芦荟大黄素对人肺腺癌细胞顺铂多药耐药性的逆转作用

目的：以耐顺铂人肺腺癌细胞系A549／DDP为研究对象，检测芦荟大黄素（aloe emodin，AE）能否逆转其对顺铂（DDP）的耐药性。方法：采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数，电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定细胞内顺铂浓度。结果：芦荟大黄素5mg·L^-1能增加A549／DDP细胞对DDP的敏感性，使DDP的半数抑制质量浓度IC50由16．81mg·L^-1降至5．86mg·L^-1；能提高DDP在A549／DDP细胞内的浓度。结论：AE能部分逆转A549／DDP细胞的MDR，其机制与增加细胞内药物浓度有关。     

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg·ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23±0．04）μg·ml^-1和（0．26±0．02）μg·ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63±0．31）μg·ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

Twist1基因在A549与A549/DDP细胞中的表达及意义

目的　检测人Twist1 基因在A549 与A549/DDP 细胞株中的表达,探讨Twist1 与肺腺癌顺铂耐药的相关性。方法　通过细胞计数,观察不同浓度梯度顺铂干预24 h 后A549 细胞和A549/DDP 细胞的生长情况;用RIPA 裂解液裂解A549、A549/DDP 细胞,充分游离细胞总蛋白,用BCA 法检测总蛋白浓度,ELISA法检测Twist1 转录因子的浓度。结果　定义m 值（m=Twist1 转录因子浓度/ 总蛋白浓度）。浓度为0、10、20、30、40、50 mg/L的顺铂干预下,分别测得A549 与A549/DDP 的m 值为3.01/3.31、2.17/2.82、1.63/2.94、1.73/1.99、-/1.31、-/-,A549/DDP 细胞的m 值显著大于A549 细胞（P<0.05）。结论　Twist 1 基因在人顺铂耐药肺腺癌细胞中表达增高,提示Twist1 可能与肺腺癌顺铂耐药相关。     

异钩藤碱逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂耐药性

目的 研究异钩藤碱(IR)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性.方法 采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度.结果 IR无细胞毒浓度组(3.0μg·mL-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg·L-1降至3.36 mg·L-1;低细胞毒浓度(8.0μg·mL-1)组的IC50降至2.34 mg·L-1;2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度.结论 研究表明IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,并可增加肿瘤细胞内DDP药物浓度.     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

应用ICP—MS快速测定人血白蛋白中铝残留量

目的：建立ICP—MS测定人血白蛋白中铝残留量的方法。方法：样品用去离子水直接稀释，以Li（6）为内标元素，采用标准曲线法测定。ICP—MS参数为：功率1．35kW，载气流速1．18L&#183;min^-1，采样深度7mm，全定量分析模式。结果：铝离子浓度在0—50μg&#183;L^-1范围内呈良好的线性关系（r=0．9999），平均回收率为101．4％。对ICP—MS法和GF～AAS法的测定结果进行t检验，2种方法没有差异。结论：本方法简便、快捷和准确，可作为人血白蛋白中铝残留量测定方法之一。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的:比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法:不同浓度顺铂(cisplatin, DDP)干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)表达水平;应用10μmol/L顺铂(相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC₅₀值)干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白(p-FOXO3a)表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf A1)干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A5...     

SPE-GC-ECD法测定中成药中20种有机氯类农药残留量

目的：建立中成药中20种有机氯农药残留量的测定方法。方法：采用正己烷作为提取溶剂，经弗罗里硅土小柱净化，选用电子捕获检测器（ECD）进行气相色谱测定。结果：20种有机氯农药在0．4～500μg&#183;L^-1范围内呈良好的线性关系；检测限在0．04～2．62μg&#183;L^-1之间，定量限存0．12～7．94μg&#183;L^-1之间；低（5μg&#183;L^-1）、中（50μg&#183;L^-1）、高（100μg&#183;L^-1）3个水平的添加回收试验的回收率（n=18）为72．2～125．3％，各回收率的RSD在3．2％～20．7％之间，符合残留量测定的有关要求。结论：方法简便、准确可靠，重复性较好，可作为中成药中有机氯农药残留的检验方法。     

瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株耐药及凋亡的影响

目的探讨瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡率及耐药基因表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物、顺铂分别及联合处理人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP,用MTT法检测肺癌细胞凋亡率、实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance protein1,MRP1)基因mRNA水平以及用Westernblot检测多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein1,MRP1)的表达水平。结果不同浓度瑞香狼毒水提取物作用相同时间或相同浓度作用不同时间对A549和A549/DDP的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒处理前后A549/DDP细胞株与A549细胞株相比,对顺铂的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);同时两细胞株与瑞香狼毒和顺铂联合孵育后MRP1mRNA水平及MRP1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒水提取物有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对肺癌耐药具有一定的逆转作用。     

眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究

目的：研究广西眼镜蛇毒神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡。方法：应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP—TCA法）测定不同质量浓度（0．0125，0．025，0．05，0．1，0．2g&#183;L^-1）NGF处理24，48，72，96h对人鼻咽癌CNP2生长的抑制率；Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态；琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况；流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果：不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖，并呈浓度时间效应关系，作用24，48，72，96h的半数抑制浓度（IC50）分别为0．213，0．095，0．048，0．033g&#183;L^-1；经NGF（0．1g&#183;L^-1）处理细胞48h后，荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征；DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段；0．（15，0．1，0．2g&#183;L^-1 NGF作用48h后，CNB2细胞被阻滞于G0／G1期，细胞凋亡率分别为（28．2&#177;2．0）％、（39．9&#177;1．9）％、（50．3&#177;1．3）％。结论：NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性。     

液相色谱-串联质谱法研究人体内马来酸氨氯地平滴丸的生物等效性

目的：研究健康人口服马来酸氨氯地平滴丸后的药动学和生物等效性。方法：20个健康受试者采用随机分组自身交叉对照试验设计，口服马来酸氨氯地平滴丸10mg后应用LC／MS／MS测定血浆中氨氯地平浓度，以DAS2．0软件计算其药动学参数和评价生物等效性。结果：在选定的色谱／质谱条件下氨氯地平与内标及血浆杂质分离良好，在0．2～16．0μg&#183;L^-1范围内线性良好。相对回收率大于95．420，日内和日间RSD小于12．6%,氨氯地平受试制剂（T）和参比制剂（R）的主要药动学参数：tmax分别为（5．7&#177;0．8）h和（6．0&#177;1．0）h，Cmax分别为（5．3&#177;1．4）μg&#183;L^-1和（5．3&#177;1．4）μg&#183;L^-1；t1/2分别为（43．7&#177;4．4）h和（44．6&#177;4．3）h；AUC0→∞分别为（188．2&#177;49．6）μg&#183;h&#183;L^-1和（185．0&#177;44．8）μg&#183;h&#183;L^-1；用面积法（AUC0→∞）估算的马来酸氨氯地平滴丸相对生物利用度为（102．0&#177;13．6）%。结论：用LC／MS／MS测定血浆中氨氯地平浓度，杂质无干扰，定量限低，重复性好，准确度高。受试的马来酸氨氯地平滴丸与参比的马来酸氨氯地平片（麦利平）生物等效。     

高效液相色谱法测定beagle犬血浆中神衰果素的浓度

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定beagle犬血浆中神衰果素的含量的方法。方法：色谱柱采用Diamon-sil ODS C18柱（4．6mm&#215;150mm，5μm），以乙腈-甲醇-0．02mol&#183;L^-1磷酸二氢钠缓冲液（1：9：90）（磷酸二氢钠缓冲液用磷酸调pH3．0）为流动相，原儿茶醛为内标；流速为1．0mL&#183;min^-1；柱温为30℃；检测波长为270nm。结果：HPLC法测定beagle犬血浆中神衰果素的线性范围为21．3-4260μg&#183;L^-1，r=0．9995.低（42．6μg&#183;L^-1）、中（426μg&#183;L^-1）、高（2130μg&#183;L^-1）3个质量浓度的方法回收率分别为（96．7&#177;13．5）％，（95．6&#177;7．6）％，（99．9&#177;1．4）％，日内、日间RSD均小于15％；分析方法的最低定量限为21．3μg&#183;L^-1。结论：本方法适用于神衰果素血药浓度测定和药动学研究。     

244例次地高辛血药浓度监测及影响因素分析

目的：通过对地高辛血药浓度监测结果分析，为临床合理用药提供参考。方法：采用化学发光免疫法测定地高辛血药浓度，对244例次血药浓度监测结果进行分析比较。结果：244例次地高辛质量浓度测定值在0．8～2．0μg&#183;L^-1共156例次，占63．94%，低于治疗浓度范围下限（〈0．8μg&#183;L^-1）的50例次，占20．49%，高于治疗浓度范围上限（〉2．0μg&#183;L^-1）38例次，占15．57％。结论：地高辛血药浓度监测具有重要临床意义，应考虑各方面因素，实现给药个体化。     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨ERCC1、Bcl-2表达与顺铂作用的关系,进而推测ERCC1、Bcl-2在顺铂耐药中的作用.方法:选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP作为研究对象,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数;免疫细胞化学方法、RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时间干预后细胞中ERCC1、Bcl-2的表达.结果:10μg/mL DDP作用12 h,A549细胞中ER-CC1、Bcl-2 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1、Bcl-2 mRNA的表达逐渐增高,在72 h表达最强.浓度为5μg/mL的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达水平上升,随着DDP浓度的增加,其表达水平逐渐上升,ERCC1民mRNA表达水平在20μg/mL组达到高峰.与亲本细胞相比,A549/DDP中ERCC1、Bcl-2表达明显增高.结论:随着顺铂作用时间的延长和浓度的增加,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1、Bcl-2可能参与了顺铂继发耐药的形成.     

消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药基因调控作用的研究

目的 探讨具有"扶正解毒祛瘀"作用的中药复方消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gP)及其mRNA表达水平的影响。方法 选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,给予消岩汤含药血清,采用Western Blotting 免疫印迹法及RT-PCR技术检测MDR的表达产物P-gP的含量及其mRNA表达水平。结果 与对照组比较,随着消岩汤含药血清药物浓度的增加,P-gP蛋白表达逐渐减弱(P<0.05);与对照组比较,经不同浓度消岩汤含药血清作用后,A549/DDP细胞中的MDR1基因的mRNA水平均有所下降(P<0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制作用越明显。结论 消岩汤逆转肺癌耐药的可能机制为通过抑制细胞膜上P-gP及其基因的表达而阻止细胞对顺铂的输出,从而聚集细胞内的药物浓度达到有效逆转肺癌耐药的效果。     

17-AAG协同顺铂抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的：观察热休克蛋白90（HsPg0）抑制剂17-AAG与顺铂（cispiatin，DDP）联用对肺腺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度17-AAG、顺铂及两药联用对肺癌细胞株A549的生长抑制作用，并应用中效原理评价两药联用效应。结果：顺铂和17-AAG均对A549细胞的生长有较好的抑制作用，并呈现一定的剂量依赖性，顺铂作用48h时，其IC50值为69．627μmol／L；17-AAG的1C5。值为0．455ttmol／L。顺铂联合17-AAG显示更强的抑制作用，特别是在低剂量下协同作用更明显。结论：17-AAG联合顺铂对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应。     

HPLC—MS测定十味龙胆花颗粒中的龙胆苦苷和小檗碱

目的：建立一种快速灵敏的同时测定十味龙胆花颗粒中的有效成分龙胆苦苷和小檗碱的HPLC—MS方法。方法：样品用50％甲醇溶液超声提取，采用Zorbax SBC18（4．6mm&#215;250mm，5μm）色谱柱，以含0．2mmol&#183;L^-1醋酸钠的1％醋酸水溶液（A）-甲醇（B）为流动相进行梯度洗脱（0～10min，33％B；19min，60％B；19．01min，80％B），流速0．8mL&#183;min^-1；在ESI正离子模式下，采用选择性离子监测方法（0—14min，m／z 379；14～22min，m／z 336）。结果：龙胆苦苷、小檗碱的线性范围分别为0．030～30．0μg&#183;mL^1（r=0．9992）和0．004～10．0μg&#183;mL^-1（r=0．9990），检出限分别为0．010μg&#183;mL^-1和0．0013μg&#183;mL^-1样品加样回收率为99．2％～103．3％，日内、日间精密度试验的RSD均低于5％。结论：方法快捷、准确，重复性好，可用于药品十味龙胆花颗粒的分析。     

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。