基于入血成分的杜仲药材的含量测定

建立杜仲药材中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷3种原型入血成分的含量测定方法.采用LC-MS/MS检测技术确定大鼠灌胃杜仲提取物后吸收入血的药物成分,结合高效液相色谱技术检测23批杜仲样品中入血成分的含量.结果表明,大鼠口服杜仲提取液后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷均以原型入血;以杜仲药材中的京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖为对照品建立的含量测定方法线性范围良好,平均回收率分别为98.69%,100.8%,98.39%.该方法简便可行、回收率和重复性良好.     

基于有效成分含量变化探讨生杜仲及盐制品与甘草、续断的配伍比例

目的:考察生杜仲及炮制品盐杜仲与甘草、续断不同比例配伍后,杜仲中3种有效成分的变化规律。方法:制备生杜仲、盐杜仲、甘草、续断单煎液和生杜仲-甘草、盐杜仲-甘草、生杜仲-续断、盐杜仲-续断配伍的合煎液,采用HPLC法检测其京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量,计算各组煎出率并绘制有效成分煎出量与配伍比例的关系曲线。结果:杜仲盐制后,水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量均增加。生杜仲-甘草大部分配伍组中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量随甘草比例的增加而升高,而绿原酸的煎出量逐渐下降。盐杜仲-甘草配伍后,松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的煎出量大部分随甘草占比增加而显著减小,而京尼平苷酸的煎出量逐渐增加;生杜仲-续断配伍和盐杜仲-续断配伍后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出量变化趋势相近,均随续断的占比增加而增加。结论:杜仲盐炒及配伍有利于有效成分的煎出。杜仲、盐杜仲与甘草、续断联合用药时需注意配伍比例以增强临床疗效。     

杜仲板皮和枝皮中4种有效成分差异性比较

目的采用RP-HPLC法测定杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷的量。方法采用Cosmosil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长208 nm,柱温25℃。结果杜仲板皮中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷量大于枝皮,枝皮绿原酸、京尼平苷量大于板皮;在不同产地来源上,杜仲板皮和枝皮中桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷平均质量分数有一定差异性。结论该方法简便、快速、准确可靠,为更全面合理科学地对杜仲药材质量的评价提供了技术支撑。     

HPLC法测定杜仲皮、叶、雄花中8种成分

目的建立HPLC法测定杜仲皮、叶、雄花中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平、绿原酸、槲皮素、白桦脂酸的含量。方法杜仲皮、叶、雄花甲醇提取物的分析采用Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈?0.1%甲酸;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长194 nm(桃叶珊瑚苷)、202 nm(松脂醇二葡萄糖苷)、238 nm(京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平)、320 nm(绿原酸)、368 nm(槲皮素)、210 nm(白桦脂酸)。结果8种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率95.02%~104.33%,RSD 0.28%~1.96%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲的质量控制。     

杜仲的血清药物化学研究

目的对杜仲Eucommia ulmoides进行血清药物化学研究。方法采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,通过比较杜仲提取物、给药组及空白组大鼠血清的指纹图谱,确定口服杜仲提取物后大鼠血中移行成分。结果给药组大鼠血清指纹图谱与空白组血清指纹图谱对比有明显不同。含药血清中出现7个移行成分,与杜仲提取物指纹图谱在相同保留时间出峰,为原型成分。采用对照品对照,确定5个色谱峰所表征的化学成分为原型吸收入血成分,依次为京尼平苷酸、原儿茶酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷。通过查阅文献,推断了2个色谱峰所表征的化学成分可能为1-羟基松脂醇二葡萄糖苷、杜仲醇。结论血中移行成分可能为杜仲的体内直接作用物质,为明确杜仲药效物质基础提供了科学依据。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中杜仲的五个成分及其药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的UPLC-MS/MS测定方法,并进行五种成分在大鼠体内药代动力学研究。方法大鼠静脉注射杜仲提取物后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,以葛根素为内标,采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行检测。结果京尼平苷酸等五种成分在血浆中呈良好线性关系。方法学考察均符合要求,日内、日间精密度、准确度和稳定性良好,提取回收率86.06%~104.39%,无基质效应。京尼平苷酸等5个指标成分在大鼠体内消除较快。结论建立的HPLC-MS/MS测定方法能快速灵敏地检测生物样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的血药浓度,可用于五种成分的药代动力学研究。     

高效液相色谱法同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的 建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 采用Diamonsil C18柱(5μm,250mm×4.6mm),以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液(15850.5)为流动相,检测波长227 nm.结果 样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%,96%～103%;绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98 μg,r=0.999 9和0.872～8.72μg,r=0.999 8.结论 贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量差异很大.     

HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷

目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.     

UPLC-MS测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究

目的:通过超高效液相色谱联合质谱法测定杜仲的3种成分及其药代动力学研究。方法:本研究的质谱采用电喷雾电离源(ESI),通过多反应离子监测这一扫描方式对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷等3种成分及内标用于定量分析的监测离子。结果:1)杜仲中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷等3个指标性成分的分离良好,无内源性物质干扰,具有较好的专属性。2) UPLC方法严谨性,其精密度、稳定性试验、重复性试验、加样回收率等均良好。3)京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷在大鼠体内的药代动力学具有非线性特征,仅绿原酸存在线性特征;而CLz、Vz参数指标的差异比较大,显示大鼠血浆中杜仲提取物中的3种成分在大鼠体内的药代动力学代谢过程不一致。结论:UPLC-MS/MS的操作简单,结果具有较好的精密度、稳定性和重复性,可作为杜仲有效成分及药代动力学研究的可靠方法。     

HPLC法同时测定杜仲-当归药对中5种成分

目的建立HPLC法同时测定补肾活血药对杜仲-当归中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、阿魏酸、藁本内酯的含有量。方法药对50%乙醇提取物的分析采用Waters Atlantis T3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长238 nm(京尼平苷酸)、276nm(松脂醇二葡萄糖苷)、322 nm(绿原酸、阿魏酸和藁本内酯);柱温30℃。结果 5种成分在各自范围内均呈良好的线性关系(r≥0.999 5);平均加样回收率98.29%~103.5%,RSD 1.1%~2.0%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲-当归药对的质量控制。     

杜仲不同炮制品化学成分研究

根据2010年版《中国药典》制备生杜仲、盐杜仲、杜仲炭3个规格炮制品,按照2010年版《中国药典》标准对各炮制品进行各项指标检测,均符合药典要求。运用HPLC-DAD对生杜仲、盐杜仲、杜仲炭及杜仲叶中化学成分进行比较分析,结果显示:1杜仲皮主要含有木脂素类化合物松脂醇二葡萄糖及环烯醚萜类化合物京尼平、京尼平苷、京尼平苷酸,而杜仲叶主要含有黄酮类化合物槲皮素和酚酸类化合物绿原酸;2杜仲皮中松脂醇二葡萄糖含量约是杜仲叶中含量的18倍,盐炙和炒炭后松脂醇二葡萄糖质量分数约分别下降30%,85%;3杜仲皮中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量约为杜仲叶中京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸含量的3,23,28倍,盐炙后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低25%,40%,40%,炒炭后京尼平、京尼平苷和京尼平甘酸质量分数分别降低98%,70%,70%;4杜仲皮中咖啡酸含量约是杜仲叶中咖啡酸含量的3倍,盐炙后咖啡酸质量分数约下降50%,炒炭后咖啡酸质量分数下降约75%;杜仲皮中绿原酸含量约为杜仲叶中绿原酸含量的1/6,盐炙和炒炭后绿原酸质量分数分别下降40%,75%;杜仲皮中槲皮素含量仅为杜仲叶中1/40,盐炙和炒炭后槲皮素质量分数分别降低60%,50%。     

杜仲药材有效成分与环境因子的灰色关联度分析

目的: 运用灰色关联度法分析影响杜仲皮和叶中4种有效成分含量产地差异性的主要环境因子. 方法: 利用HPLC同时测定10个产地10年生杜仲皮和叶中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量,流动相分别为乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)梯度洗脱(0~25 min,5%~13%A;25~45 min,13%~15%A;45~80 min,15%~21%A),流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)梯度洗脱(0~20 min,5%~12%A;20~35 min,12%~13%A;35~45 min,13%~19%A;45~65 min,19%~25%A),检测波长均为210 nm.检测杜仲生长地土壤的全氮、全磷、全钾、碱解氮、速效磷、速效钾、有机质及pH,获得土壤因子数据,运用灰色关联度法对4种有效成分与气候及土壤因子的相关性进行分析. 结果: 10个产地同一生长年限杜仲皮、叶中4种有效成分的含量存在较大差异.碱解氮、速效钾、有机质、年平均相对湿度、年平均最高气温对4种成分在杜仲不同组织中的影响较大. 结论: 杜仲不同组织部位中4种有效成分含量与环境因子的灰色关联度分析明确了主导环境因子,为合理施肥及环境调控来提高杜仲次生代谢产物的含量提供参考,为杜仲的适宜种植区选择及其道地性产生原因分析提供实验依据.     

炮制对杜仲中松脂醇二葡萄糖甙含量的影响

应用HPLC法测定了按不同方法炮制的杜仲中松脂醇二葡萄糖甙的含量,结果表明杜仲炮制后,松脂醇二葡萄糖甙含量明显升高,各炮制品之间含量无明显差异。     

杜仲叶中有效成分的闪式提取工艺优选

目的:优选杜仲叶中有效成分的闪式提取工艺。方法:采用HPLC测定绿原酸和京尼平苷酸含量,流动相甲醇-水-冰乙酸(15∶85∶1),流速1.0 mL·min-1,检测波长237 nm。以绿原酸和京尼平苷酸提取率为评价指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察乙醇体积分数、提取次数、提取时间、料液比对杜仲叶闪式提取工艺的影响。结果:最佳提取工艺条件为加25倍量70%乙醇提取3次,每次6 min;绿原酸、京尼平苷酸提取率分别为1.82%,0.47%。结论:优选的提取工艺稳定可行,为杜仲叶的资源开发提供参考。     

指纹图谱结合一测多评模式在中药鱼腥草质量评价中的应用研究

研究中药质量评价中指纹图谱与一测多评结合的考察模式,以中药鱼腥草为研究对象,以绿原酸为参照物建立鱼腥草HPLC指纹图谱及其与其余成分的相对校正因子,并计算其含量,实现一测多评。同时采用外标法测定该7个成分的含量,并比较二者的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果建立了鱼腥草HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了12个共有峰,指认了其中7个共有峰,20批鱼腥草的相似度在0.912~0.991。20批鱼腥草中7个成分的计算值与实测值间无显著差异。结果表明一测多评结合指纹图谱的质量控制模式在鱼腥草中得到验证,有望成为适合中药特点的质量评价模式。     

高效毛细管电泳测定杜仲中桃叶珊瑚苷等5种指标成分的含量

 目的建立高效毛细管电泳法（HPCE）同时测定杜仲中桃叶珊瑚苷、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、哈巴苷和绿原酸含量的方法。方法以60 mmol·L-1硼砂 20 mmol·L-1 磷酸二氢钠 10%甲醇(pH 100)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm×645 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为210 nm,毛细管温度为25 ℃,压力进样为5 kPa×6 s。结果5种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好( r>0997 3);加样回收率为9663%～10373%,结果满意。结论该方法简单、准确,重复性较好,可用于杜仲药材或饮片的质量评价和控制。     

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??OBJECTIVE To establish a method for the quality control of Lonicerae Japonicae Flos by multi-components quantitative fingerprint. METHODS Chlorogenic acid was selected as the marker of ingredients to establish the HPLC fingerprint and as the internal reference standard to determine the contents of other eight components(neochlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, chiratin, rutin, galuteolin, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C) according to the relative correction factor of quantitative analysis of multi-components by single marker(QAMS) by slope correction method. At the same time, the nine components were determined by external standard method. The accuracy and feasibility of QAMS were evaluated by comparison of the results between external standard method and QAMS. RESULTS The fingerprint of Lonicerae Japonicae Flos was established, 21 common peaks were identified in all the tested samples, nine of which were verified, the similarities of 20 batches of Lonicerae Japonicae Flos samples were in the range of 0.959-0.997, and there was no significant difference between the quantitative test results of nine ingredients in 20 batches by the QAMS method and external standard method. CONCLUSION The method of multi-marker components quantitative fingerprint is feasible and accurate for the quality control of Lonicerae Japonicae Flos, and it might be a new quality evaluation pattern for Traditional Chinese medicine.
     

不同炮制方式对杜仲品质的影响

目的 对盐炙、酒炙、蜜炙、清炒、土炒等多种杜仲炮制方法进行比较,考察不同辅料炮制对杜仲品质的影响。方法 以松脂醇二葡萄糖苷等6种有效成分、醇溶性浸出物量和损耗率作为评价指标,采用权重系数综合评分比较不同辅料炮制对杜仲品质的影响。结果 辅料对杜仲炮制品的质量有显著影响,盐炙、清炒、酒炙和糯米炙法所得杜仲成品综合评分高于杜仲原药材,指标成分含量高、损耗少、浸出物得率高。结论 杜仲炮炙采用最多的盐炙法、清炒法和制炭炮制方法所得炮制品质量较优,现今使用的炮制方法合理。     

杜仲饮片HPCE指纹图谱的研究

目的:建立杜仲饮片HPCE指纹图谱分析方法,并对杜仲及其炮制品的指纹图谱进行比较。方法:采用高效毛细管电泳法进行色谱分离,以60 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钠-10%甲醇(pH=10.0)为运行缓冲液,分离电压为20 kV,波长为210 nm,以松脂醇二葡萄糖苷为参照物,测定其指纹图谱,并作模糊聚类法分析和相似度评价。结果:初步建立了以10个共有峰为特征指纹信息的杜仲饮片HPCE指纹图谱;发现少数杜仲饮片的指纹图谱有一定差异,生品与其炮制品的指纹谱中共有峰相对峰面积差异显著。结论:该方法准确可靠,重现性好,可作为杜仲饮片内在质量评价的依据。