胆红素脑病NMDA受体的过度活化机制

目的：探讨Ｎ－甲基－Ｄ天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体水平胆红素脑病发生机制与防治措施。方法制作胆红素脑病动物模型基础上,在体脑内微透析提取兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）神经递质,ＨＰＬＣ检测天冬氨酸（Ａｓｐ）、谷氨酸（Ｇｌｕ）、甘氨酸（Ｇｌ６）,并给予模型动物ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＧＡＰＡ干预,电镜检测脑组织超微结构,荧光检测脑组织ＡＴＰ与细胞内Ｃａ＾２＋含量。结果胆红素毒性脑组织ＡＴＰ含量显著降低,细胞外Ｇｌｙ与     

NMDA受体拮抗剂GAPA治疗实验性胆红素脑病的机制研究

目的 探讨NMDA受体拮抗剂GAPA对胆红素脑病治疗作用及其机制。方法 制作胆红素脑病动物模型基础上,在体脑内微透析提取兴奋性氨基酸(EAA)神经递质,HPLC检测天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly),并给予模型动物NMDA受体拮抗剂GAPA干预,电镜检测脑组织超微结构,荧光检测脑组织ATP含量与细胞内Ca^2 。结果 胆红素毒性脑组织ATP含量显降低,细胞外Gly与细胞内Ca^2 显增高;GAPA不影响胆红素毒性脑组织ATP含量,但可显降低细胞内Ca^2 ,减轻胆红素毒性脑水肿。结论 NMDA受体过度活化致细胞内Ca^2 超载参与介导胆红素神经毒性,NMDA受体拮抗剂可望成为胆红素神经毒性防治的重要途径。     

胆红素脑病与神经细胞凋亡

胆红素脑病是新生儿黄疸的极重症表现，可留下神经系统后遗症甚至引起死亡，但胆红素神经毒性的发病机制迄今尚未完全阐明。既往研究表明，胆红素通过抑制神经元突触传递过程，蛋白激酶的磷酸化，神经递质释放影响神经元的功能。近年来随着分子生物学研究的不断深入，发现胆红素可引起细胞内Ca^2 超载，影响线粒体呼吸功能，介导胆红素神经毒性，导致神经细胞凋亡。     

NMDA受体NR2B亚基在脑微血管内皮细胞模型中作用机制研究

神经精神性狼疮(neuropsychiatric lupus erythe-matosus,NPSLE)发病机制尚不完全清楚,目前认为,NPLE与多种自身抗体及细胞因子异常有关,NMDA受体是中枢神经系统兴奋性氨基酸(EAA)离子型受体,它过度兴奋或抑制都会导致细胞凋亡,狼疮病人血清中抗NR2a和NR2b抗体水平与特定的脑功能损伤有关,本研究旨在比较抗NR2抗体与NMDA受体拮抗剂、激动剂对脑微血管内     

康脑灵胶囊对VD大鼠神经元NMDA受体表达及钙超载的影响

目的:研究康脑灵胶囊对痴呆大鼠NMDA作用机制的影响。方法:用免疫组化、原位杂交方法观察康脑灵胶囊对海马区神经元N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体及其mRNA表达的影响,以流式细胞技术检测神经元细胞内钙的含量。结果:康脑灵胶囊能抑制VD大鼠神经元NMDA受体及mRNA表达,降低钙含量。结论:康脑灵胶囊能对抗兴奋性毒性对神经元的损伤。     

严重烫伤大鼠海马NMDA受体活性变化的机制研究

目的 研究严重创伤对海马NMDA受体（NR）活性的影响及其相关机制，为设法调节NR的活性从而控制创伤后HPA轴的过度兴奋提供实验依据。方法 以大鼠背部30TBSAⅢ度烫伤作为严重创伤过度应激模型，利用放射配基结合法检测烫伤后海马NR活性（最大结合容量及亲和和）的变化，Western-blot 免疫共沉淀方法检测烫伤海马NR1，NR2A，NR2B酪氨酸磷酸化的改变，高效液相色谱方法检测烫伤海马谷氨酸含量的变化。结果 严重烫伤后0．1,1,2,4,8,24,48h海马NR的亲和力显著增加，尤以烫伤后2h最为明显，最大结合量从1h起亦显著增加；各时相点海马酪氨酸磷酸化NR1，磷酸化NR2A磷酸化NR2B蛋白水平皆显著增高；烫伤后0,5,1,2,4h，海马内谷氨酸释放量增加非常明显，伤后24h及48h无明显变化。结论 严重烫伤导致海马NR持续过度激活；NR酪氨酸磷酸化水平的增加是其过度激活的重要原因，氨酸释放量的变化可能不是持续激活的主要因素。     

电针治疗功能性消化不良大鼠海马体NMDA受体的调节机制

目的:探讨电针治疗功能性消化不良大鼠海马体NMDA受体的调节机制。方法:本项目采用电针足三里、中脘穴作为干预因素,以功能性消化不良大鼠为受试对象,运用免疫组化等多种技术手段,从边缘系统-脊髓-胃肠多水平研究电针对功能性消化不良大鼠胃肠吸收、胃肠动力及神经递质的影响,探讨电针功能性消化不良大鼠海马体NMDA受体通路的分子机理。结果:电针对功能性消化不良大鼠胃肠吸收功能、胃肠动力等有明显影响,电针对功能性消化不良大鼠海马体NMDA受体有显著调节作用。结论:电针治疗功能性消化不良,可能是通过海马体的NMDA受体通路对认知情感中枢与神经内分泌系统进行良性平衡调节而实现的。这一作用的完成,可能是通过通过拮抗海马NMDA受体,进而纠正海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态来实现的。     

新生儿胆红素中毒性脑病发病机制的研究进展

胆红素中毒性脑病是由于未结合胆红素(unconjuga-red bilirubin CUB)在脑细胞的沉积引 起的一种病变，过去称之为黄疸。本病严重威胁新生儿生命和健康，死亡率很高，约50%-70 %患儿死于急性期，幸存者约75%-90%留有严重的神经系统后遗症，是人类听力障碍，视觉异 常、 智能发育迟缓的重要原因。早在1904年，Schmol首先命名这一病为核黄疸以来， 关于胆红素中毒性脑病的发生机制及防治进行了多方面的研究。近年来，随着分子细胞化学 技术的发展，对胆红素中毒性脑病的发生机制有了进一步认识，这将有助于新生儿黄疸合理 防治，防治胆红素中毒性脑病损伤及其后遗症发生有极其重要的意义。 1　胆红素对神经细胞的毒性 　　胆红素对神经细胞有毒性作用。Dodd在离体实验中发现胆红素能抑制神经细胞膜生物 功能，降低细胞内核酸与核蛋白合成，并影响线粒体氧化活力及能量代谢。近年来，许多学 者研究胆红素对神经毒性作用的焦点是对神经无突触膜传递功能的影响。已发现其毒性作用 可分为3个步骤：①聚集：首先B-与突角膜的阳离子极性基因(神经节苷脂、神经鞘磷脂) 形成静电复合物(此过程仅需15秒)；接着突触膜的静息电位与动作电位下降，神经传导兴奋 性随之下降(此过程＜12小时)。同时，突触递质的磷酸化作用受抑制，酪氨酸吸收减少，多 巴胺合成量也随之减少；②结合：B-不断聚集，进而被包埋入突触膜的疏水核心，并继续 与神经节苷脂、神经鞘脂磷结合，使神经递质的合成、神经传导、线粒体功能均进一步受损 。胆红素与这两种脂质的结合力是与其它脂质结合力的5-25倍。③沉积：当 突触膜被B-聚集，结合达到饱和状态后，神经元细胞体逆生吸收胆红素，使其沉积于线粒 体等受损部位，神经元细胞发生肿胀、变形、固缩、崩解及被吞噬，神经胶质增生。上述3 个步骤是渐次发生的，在聚集与结合步骤，神经元损伤均可逆，临床可不表现症状，需依靠 脑干感觉诱发电位检测才能发现，可不表现症状，需依靠脑干感觉诱发电位检测才能发现， 故可称为“新生儿亚临床型胆红素神经中毒症”或“新生儿胆红素脑病”。至 沉积步骤，病变转为不可逆，临床表现典型神经系统功能异常症状(如抽搐)，即为核黄疸， 多留有后遗症。另外损害是否可逆除与胆红素的浓度有关外，尚与神经细胞暴露于胆红素的 时间长短有关。暴露时间短其毒性作用能被等量克分子白蛋白纠正，但暴露时间长，则其抑制作用即难以逆转。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞[Ca2+]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系. 方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法,动态测定细胞[Ca2+]i,MTT法测定细胞增殖. 结果血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高,并促进细胞增殖.钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖.中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时,对细胞游离钙却无影响. 结论肾小球系膜细胞[Ca2+]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联,但[Ca2+]i的升高并非细胞增殖的唯一途径.     

Induction of Increased Intracellular Calcium in Astrocytes by Glutamate through Activating NMDA and AMPA Receptors

Almost 90 %ofcellsincentralnervoussystemareglia ,buttheirfunctionsarelittleknown .Whencentralnervoussystemisinjured ,itshowsgliosisnomattertheetiology .Inrecentyears ,manyresearchesrevealthatgliaalso playimportantrolesinnormalphysiologicalactivityandhaveintimaterelationshipwithneurons .Itisevidencedthataclosebidirectionalcommunicationsystemexistsbetweenneuronsandas trocytes[1] .AstrocytescanrespondtotheneurotransmitterreleasedfromactivesynapticterminalswithcytosolicCa2 +elevations ,andinturnc…     

Induction of Increased Intraceilular Calcium in Astrocytes by Glutamate through Activating NMDA and AMPA Receptors

To study the effect of glutamate on the intracellular calcium signal of pure cultured ratastrocytes and the role of NMDA and AMPA receptors in the procedure, the change of calcium sig-nal was investigated by monitoring the fluctuation of intracellular Ca2+ concentration ([Ca2+]i) onthe basis of Fura-2 single cell fluorescent ratio (F345/F380). The changes in the effect of glutamateon the intracellular calcium signal were observed after blockage of NMDA and(or) AMPA recep-tors. It was found that L-glutamate could induce an increased [Ca2+]i in most of the cells in concen-tration- and time-dependent manner. D-(-)-2-amino-5-phosphonopentanoic acid (D-AP-5, a selec-tive antagonist of the NMDA receptor) and 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione (CNQX, a selec-tive antagonist of the AMPA receptor) could abolish the effects of NMDA and AMPA respectively.Th.e treatment of D-AP-5 and CNQX simultaneously or respectively could attenuate the effect of L-glutamate at varying degrees. All these indicated that glutamate could modulate intracellular Ca2+of pure cultured rat astrocytes through different pathways. The activation of NMDA and AMPA re-ceptors took part in the complex mechanisms.     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法:取新生2~3 d W istar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养。将细胞随机分为:对照组(C组),谷氨酸组(G组),氯胺酮组(K组),余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组(标记为GK1~GK3组),培养30 m in后取各细胞检测[Ca2+]i,再培养48 h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较,G组细胞发生了大量凋亡(P<0.01),[Ca2+]i显著升高(P<0.01);与G组比较,GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低(P<0.05),GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低(P<0.01)。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。     

肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca2+]i变化及其机制探讨

目的:研究肺纤维化(PF)大鼠肺微血管内皮细胞内的Ca2 变化,探讨其在PF中的作用机制.方法:SD大鼠20只,随机分为PF组和对照组,每组10只动物,按5 mg/kg体质量分别气管滴注博莱霉素及等量生理盐水,取外周肺组织原代培养肺微血管内皮细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2 ]i及中电导钙激活钾通道蛋白1(IKca1)表达,计算机图像分析免疫细胞化学法IKca1的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜检测PMVECs内[Ca2 ]i:PF组为(166.56±24.17)明显高于对照组(95.79±13.51),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).间接免疫荧光法检测IKca1表达:PF组为(679.29±206.98)明显低于对照组(958.75±188.84),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);免疫细胞化学检测IKca1表达:PF组(169.08±14.81)明显低于对照组(189.78±13.73),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PF时,肺微血管内皮细胞[Ca2 ]i过载,其发生机制可能与IKca活性异常有关.     

钙信号在周期性牵张诱导逼尿肌细胞高表达Cx43中作用的实验研究

目的探讨钙信号在周期性牵张诱导膀胱逼尿肌细胞高表达连接蛋白43(Connexin43,Cx43)中的作用.方法运用牵张膀胱逼尿肌细胞体外模型,给逼尿肌细胞周期性20%牵张持续6 h,采用RT-PCR测定受EGTA孵浴的逼尿肌细胞Cx43 mRNA表达改变;采用激光共聚焦法,测定不同钙通道拮抗剂作用条件下,细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的改变.结果牵张前30 min培养基中加入5 mmol/L EGTA,可以显著抑制牵张诱导的Cx43 mRNA高表达;机械牵张可以显著增加[Ca2 ]i;5 mmol/L EGTA可以完全抑制牵张诱导的[Ca2 ]i增加;GdCl3、硝苯地平、兰尼碱与毒胡萝卜素可分别抑制61.95%、29.98%、87.98%由牵张诱导的[Ca2 ]i增加.结论牵张诱导Ca2 内流及通过Ca2 内流诱导的钙触发钙释放(calcium-induced Ca2 release,CICR),在牵张诱导的逼尿肌细胞Cx43高表达反应中可能起着重要的作用.     

低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响

目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性.     

吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究吗啡对大鼠海马星形胶持细胞[Ca^2 ]i的影响，探索吗啡对星形胶质细胞的作用效应。方法 运用荧光探针Fluo-4，利用激光共聚焦显微镜研究培养纯化大鼠海马星形胶质细胞[Ca^2 ]i的变化。结果 经0.5,1,2,10μmol/L浓的吗啡短期处理3d后，细胞内[Ca^2 ]i浓度与正常细胞比较差异无显著性（P＞0．05）。吗啡急性作用于正常星形胶质细胞后，[Ca^2 ]i呈单峰样升高；而作用于吗啡处理后的细胞，作用浓度需高于处理浓度出现[Ca^2 ]i呈单峰样升高的现象，纳络酮可阻断上述效应，NMDA受体阻断剂MK－801则不能。结论 星形胶质细胞[Ca^2 ]i对吗啡的反应性变化可能参与吗啡耐受的形成。     

高糖对大鼠心肌细胞NMDA受体表达、胞内钙和超氧自由基水平的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对心肌细胞促离子型谷氨酸受体亚型NMDA受体（NMDAR）表达、胞内钙水平以及活性氧自由基产生的影响.方法 分离新生（1～3天）大鼠心室肌细胞,心肌细胞与不同浓度葡萄糖（对照组葡萄糖浓度5mmol/L,高糖组葡萄糖浓度33mmol/L）共孵育24 ～ 72h后,用Western blot法检测心室肌细胞NMDAR1和NMDAR2B亚单位的表达水平,活细胞工作站检测胞内Ca2＋水平,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基（ROS）含量.结果 与对照组细胞相比,高浓度葡萄糖使心肌细胞的NMDAR2B的表达水平明显上调（P＜0.05）,而NMDAR1的表达则降低.经高糖处理的心肌细胞在收缩时胞内钙水平高于对照细胞,高糖处理使心肌细胞的ROS水平升高,而用MK-801选择性阻断NMDAR可明显降低由高糖所致的胞内ROS增高（与高糖组对比,P ＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖可上调乳鼠心肌细胞NMDAR2B及下调NMDAR1的表达,并增加细胞内Ca2＋水平及ROS的生成,而阻断NMDAR可抑制ROS的生成.提示NMDAR可能参与糖尿病性心肌损害。     

Amiloride预防性给药对压力超负荷心肌肥厚大鼠左室肥厚？…

采用压力超负荷心肌肥厚模型，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ作为荧光指示剂，观察Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ（Ａｍｉ）和Ｅｎａｌａｐｒｉｌ（Ｅｎａ）预防性给药对压力超负荷左室肥厚（ＬＶＨ）大鼠心肌肥厚的形成及心肌细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的影响，结果表明，压力超负荷时，左心室重与体重之比（ＬＶＷＷ／ＢＷ）明显增加（Ｐ〈０．０１），左室心肌细胞内确有钙超载现象；Ａｍｉ和Ｅｎａ组的ＬＶＷＷ／ＢＷ较ＬＶＨ组明显降低（Ｐ〈０．０１）