异常密切相关,P300之异常随代谢异常改善而改善.结论:ERP的P300对HE患者的认知功能评定及治疗效果观察有一定的临床意义.