EGFR/CerbB-2/MAPK介导乳腺癌三苯氧胺耐药细胞的生长

目的探讨乳腺癌三苯氧胺(TAM)获得性抵抗细胞的生长调节途径及三苯氧胺(TAM)获得性抵抗的发生机制.方法构建TAM抵抗的人乳腺癌细胞系(MCF-7/TAMR),RT-PCR、Westem blot及免疫细胞化学方法比较MCF-7/TAMR与MCF-7/WT细胞系中EGFR(CerbB-1)、CerbB-2、CerbB-3、CerbB-4 mRNA及蛋白表达的不同.结果与MCF-7/WT细胞相比,MCF-7/TAMR细胞中表皮生长因子受体EGFR的mRNA增加6倍(P＜0.05),蛋白增加3倍(P＜0.05);CerbB-2的mRNA增加3倍(P＜0.05),蛋白增加1.5倍(P＜0.05);CerbB-3在两种细胞中的表达相似;CerbB-4未能检测到;MCF-7/TAMR细胞中MAPK活化水平增高;基础条件下,MCF-7/TAMR细胞中磷酸化的EGFR/CerbB-2,EGFR/CerbB-3异二聚体与细胞外信号调节激酶磷酸化水平增高有关;Herceptin处理MCF-7/TAMR细胞,阻滞了CerbB-2受体异二聚体的形成及磷酸化,降低了细胞外信号调节激酶的活性,明显抑制了细胞的生长.结论表皮生长因子受体特异性配体的自分泌释放作用诱导EGFR/CerbB-2二聚体形成及下游细胞外信号调节激酶(MAPK)的活化引起MCF-7/TAMR细胞的生长.     

Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制

目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制.方法:MTr法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响.结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P＜0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin (1 μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)％升高至(17.2±3.8)％,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)％升高至(28.4±5.7)％(P＜0.05).Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响.结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡.     

IGF-1R抑制剂联用可增强人非小细胞肺癌PC9/G细胞对吉非替尼的敏感性

目的:观察单用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼 (ge? tinib) 或联合胰岛素生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的酪氨酸激酶抑制剂AG1024作用于人非小细胞肺癌耐药株PC9/G细胞后,该细胞对吉非替尼耐药性的影响,并探讨IGF-1R与肿瘤细胞耐药的相关机制。方法:用吉非替尼和AG1024单独或联合作用于PC9/G细胞后,采用MTT法分别检测各组细胞的增殖情况,并利用中效原理判断两药联用的效果;FCM法检测各组细胞的凋亡情况;Western印迹法检测各组细胞的磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR, p-EGFR)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)的表达水平。结果:吉非替尼和AG1024单独作用于PC9/G细胞后,均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和细胞凋亡促进作用;而吉非替尼和AG1024联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加(P<0.05)。 Western印迹法检测发现,联合用药组的p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少。结论:IGF-1R抑制剂AG1024和EGFR抑制剂吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,提高耐药细胞对吉非替尼的敏感性。     

ERK1/2 MAPK在赖氨匹林对MCF-7细胞增殖抑制中的作用

背景与目的:探讨赖氨匹林(Aspisol)在抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,对ERK1/2 MAPK信号转导通路的影响.材料与方法:采用免疫细胞化学方法测定MCF-7细胞中环氧合酶-2(COX-2)的表达.采用噻唑蓝(MTY)比色法检测Aspisol对MCF-7增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用Western blot分别检测ERKl/2、p-ERK]/2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:在MCF-7细胞中未检测到COX-2的表达.Aspisol对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P＜0.01).Aspisol可诱导MCF-7细胞凋亡,并随着剂量的增大细胞的凋亡率升高(P＜0.05).Aspisol抑制MCF-7细胞pERK蛋白的表达(P＜0.05),但不影响总ERKI/2蛋白的表达(P＞0.05);Aspisol可促进Bax蛋白表达(P＜0.05),但抑制Beb2的表达(P＜0.05).结论:Aspisol影响ERKI/2 MAPK信号转导通路,调节凋亡相关蛋白表达是其抑制MCF-7细胞增殖的作用之一.     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

shRNA靶向沉默CNTN1表达抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-468增殖及克隆形成能力

目的:探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默CNTN1基因表达对乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及克隆形成能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot法检测乳腺癌细胞株MCF7-ADR、MDA-MB-468、MCF7以及Hs578T中的CNTN1 mRNA和蛋白表达水平。采用LipofectamineTM2000 向MDA-MB-468细胞株转染成功构建的靶向沉默CNTN1表达的shRNA载体片段,并采用RT-PCR法和Western blot法进行鉴定。分别通过MTT法、流式细胞仪技术和平板克隆实验检测各组细胞增殖及克隆形成能力的改变。结果:CNTN1 mRNA和蛋白表达水平在MDA-MB-468中最高。沉默组MDA-MB-468细胞发生G1期阻滞,增殖能力明显降低(P＜0.05),克隆形成能力明显减弱(P＜0.05)。结论:CNTN1基因在乳腺癌MDA-MB-468细胞中高表达,沉默其表达可抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和克隆形成能力。     

天花粉蛋白抑制乳腺癌生长的实验研究

目的 探讨天花粉蛋白(TCS)对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞及乳腺癌裸鼠移植瘤的影响.方法 四唑盐比色法(MTT)检测TCS处理前后细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测TCS处理前后细胞周期变化和凋亡率;将MDA-MB-231细胞接种于裸鼠,成瘤后分为对照组、TCS组和盐水组.检测各组裸鼠移植瘤体积、瘤重和肝、肾功能、血常规变化.结果 随着TCS作用时间延长、浓度增大、MDA-MB-231和MCF-7细胞生长受到明显抑制;TCS处理后细胞阻滞于G0/G1期,并可检测到凋亡峰;TCS组裸鼠移植瘤体积和瘤重较对照组明显缩小,TCS对荷瘤裸鼠肾功能、血常规无明显影响,可引起谷丙转氨酶轻度升高.结论 TCS可抑制MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞增殖和乳腺癌裸鼠移植瘤生长.     

大黄酸对肿瘤细胞EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制

一目的研究传统中药大黄中葸醌类化合物之一大黄酸对乳腺癌细胞表皮生长因子受体家族EGFR和HER-2靶点的作用及其作用机制。方法通过WesternBlot检测乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞中EGFR和HER-2的蛋白表达水平。用MTT方法检测大黄酸对乳腺癌细胞的增殖抑制作用。用RT-PCR方法检测大黄酸对EGFR和HER-2转录水平的影响。通过Western Blot方法研究大黄酸对乳腺癌细胞HER-2、P-HER-2、EGFR、P-EGFR蛋白表达的影响并研究相关的作用机制。结果MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR 4株乳腺癌细胞系均显示EGFR高表达。关于HER-2,仅见SKBR-3细胞高表达;而MDA-MB-231和MCF-7／ADR细胞显示中等程度表达,MCF-7细胞低表达。大黄酸对乳腺癌MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231、和MCF-7／ADR细胞增殖抑制的IC50分别为28μg／ml、24μg／ml、24μg／ml和〉100μg／ml。Western Blot研究结果表明大黄酸对HER-2、P-HER-2和P-EGFR蛋白表达有抑制作用,并且随着剂量的增加抑制作用增强,但对EGFR蛋白表达没有明显抑制作用。RT-PCR研究发现大黄酸抑制HER-2的mRNA的水平,从转录水平上发挥对HER-2蛋白表达的抑制作用。进一步研究表明大黄酸通过抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2的酪氨酸激酶磷酸化,进而抑制RAS-RAF-MEK-ERK信号通路,抑制肿瘤细胞增殖,而对NF-κB和AKT诱导的细胞凋亡通路没有明显作用。结论传统中药大黄中的葸醌类化合物大黄酸能够抑制表皮生长因子家族EGFR和HER-2酪氨酸激酶的磷酸化,从而抑制了MAPK信号通路的磷酸化,达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。同时大黄酸可以从转录水平抑制HER-2的蛋白表达。     

PTPRZ1通过调控PI3K/Akt通路促进乳腺癌细胞增殖和多西他赛耐药

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/Doc）。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc,克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞（P＜0.05）;MCF-7/Doc细胞中,PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调（P＜0.05）。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力,显著抑制细胞凋亡（P＜0.05）;敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性,并能显著诱导细胞凋亡（P＜0.05）。Western blot结果显示,PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。