液相色谱-串联质谱法鉴定大鼠血浆中的山莨菪碱及其代谢物

 目的液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-MSn)联用法鉴别大鼠血浆中的山莨菪碱及其主要代谢物。方法取单剂量灌胃20 mg山莨菪碱的大鼠血样,甲醇沉淀蛋白,采用LC-MS及LC-MSn等方法分析血样。和空白血样及山莨菪碱相比较,根据血样中代谢物相对分子质量的变化(ΔM)及其多级质谱数据,鉴定并阐述其结构。结果在服药后的大鼠血样中发现6种代谢物,分别为6β-羟基托品、N-去甲基6β-羟基托品、脱水山莨菪碱、苯氧化山莨菪碱、N-氧化山莨菪碱以及托品酸。结论该方法灵敏,快速,简便,适合于药物及其代谢物的快速鉴定。     

山莨菪碱及其大鼠肠内菌体外代谢物的液相色谱-质谱法分析

目的 用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱联用法研究山莨菪碱在大鼠肠内菌中的代谢.方法 以山莨菪碱优化色谱及质谱条件,总结其色谱及质谱行为规律.将山莨菪碱与大鼠肠内菌体外厌氧温孵培养,并与空白样品及山莨菪碱对照品进行比较,依据被测物的多级质谱数据,鉴定代谢物并阐述其结构.结果 在温孵液中发现了山莨菪碱的脱水及水解代谢产物,即脱水山莨菪碱、6β-羟基托品和托品酸.结论 该方法灵敏、快速、简单,适合于药物代谢分析.     

电喷雾串联质谱法检测大鼠粪样中的樟柳碱及其代谢物

 目的应用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MSⁿ)法检测樟柳碱及其大鼠粪样中的代谢物。方法收集灌胃20 mg樟柳碱的大鼠粪样,用水浸泡后,以乙酸乙酯萃取,采用甲醇-0.01%三乙胺水溶液(以甲酸调节pH 3.5)(60∶40)为流动相,0.2mL·min^-1流速,40℃柱温,以及离子源喷射电压5.0 kV,毛细管电压45 V,毛细管温度200℃,鞘气(N₂)流速40个单位等进行LC-MS及LC-MSn检测原药及其代谢物。和空白粪样及樟柳碱相比较,根据代谢物相对分子质量的变化(ΔMr)及其多级质谱数据,鉴定并阐述其结构。结果在服药后的大鼠粪样中发现5种代谢物,分别为莨菪品、去甲基莨菪品、去甲基樟柳碱、羟基樟柳碱以及樟柳酸等。结论该方法灵敏、快速、简便、可靠,适合于生物样品中的药物及其代谢物的快速鉴定。     

液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中布洛芬

 目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定人血浆中布洛芬。方法血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-甲醇-5 mmol·L^-1醋酸铵-甲酸(450∶450∶100∶0.062 5)作为流动相,采用Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱分离,通过电喷雾电离源以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z205→m/z161(布洛芬)和m/z229→m/z185(内标,萘普生)。结果人血浆中布洛芬测定的线性范围为50.0～25 000μg·L^-1,定量下限为50.0μg·L^-1,日内、日间精密度(RSD)均小于8.5%,准确度(RE)在±2.5%以内,每个样品测试时间仅为4.0 min。结论pH值是影响布洛芬色谱行为和质谱响应的主要因素,优化后的方法具有快速、灵敏等特点,适用于布洛伪麻片中布洛芬的生物利用度和生物等效性研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中布南色林及其代谢物的浓度

 目的 建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中布南色林及其代谢产物N-去乙基物的药物浓度方法。方法 血浆样品经饱和碳酸氢钠水溶液0.2 mL碱化后用醋酸乙酯-二氯甲烷(4∶1)萃取,布南色林与其代谢物N-去乙基物分别以布南色林B和布南色林D为内标,采用LC-MS/MS测定。色谱柱为Agilent Eclipse plus C₁₈(4.6 mm×150 mm,3.5 μm),以乙腈-水(87∶13,V/V,含0.005 mol·L^-1甲酸铵和0.1%甲酸)为流动相,流速为0.5 mL·min^-1,柱温为40 ℃;质谱条件采用ESI离子源,检测方式为正离子电离,选择性离子监测(SRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 368.2→297.2(布南色林),m/z 396.3→297.2(布南色林B),m/z 340.2→297.1(N-去乙基物),m/z 356.2→313.3(布南色林D)。结果 布南色林和N-去乙基物在10~2 000 ng·L^-1(r²=0.997)内线性良好,其平均回收率分别为93.5%和74.5%以上,批内、批间精密度分别小于9.0%与16.4%。结论 本试验建立的布南色林及N-去乙基物血药浓度的测定方法简便、快速、准确、灵敏,可用于临床研究中布南色林及其代谢物的药动学研究与治疗药物监测。     

液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中的槲皮素代谢物

 目的采用液相色谱-质谱联用法鉴定大鼠口服槲皮素单体后血浆中的代谢产物。方法血浆样品经过2mol·L^-1盐酸(甲醇-水)水解后,进行色谱分离,采用液相色谱-质谱联用仪检测,大气压电喷雾离子源(EPI)负离子条件下进行扫描,鉴定大鼠给药槲皮素(100mg·kg^-1)单体后血浆中代谢产物的结构。结果通过与标准物紫外谱图比较,结合质谱仪扫描结果分析,在大鼠给药槲皮素(100mg·kg^-1)单体后血浆中鉴定出槲皮素(m/z→301.0)和异鼠李素(m/z→314.9)两种代谢产物结构。结论采用盐酸酸水解的方法可快速、有效地鉴定出大鼠血浆中槲皮素代谢产物,为进行含槲皮素中药及其复方的药动学研究提供参考。     

液相色谱-质谱联用技术在药物及其代谢物的分析应用

液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的研究开始于20世纪70年代,到90年代方出现了被广泛接受的商品接口及成套仪器。由于有机化合物的80%不能气化,只能用液相色谱分离,特别是近年     

生姜中姜黄素的高效液相色谱-质谱法检测

目的 建立一种测定生姜中姜黄素含量的简便、准确、抗干扰能力强的高效液相色谱法(HPLC),同时用液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)确定其存在.方法 用乙醇对生姜中姜黄素进行提取,用HPLC法测定含量.色谱条件:Kro-masil C<,18>柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈:水(含8%冰醋酸)=49:51;流速为1.0 ml·min<'-1>;检测波长430nm;柱温:室温.结果 姜黄素线性范围为1 020.00～40 800.00 ng·ml<'-1>(r=0.999 5),检测下限为785 ng·ml<'-1>,日内精密度的RSD小于3%,加样回收率在96.00%～105.00%,RSD=3.35%.结论 在1 020.00～40 800.00 ng·ml<'-1>浓度范围内,峰面积积分值和浓度呈良好的线性关系.HPLC-MS法表明生姜提取液中存在姜黄素.方法 学实验表明此方法具有操作简便、设备要求低、准确的特点,是一种生姜中姜黄素的比较完善的分析方法.     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中厄贝沙坦

 目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定人血浆中厄贝沙坦的浓度。方法50μL血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后,以乙腈-水-甲酸(90∶10∶0.25)为流动相,Zorbax SB C₁₈柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以选择反应监测(SRM)方式进行检测。结果测定血浆中厄贝沙坦方法的线性范围为2.0～5 000μg·L^-1,定量下限为2.0μg·L^-1。日内、日间精密度(RSD)均小于8.3%,准确度(RE)在±4.1%以内。厄贝沙坦和内标替米沙坦的回收率分别为90.9%和90.4%;每个样品测试时间仅为3.6 min。应用此法研究了18名健康受试者单剂量po 150 mg厄贝沙坦片后的药动学特点。结论该法选择性强,灵敏度高,适用于厄贝沙坦的临床药动学研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氯法拉滨的浓度

 目的 建立高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中氯法拉滨浓度。方法 采用API3000串联质谱仪及Shimadzu系列液相色谱仪进行检测。血浆样品经乙酸乙酯提取处理,以克拉屈滨为内标。色谱柱为Thermo C₁₈柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,流动相为乙腈-水（250∶3,其中含4 mmol的乙酸铵和0.3%的甲酸）,流速为0.5 mL·min^-1。氯法拉滨和克拉屈滨的MRM扫描离子通道m/z分别为304.0→170.0,286.1→170.0。进样体积为20 μL,每个样品的分析时间为5 min。结果 氯法拉滨和克拉屈滨保留时间分别为4.00,4.11 min。氯法拉滨在10~2 000 ng·mL^-1内线性关系良好（r=0.999 5）,日内、日间RSD均低于9.60%,准确度为101.10%~102.94%。结论 本法样品预处理简便快速,检测准确、灵敏、专一,适用于氯法拉滨药动学的研究。     

基于UPLC-MS/MS的芍药苷及其代谢产物在大鼠体内药动学研究

目的建立快速、灵敏、简便的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中芍药苷及其代谢产物芍药内酯苷的暴露量,并研究单次ig给予大鼠低、中、高剂量(20、60、120 mg/kg)的芍药苷水溶液后,芍药苷、芍药内酯苷在大鼠体内的药动学特征。方法以栀子苷为内标,血浆样品经甲醇(含0.1%甲酸)沉淀蛋白后,通过ACQUITY UPLC BEH-C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,色谱运行时间为4.5 min。采用电喷雾离子源(ESI),负离子扫描模式,以多反应监测方式(MRM)进行定量测定。结果芍药苷、芍药内酯苷的标准曲线的线性范围均为2.00~400 ng/m L,定量下限均为2.00 ng/m L,2者日内和日间精密度RSD均小于9.10%。芍药苷在低、中、高3个剂量给药组中的t_(max)分别为(1.56±0.62)、(1.13±0.35)、(1.28±1.92)h,Cmax分别为(85.45±47.49)、(390.75±139.26)、(1 223.5±420.15)μg/L;其中芍药苷水溶液低、中剂量组未检测到代谢产物芍药内酯苷,芍药苷水溶液高剂量组芍药内酯苷的tmax为(1.81±0.53)h,C_(max)为(19.81±8.98)μg/L。结论本方法简便、准确、专属性强,适用于芍药苷和芍药内酯苷在大鼠体内的药动学研究。     

大鼠灌胃棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷后血清中药物的分析

目的 研究大鼠灌胃棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷后血清中药物的分析检测方法.方法 大鼠灌胃250mg/kg棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷,收集血样,进行适当的前处理,采用HPLC-DAD、LC-MSc法对血清样品进行检测.结果 HPLC-DAD和LC-MSn两种方法均能检测到血清中的棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷,但未能检测到其代谢产物.血清样品前处理中的离心转速、pH值、纯化方法对血清中棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷的分析检测有明显影响.结论 建立了大鼠灌胃棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷后血清中药物的快速灵敏的分析检测方法,为棉花皮索-8-O-葡萄糖醛酸苷的进一步药动学研究提供参考依据.     

血府逐瘀口服液的高效液相色谱指纹图谱研究

目的 研究血府逐瘀口服液的HPLC指纹图谱.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent HC C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.2%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为25℃;检测波长为254、320、400 nm;进样量:10μL.计算10批样品指纹图谱的数量相似度和程度相似度.结果 确定了20个共有峰,10批样品指纹图谱的数量相似度在0.80以上,程度相似度在0.57以上.结论 程度相似度比数量相似度更能反映样品的内在差异.     

炮制对苦杏仁中苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响

目的:研究炮制对苦杏仁中主要成分苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响。方法:分别给SD大鼠注射和灌胃苦杏仁苷,灌胃苦杏仁生品及炮制品后,于不同时间点采血,高效液相色谱-质谱联用法分析血浆中苦杏仁苷及其代谢产物,绘制药时曲线。结果:苦杏仁苷注射给药后在血浆中以原型形式存在,而苦杏仁苷、苦杏仁生品和炮制品灌胃给药后均未检测到原型,其代谢产物经质谱鉴定为野樱苷;且炮制后代谢产物野樱苷在大鼠体内的药时曲线与生品有明显不同。结论:炮制对苦杏仁在大鼠体内的代谢过程有较大影响。     

高效液相质谱联用技术鉴定刺五加注射液中苯丙素类化学成分

刺五加药材的化学组成已有报道,而未见刺五加注射液化学物质基础的研究报道。该研究采用液相色谱离子阱质谱（LC-MSⁿ）和液相色谱四极杆飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）技术对刺五加注射液中苯丙素类化学成分进行定性分析。采用Ultmate^TM XB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以0.5%甲酸溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温20℃。根据高分辨和多级质谱数据,并结合对照品及文献数据,在刺五加注射液中共推断出54个苯丙素类成分,包括苯丙酸类成分34个,木脂素类成分16个,香豆素类成分4个,其中28个成分在刺五加中未见报道,通过对照品比对鉴定了14个化合物结构。该研究建立的方法可以简便快速地对刺五加注射液中的苯丙素类化学成分进行鉴定,研究结果为明确刺五加注射液化学物质基础提供了科学数据。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中莫诺苷血药浓度

莫诺苷是从中药山茱萸Cornus officinalis Sieb. & Zucc.中提取分离获得的环烯醚萜苷类化合物,具有神经保护等多种药理活性.本研究首次采用LC-MS/MS技术建立了大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定方法.血浆样品采用蛋白沉淀法,以金丝桃苷作为内标,色谱柱为Inertsil C8-3色谱柱(2.1 mm×50 mm,5 μm),流动相为水(含1 mmol·L^-1甲酸钠)-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM).莫诺苷在2~5 000 μg·L^-1 (r= 0.995 7)线性关系良好,最低定量限为2 μg·L^-1.方法精密度、准确度、回收率和基质效应均符合生物样品测定的要求,适合大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定.应用该方法进行莫诺苷在大鼠体内的药代动力学研究,给药剂量为20 mg·kg^-1,绘制血药浓度-时间曲线,并采用DAS 2.0 计算得主要药代动力学参数:AUC_0-∞为(587.6±290.7) μg·min·L^-1,C_max为(334.2±148.0) μg·L^-1,T_max为(0.6±0.3) h,t_1/2为(0.7±0.3) h.     

HPLC-ECD与HPLC-MS联用测定人尿样中的罗红霉素及其代谢物

 目的:建立灵敏专一的分析方法,测定人尿样中的罗红霉素(E-Rox)及其活性代谢产物Z-Rox?方法:采用高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)与高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS),样品经液-液萃取后,通过HPLC-ECD定量分析E-Rox浓度;然后,采用HPLC-MS,通过选择性离子反应监测方式(SRM),测定Z-Rox与E-Rox的尿药浓度比值,SRM扫描方式进行定量分析的碎片离子为m/z679(母离子m/z837)?结果:E-Rox和Z-Rox的线性范围分别为0.1～10mg·L^-1和0.05～5mg·L^-1,最低检测限分别为0.1mg·L^-1和0.05mg·L^-1,日内、日间RSD均小于12.5%?两法联用,分析了4名健康受试者单剂量口服150mg E-Rox后的尿样?结论:为深入研究E-Rox在人体内的代谢规律提供了可靠的分析方法,首次测定了人尿样中的活性代谢产物Z-Rox?     

基于UPLC-Q-TOF-MS及数据自动处理技术的 刺五加提取物中异嗪皮啶及其代谢产物分析

目的:分析大鼠灌胃刺五加提取物后血浆、胆汁、尿液和粪便中异嗪皮啶(M0)及其代谢产物。方法:健康雄性wistar大鼠按325 mg.kg-1的剂量灌胃给予刺五加提取物,分别采集给药后1,1.5,2,4,6 h肝门静脉血液并用SPE技术制备血浆;采集0～12 h胆汁并用SPE技术制备;0～12 h,12～24 h分别采集尿液和粪便样品并制备样品,采用UPLC-Q-TOF-MS技术和Metabolynx XS软件联合的方法分析。结果:在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中检测到M0,在血浆和胆汁中检测到代谢物异嗪皮啶葡萄糖醛酸苷(M1)。其中M1是首次报道的异嗪皮啶代谢产物。结论:异嗪皮啶在大鼠体内以葡萄糖醛酸形式代谢,最终又以异嗪皮啶形式排出体外。     

Metabonomic study on the anti-osteoporosis effect of Rhizoma Drynariae and its action mechanism using ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Ethnopharmacological relevance

Rhizoma Drynariae (RD) is an effectively traditional Chinese medicine which is usually used in treating osteoporosis, bone fracture, streptomycin ototoxicity and hyperlipemia. Up to now, studies on pharmacological mechanism of RD mostly focus on cell and gene level, little is known about its metabonomics study. The aim of this study is to establish the rats plasma metabonomic profiles of control, model and treatment group, then to investigate the anti-osteoporosis effect of RD and its action mechanism.

Method

A total of 21 Wistar rats was divided into three groups: control group, model group and treatment group. The model and treatment rats were injected prednisolone for 12 weeks, at the same time the treatment rats were orally administered RD extract at a therapeutic dose (10 g/kg, expressed as the weight of raw material) once daily throughout the experimental period, control group and model group were orally gavaged approximately volume normal saline solution. After 12 weeks, all plasma samples of three groups were collected and their metabolic profiling changes were analyzed by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The resulting dataset was analyzed by principal component analysis (PCA) and partial least squares discriminant analysis (PLS-DA). The identification of all potential biomarkers was performed using reference standard by comparing their mass spectra, MS/MS fragmentation and retention time. Furthermore, clinical biochemistry and biomechanics study were also carried out to ensure the success of the osteoporosis model and to investigate the anti-osteoporosis effect of RD.

Results

Obvious separation trend between control and model group was found in PCA score plot, the anti-osteoporosis effect of RD can be indicated in PLS-DA score plot among these three groups. Six potential metabolite biomarkers, Lysophosphatidylcholines (C16:0 LPC, C18:0 LPC, C18:1 LPC and C18:2 LPC), tryptophane and phenylalanine, which were proved to be related with osteoporosis, were identified in the rats plasma. Compared with control group, level of all biomarkers increased significantly in model group, while that was much closer to normal in treatment group.

Conclusion

The anti-osteoporosis effect of RD has been reliably confirmed by the metabonomics method. The osteoporosis might be prevented by RD via intervening antioxidant-oxidation balance, tryptophane metabolism and phenylalanine metabolism in vivo in rats.