电化学适配体传感器的研究进展

正核酸适配体是通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)体外筛选获得的,是一个短的单链脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)分子[1]。核酸适配体通过分子内的相互作用折叠形成特定的三维结构而与靶标分子特异性结合,其功能类似于抗体,因此核酸适配体被人们称为"化学抗体"。除此之外,适配体还拥有很多抗体无法比拟的优势,例如易修饰、可     

核酸适配子的研究进展

核酸适配体（Aptamer ,又称核酸适体、适配子）是采用模拟自然进化过程的人工筛选技术-指数富集配体系统进化技术（SELEX）筛选得到的具有识别功能的新型核酸分子。其本质是由一段单链核酸（20～60碱基）通过折叠形成特定的三维结构,能与靶分子高亲和力、高特异性结合。1990年,T uerk等从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选出了分别能与噬菌体T4DNA聚合酶和有机染料高特异性、高亲和力结合的单链寡核苷酸配体［1］,筛选出的配体称核酸适配子（aptamer）,该词源于拉丁语aptus ,即to fit ,“适合”的意思。     

从靶标的多样性看核酸适配子在分子识别中的优势与前景

<正>20世纪90年代初,Tuerk等[1]建立了一种新的组合化学技术--指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolutionof ligands by exponential enrichment,SELEX),筛选到噬菌体T4DNA聚合酶的RNA配体,即核酸适配子(aptamer)。核酸适配子能与生物靶分子高特异性和高亲和力结合,功能上与     

核酸适配体技术在生物样本物质检测中的应用研究进展

核酸适配体是通过体外筛选技术筛选出的单链DNA或RNA。其自身构象会随着与目标物质的结合而发生改变,与信号转换器结合后实现对物质高灵敏度、高特异性的快速检测。核酸适配体技术已经广泛应用于小分子、蛋白质、细菌病毒等方面的检测,尤其是环境和食品中重金属离子的检测。该文主要对核酸适配体技术应用于生物样本中物质检测的研究进展作一综述,并对其在生物样本中进行物质检测的前景进行展望,以期为其临床检验工作中的应用提供新思路。     

构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体

背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列.大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等.目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响.方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成.自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体.TaqDNA聚合酶、T_4 DNA连接酶、DNA Marker、限制性内切酶BamH I、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因.结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931 bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamH I酶切后显示5.9 kb和931 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中.提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体.     

脂钙蛋白2检测识别脓毒症小鼠急性肺损伤北大核心CSCD

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）死亡率仍高达30％ ～ 40％,积极探索ALL/ARDS分子标志物是急诊医学工作者的重要目标[1].目前虽然发现20余种与ALI诊断和预后相关的生物标志物[2],但尚无单个标志物可用于ALI的临床实践.脂钙蛋白2/中性粒细胞明胶酶关联运脂蛋白（LCN2/NGAL）组成性表达于粒细胞并储存于特异性颗粒中,炎症状态下上皮细胞诱导性表达LCN2增加[3].组织LCN2表达水平与中性粒细胞渗出程度密切相关[4-6],LCN2也可提示氧化应激水平[7],在炎症性肺损伤模型中受损肺组织LCN2表达显著增加[8-9].肺上皮细胞凋亡被认为是脓毒症相关ALI发展过程的关键一环[10-11],而LCN2在细胞凋亡过程中发挥重要调节作用[12-14].脂多糖（LPS）可剂量依赖性引起肺组织表达LCN2增加[15].     

临床核酸检测实验室的基本质量控制措施

近十年来,随着人类和病原微生物基因组学研究的深入,越来越多的碱基序列被高精度地确定 ,为采用核酸技术进行人类遗传病和传染性疾病的检测提供了丰富的材料.国内外能进行基因诊断的遗传病已逾百种[1,2],美国最近修订的性病诊断标准也已将核酸指标列为确诊依据之一[3].核酸检测的临床应用在理论上具有高灵敏度、高特异性、方便快速及应用范围广等特点[4],无疑将是世界范围内临床诊断技术发展的趋势之一.     

地贫核酸检测国家参考品对单分子测序试剂的适用性评价

目的 评价地中海贫血核酸检测国家参考品（批号：360014-201701）在单分子测序法试剂的适用性。方法 按照α/β-地中海贫血基因分型检测试剂盒行业标准（YY/T 1527-2017）及国家参考品说明书要求,确定适用性研究项目：准确性、特异性及检测限。取拟研究的试剂盒,对国家参考品中的目标区域进行长片段扩增,在目标DNA长片段两端连接接头,使用消化酶去除非环状片段,最终获得哑铃状文库,构建好的哑铃状文库结合测序引物和酶,在基因测序仪Sequel?Ⅱ CNDx的SMRTCell纳米小孔中进行单分子测序。测序后的基因序列对比到参考基因序列上,通过生物信息软件分析,来判断检测结果与国家参考品的预期结果是否一致。结果 该试剂盒可准确检出范围内相应基因型别的国家阳性参考品,阴性参考品和范围外的国家阳性参考品均未检出突变,且检测限不高于3 ng/μL。结论 地中海贫血核酸检测国家参考品可用于基于单分子测序法的地中海贫血基因检测试剂盒性能评价,此研究扩展了国家参考品的适用范围,并且促进了地中海贫血基因检测试剂盒的标准化。     

定量PCR中常用的参照系统

聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)技术于1983年由美国Cetus公司的K.Mullis建立,这是一个在体外特异地复制一段已知序列的DNA片段的技术,可使人们快速地从试管中获得大量特异的核酸片段。PCR技术给生命科学领域的研究手段带来了革命性的变化,它已与DNA克隆、DNA重组和DNA测序等技术一样,成为分子生物学乃至医学研究和应用中不可缺少的工具。在医学研究和临床诊断治疗中,人们越来越多地需要对某一基因或核酸片段的量的变化进行观察和研究,如病毒在体内的复制状况和治疗过程中病毒荷载量的变化[1～3],基因受某些因素的影响…     

DNA损伤修复基因8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)的研究进展

DNA分子对活性氧特别敏感,易受到活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)攻击,发生氧化性DNA损伤,促进癌症发生[1-2]。DNA分子主要氧化产物8-氧-鸟嘌呤(8-oxo-7,8-dihydroguanine,8-oxo-Gua)被视为DNA氧化损伤的生物标志物。8-oxo-Gua具有高度的致突变性,在通过DNA