上海市崇明地区幽门螺杆菌耐药性分析及cagA基因检测

目的探讨上海市崇明地区含细胞毒素相关基因A（cagA）的幽门螺杆菌（Hp）的感染情况及cagA基因与Hp的耐药性关系。方法对150株临床分离菌株，采用PCR法检测Hp的cagA基因，同时采用纸片扩散法作药敏试验。结果崇明地区Hp对甲硝唑、替硝唑、阿莫西林、克拉霉素、阿奇霉素和呋喃唑酮的耐药率分别为32%、10、2、0、0和0。78．7％的Hp菌株含有cagA基因。结论本地区阿莫西林、阿奇霉素、呋喃唑酮可作为根除Hp的首选药物。本地区Hp感染以Ⅰ型菌株为主，含cagA基因Hp菌株对甲硝唑耐药率明显低于不含cagA基因Hp菌株。     

聚合酶链反应法测定幽门螺杆菌的vacA基因型

以幽门螺杆菌DNA为模板,采用聚合酶链反应设计了5个特异性寡核苷酸引物和一个公共引物,分析检测了62株幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素基因S1a、S1b、M1型和M2型,检测结果均为S1a/M2型.实验显示胃十二指肠疾病与空泡形成细胞毒素基因无相关关系.     

胃癌前病变中H.pylori感染下调RUNX 3的表达

目的:探讨幽门螺杆菌(H.priori)感染与RUNX3表达在胃癌前病变发生中的作用.方法:收集2005年～2008年间癌前病变43例,十二指肠溃疡41例和功能性消化不良25例的临床资料.所有研究对象均检测血清CEA、CA199和胃泌素水平,尿素酶检测胃组织中H.pylori.RT-PCR检测胃粘膜Runx3基因的表达.结果:癌前病变和十二指肠溃疡和功能性消化不良3组的CEA、CA199无明显差异.H-pylori的阳性率三组之间也相似(P＞0.05).而癌前病变者血清胃泌素低于其他2组.H.pylori阳性胃癌前病变者RUNX3基因表达明显低于H.pylori的阴性者(P=0.03),但在其他两组无此差异.RUNX3基因的表达与血清胃泌素水平存在正相关(R=0.81,P=0.012).结论:H.pylori通过下调RUNX3基因参与了胃癌前病变/胃癌的发生.     

不同基因型H.pylori对GE-1细胞凋亡影响的研究

本实验应用不同基因型H.pylori国际标准菌株NCTC11637(Cag A+、Vac A+)和NCTC11639(Cag A+、Vac A-),培养上清作用GES-1细胞,研究并比较细胞形态、凋亡的变化,从而在体外探讨不同基因型H.pylori对胃黏膜上皮细胞的影响及其机制。分组:(1)不同浓度NCTC11637H.pylori上清液的实验组,浓度分别为A组(1.3875mg/ml),B组(2.775mg/ml),C组(5.55mg/ml);(2)不同浓度NCTC11639H.pylori上清液的实验组,浓度分别为A(1.875mg/ml),B(3.75mg/ml),C(7.5mg/ml);(3)阴性对照组(H.pylori培养液)。各组作用GES-1细胞时间均为24h、48h、72h,用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态。两种菌株作用的GES-1细胞形态学上均呈现典型的凋亡改变,且两种菌株凋亡率无显著差异性,NCTC11637菌株作用的GES-1细胞出现典型的细胞空泡化,NCTC11639菌株则空泡化不明显。NCTC11637和NCTC11639不同基因型菌株间凋亡率无显著差异性,这可能和我们选取的菌株都为Cag A阳性菌株有关,Cag A是H.pylori致病因素中最重要的毒力因子之一,Cag A和Vac A都可诱导细胞凋亡,但Vac A最主要作用是致细胞空泡化。     

胃癌低发区幽门螺旋杆菌感染、IL-1基因多态性和胃黏膜萎缩关系的研究

目的：探讨IL-1B-511基因多态性对幽门螺旋杆菌（H.pylori）感染后胃黏膜萎缩的影响。方法：（1）采用PCR-限制性长度片段多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）分析法检测胃癌低发区广东省普通人群192例的基因型；（2）采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上述人群的且pylorl感染率、胃蛋白酶原Ⅰ（pepsinogen Ⅰ，PGI）、胃蛋白酶原Ⅱ（pepsinogen Ⅱ，PGD）和胃泌素（gastrin）的浓度。结果：H.pylori阳性者PGⅠ／PGⅡ显著低于Hpylori阴性者（P〈0．01），H.pylor4阳性的1L-1B-511T／T基因型者PGⅠ／PGⅡ比值显著低于C／C和C／T基因型者（均P〈0．05）。血清胃泌素浓度与IL-1B-511的基因型没有明确的关系（P〉0．05）。结论：在胃癌低发区，IL-1B-511基因型可能增加感染H.pylori后胃黏膜萎缩发生、发展的危险性。     

血清PG、G-17在不同H.pylori基因型中的表达变化及意义

目的 探讨血清胃蛋白酶原(pspsinogen,PG))及胃泌素-17(G-17)在感染不同幽门螺杆菌(H.pylori)基因型中的表达变化和意义.方法 对169例患者采用免疫印记法进行幽门螺杆菌分型检测,荧光免疫层析法测定血清G-17及PG值并对其进行统计分析.结果 HP阳性组PGⅠ﹑PGⅡ﹑G17水平显著高于HP阴...     

幽门螺杆菌Warthin-Starry染色法和qRT-PCR检测结果比较及相关性分析

目的 比较Warthin-Starry染色法(W-S染色法)和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测幽门螺杆菌(HP)的阳性率及两种检测方法相关性.方法 选择106例该院行胃镜检查患者,取胃黏膜组织分别用W-S染色法和qRT-PCR检测HP.结果 W-S染色法和qRT-PCR检测HP阳性率分别为64.2%和67.9...     

Gastrokine2在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨Gastrokine 2在胃癌的发生、发展过程中的作用。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹法检测76例诊断明确的胃癌患者的癌组织及癌旁组织中Gastrokine2的表达,并分析胃癌组织中mRNA和蛋白的表达与临床病理特征之间的关系。结果 Gastrokine 2 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达均低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0.01）。胃癌组织中Gastrokine 2 mRNA的表达与肿瘤的位置、浸润深度、分化程度、Lauren分型、淋巴结转移及患者的性别和年龄均无关（P〉0.01）,而幽门螺杆菌（HP）阳性胃癌患者的癌组织中Gastrokine 2 mRNA表达低于HP阴性者（P〈0.01）,Ⅰ期胃癌患者的Gastrokine 2 mRNA表达量高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者（P〈0.01）。胃癌组织中Gastrokine 2蛋白的表达与肿瘤的位置、浸润深度、分化程度、Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、幽门螺杆菌感染及患者的性别和年龄均无关（P〉0.01）。结论 Gastrokine 2在胃癌组织中的表达显著降低,它作为一种保护性基因在胃癌的发生和发展中扮演着重要角色,随着胃癌的进展,其抑制肿瘤的作用降低,同时HP感染可能减弱其对胃黏膜的保护作用。     

胃癌中幽门螺杆菌vacA基因型的分布及其与NF-κB表达的关系

目的 探讨辽宁地区胃癌患者幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)vacA优势基因型并探讨vacA 不同基因亚型与NF-κB表达的关系.方法 选取自2010年7 月至2014年7 月我院手术切除的H.pylori(+)的胃癌组织样本140例.按照试剂盒说明书提取胃癌组织的DNA,采用PCR...     

CagA^＋幽门螺杆菌菌株培养滤液对胃黏膜上皮细胞生长及DNA的影响

目的研究CagA^＋Hp菌株培养滤液对胃黏膜上皮细胞（GES-1）生长的作用。方法分为CagA^＋组、CagA^-组、布氏肉汤组（空白对照组）,Hp菌株制备培养滤液处理GES-1细胞,连续培养1个月。MTT法观察GES-1细胞生长,单细胞微凝胶电泳检测GES-1细胞DNA的损伤,并采用电镜观察GES-1细胞的形态变化。结果 CagA^＋培养滤液可使GES-1细胞增生活跃,GES-1细胞出现彗星现象显著高于CagA^-组（41.2%vs.12.5%）（P〈0.05）。经CagA^＋组处理的GES-1细胞,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。结论 CagA在Hp培养滤液促使GES-1细胞呈肿瘤细胞的形态学改变及生长特征中起重要作用。DNA损伤可能是CagA诱导GES-1生长特征改变的机制之一。     

竞争性定量聚合酶链反应检测幽门螺杆菌cagA基因

目的 建立竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）定量检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因Ａ（ｃａｇＡ）的方法。方法 以重组ＰＣＲ将乳糖操纵子中乳糖调节蛋白（ＬａｃＩ）的特异性结合序列（２１ｂｐ）插入ｃａｇＡ基因的一段序列（４００ｂｐ）中得到重组ｃａｇＡ基因片段（ｒｆｃａｇＡ）。体外克隆并表达谷胱甘肽转硫酶－ＬａｃＩ（ＧＳＴ－ＬａｃＩ）的融合蛋白,其一端具有ＣＳＴ活性,另一端可特异性地与ｒｆｃａｇＡ结合     

消化道症状儿童白细胞介素-1基因簇多态性与幽门螺杆菌感染的研究

目的 分析探讨儿童白细胞介素-1(IL-1)基因簇多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染间的相关性.方法 随机选取128例消化道疾病患儿的胃黏膜标本.IL-1B-31,IL-18-511 SNP位点多态性使用实时定量聚合酶链(real-time PCR) 双色荧光探针法检测,IL-IRN的可变重复序列使用传统PCR方法检测.Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用Real-time PCR检测,用PCR扩增另-高毒力基因cagA羧基端EPIYA基因序列所在区,然后测序确定其亚型.结果 所研究的患儿中IL-1B-31T与IL-1B-511C完全连锁.未检测到H.pylori及其高毒力亚型感染与IL-1-511/-31SNP及IL-1RN基因多态性之间的相关性.结论 IL-1基因簇多态性不是广州地区儿童H.pylori感染的独立影响因素,它可能与其他因素共同影响着儿童H.pylori的感染.     

上海崇明地区幽门螺杆菌cagA基因多态性与感染临床结局的关系

目的探讨上海崇明地区幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）的cagA基因的多态性与感染临床结局的关系。方法采用PCR法检测100株临床分离株cagA基因亚型,获得东亚型和西方型2种基因型。分析cagA基因亚型与消化道疾病间的关系。结果100株Hp中72株检出cagA基因,其中81．9％为cagA基因东亚型,15．3％为西方型,2．8％为同时存在着2种基因型。胃癌与慢性萎缩性胃炎患者中cagA基因东亚型菌株均显著高于胃溃疡、十二指肠溃疡患者,而十二指肠溃疡cagA基因西方型菌株的比率显著高于其余4种疾病类型。结论本地区感染Hp以cagA基因东亚型为主,cagA基因东亚型菌株与胃癌、慢性萎缩性胃炎密切相关,而cagA基因西方型菌株与十二指肠溃疡密切相关。推测cagA基因多态性对由Hp引起的感染性疾病的发病机制可能起一定的作用。     

PCR法和14C呼气试验检测幽门螺杆菌的比较

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和１４Ｃ呼气试验（１４Ｃ－ＵＢＴ）对６６例上消化道疾病患者进行幽门螺杆菌（Ｈｐ）检测，结果ＰＣＲ检出率为６９．７％，１４Ｃ－ＵＢＴ检出率为７１．２％，ＰＣＲ、１４Ｃ－ＵＢＴ两种方法诊断Ｈｐ感染的敏感性均为１００％，特异性分别为９５．２％和９０．５％，精确性分别为９８．５％和９７．０％；慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎Ｈｐ检出率分别为７７．８％和６５．０％，两者无显著性差异；Ｈｐ感染无性别差异。研究结果表明，１４Ｃ－ＵＢＴ和采用自制的采样器获取胃粘膜组织进行ＰＣＲ检测Ｈｐ均具有非创伤性、简便、高敏感性和特异性的优点，后者还可进行Ｈｐ细胞毒株和非细胞毒株的区分，克服了１４Ｃ－ＵＢＴ具有一定的放射性和使用有毒试剂的缺点     

MAGE-1基因在胃癌中的表达及其意义

目的探讨MACE-1(黑色素瘤抗原-1)基因在胃癌组织中的表达及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例胃癌组织及30例正常组织中MAGE-1基因表达。结果58例胃癌组织标本中有34例(58.6%)表达MAGE-1基因,而30例正常组织均不表达MAGE-1基因,两组比较差弄有显著性(P<0.05)。结论MAGE-1基因在胃癌组织中有较高的表达,对胃癌病人的免疫治疗和预后有重要意义。     

幽门螺杆菌感染与不同胃粘膜病变中基质金属蛋白酶-9表达的关系

目的　探讨基质金属蛋白酶9(MMP 9)在胃癌及不同胃粘膜病变发生过程中的表达,及其与幽门螺杆菌的相互作用。方法　选择2 0 9例病例,包括慢性胃炎2 0例、肠上皮化生18例、轻度不典型增生4 1例、中重度不典型增生76例及胃癌5 4例;HP检测采用Giemsa染色、快速尿素酶试验或14 C尿素呼气试验;SP法检测MMP 9的表达。结果　慢性胃炎粘膜组未见MMP 9表达,肠上皮化生粘膜组MMP 9阳性率为4 4 .4 % ,轻度不典型增生粘膜组MMP 9阳性率为4 8.9% ,中、重度不典型增生粘膜组MMP 9阳性率为71.1% ,胃癌组MMP 9阳性率为83.3% ,明显高于慢性胃炎粘膜组(P <0 .0 1) ,高于不典型增生粘膜组(P <0 .0 1)。MMP 9在不典型增生及胃癌的HP阳性组中的表达率明显高于HP阴性组(P <0 .0 5 )。结论　MMP 9在胃癌中有较高的阳性率,与HP感染密切相关,可作为诊断胃癌的一个参考指标。     

胃癌变过程中幽门螺杆菌感染与Ki67和P27蛋白表达的意义

目的探讨胃癌变过程中胃黏膜上皮细胞幽门螺杆菌（Hp）感染与细胞增生及抑癌基因P27蛋白表达的意义。方法用快速尿素酶法、美蓝法及免疫组化法联合检测312例胃镜活检标本Hp感染率,其中慢性浅表性胃炎（CSG）112例、慢性萎缩性胃炎（CAG）100例、胃癌（GC）100例。并采用免疫组化技术分别检测标本中Ki67和P27蛋白的表达,观察Hp感染对Ki-67和P27蛋白表达的影响。结果运用三种方法联合检测,所有病例、CSG、CAG和GC中Hp感染率分别为49．0％（158／312）、25．9％（29／112）、53．0％（53／100）、71．0％（71／100）。CAG组明显高于CSG组（P〈0．05）;GC组明显高于CAG组和CSG组P〈0．05,P〈0．01）。所有病例中均能检测到Ki=67和P27蛋白的表达,Ki67在CSG、CAG、GC中的阳性表达率为35．7％（40／112）,58．0％（58／100）,64．0％（64／100）。且GC组明显高于CSG组（P〈0．05）;P27在CSG、CAG、GC中的表达率为36．6％（41／112）,32．0％（32／100）,29．0％（29／100）。随着病变进展,P27的表达逐渐下降,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Hp在癌组织阳性率明显高于非癌组织,胃癌可能是Hp长期感染与其他因素共同作用的结果。Hp感染可诱导胃黏膜Ki-67和P27的表达异常,使抑制上皮生长与调节细胞凋亡信号传导的转化因子受体数目减少,引起胃黏膜上皮细胞的过度增生,同时也与抑癌基因P27的失活有关。     

Phospholipase C activity of Helicobacter pylori is not associated with the presence of the cagA gene

BACKGROUND: Knowledge about the possible role of phospholipase C (PLC) activity of microbial pathogens in the development of disease is increasing. Recently attention has focused on investigating PLC activity elaborated by Helicobacter pylori, but the role of this enzyme in H. pylori pathogenesis is still unknown. The aim of this study was to correlate PLC-activity of H. pylori on the basis of the cagA status with the clinical diagnosis of the patients. MATERIALS AND METHODS: Helicobacter pylori was isolated from patients with gastritis (G; n = 38), duodenal ulcer (DU; n = 15), gastric ulcer (GU; n = 11) and gastric cancer (GC; n = 12). Polymerase chain reaction primers DZ3/R009 which amplified a 1350-bp fragment were used to detect the cagA gene. PLC activity was determined using p-nitrophenylphosphorylcholine as substrate. RESULTS: Of the strains, 60% were cagA(+) and 40% were cagA(-). All strains showed PLC activity (2.20 +/- 0.91 U mg(-1) protein). PLC activity showed no association with the cagA status: cagA(+) (2.21 +/- 1.03 U mg(-1) protein), cagA(-) (2.18 +/- 0.79 U mg(-1) protein). Patients with GU had the highest PLC activity (2.77 +/- 1.26 U mg(-1) protein) and patients with GC had the lowest activity (1.8 +/- 0.57 U mg(-1) protein). CONCLUSIONS: Although PLC activity was present in all strains tested, it may only have pathological importance in patients with GU. However, the extent of PLC activity was independent of the presence of the cagA gene.