大鼠输尿管梗阻后肾炎中的P-选择素表达及意义

目的：探讨粘附分子Ｐ－选择素在单侧输尿管梗阻后肾炎中的作用。方法建立单侧输尿管梗阻（ＵＵＯ）动物模型,观察肾组织病理改变和Ｐ－选择素在肾组织中的表达,以及抗Ｐ－选择素单克隆抗体（单抗）对其。结果大鼠ＵＵＯ第１ｄ即见间质以单核巨噬细胞为主的炎细胞浸润和Ｐ－选择素在小管间质表达;第３ｄ间质炎细胞增多,Ｐ－选择素明显表达,第７ｄ间质炎细胞浸润达高峰伴间质水肿,而Ｐ－选择表达下降,抗Ｐ－选择素单抗治疗组炎     

MicroRNA-29c在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达及意义

目的:观察microRNA-29c(miR-29c)在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达变化,探讨其是否参与肾间质纤维化及其可能机制.方法:高通量测序技术和实时荧光定量PCR检测miR-29c在UUO大鼠术后1d和3d肾脏组织中的表达情况.使用生物信息学预测miR-29c靶mRNA,对其靶mRNA进行Gene Ontology和pathway分析.结果:UUO大鼠术后1 d和术后3d手术侧肾组织miR-29c表达下调,Co1 I mRNA和FN mRNA的表达升高.预测靶mRNA经分析后获得miR-29c有统计学意义的10个靶mRNA,其中6个编码细胞外基质蛋白.结论:miR-29c在大鼠UUO模型早期的肾组织中表达下调,可能通过促进细胞外基质堆积参与肾间质纤维化的发生发展.     

α-平滑肌肌动蛋白在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达情况,探讨其与肾间质纤维化的关系。方法采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型,将60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,每组分别于术后7、14、21d各处死10只大鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色观察肾间质纤维化程度,行免疫组化方法检测两组大鼠不同时间段α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平。结果假手术组中,肾小球、肾小管和间质细胞均无α-SMA,与假手术相比,模型组手术后7d,肾间质中α-SMA阳性细胞数增多,呈进行性升高趋势,其与肾间质纤维化程度呈正相关。结论α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化的进展过程中发挥重要作用。     

大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1／Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。     

大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

大鼠输尿管梗阻后肾间质病变及：α—平滑肌肌动蛋白的表达

目的：探讨肌纤维母细胞（ＭＦＢ）在肾间质纤维化形成中的作用。方法：制作大鼠单侧尿路梗阻模型，观察α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞在肾间质病变中形成和发展的过程。结果：在单侧输尿管梗阻后４８ｈ肾间质区域即出现α－ＳＭＡ表达，ｄ３后阳性细胞数明显增加，ｄ７达高峰。结论：α－ＳＭＡ在肾间质纤维化时表达明显增加，应用α－ＳＭＡ染色能较好的标记ＭＦＢ，通过在原位肾间质观察α－ＳＭＡ的表达情况，是临床     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化

目的采用单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，观察UUO后肾脏病理和肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量及各氧化应激指标的改变，探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用。方法 成年健康Wistar大鼠24只，随机分为两组（n=12）：模型组（UUO组）大鼠麻醉后打开腹腔分离左侧输尿管，并于靠近肾盂段行左输尿管结扎；假手术组（Sham组）仅分离输尿管，不行结扎。两组大鼠于手术后10d处死取左侧肾脏，HE和Masson染色观察大鼠肾脏常规病理；以化学比色法测定梗阻侧肾组织匀浆中羟脯氨酸（Hyp）的含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）的含量。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果 大鼠行单侧输尿管结扎10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组相比，UUO组梗阻侧肾脏病理改变明显，且肾组织中Hyp和MDA含量增加（P〈0．01），T—AOC含量和T—SOD活性下降（P〈0．01）。相关分析显示肾组织中Hyp和MDA含量与Masson染色中胶原沉积成正相关，（r1=0.69，r2=0.66，P〈0．01）；肾组织中T—SOD活性和T—AOC含量与Masson染色中胶原沉积成负相关，（r3=-0．57，P〈0．05，r4=-0．59，P〈0．01）。结论 单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激参与肾间质纤维化的形成。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织MMP-2表达的影响

[目的]观察杜仲对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织MMP-2的影响并探讨其可能机制。[方法]采用单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化模型。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、模型组、厄贝沙坦组和杜仲组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10mg·kg-1·d-1、杜仲组给予杜仲6g·kg-1·d-1治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(Matrix metal proteinase-2,MMP-2)的表达。[结果]1.UUO组与假手术组相比,BUN,Scr水平均显著增加,杜仲组较UUO组呈下降趋势。厄贝沙坦组作用效果与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。2.与假手术组相比,肾组织行HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死,肾间质增宽,大量的炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。3.与假手术组相比,Mas-son染色结果显示UUO组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生,肾小球病变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。4.MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达,UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏,杜仲组MMP-2表达较假手术组减轻,但其表达仍高于UUO组。厄贝沙坦组与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。[结论]杜仲可上调MMP-2的表达,进而减缓肾纤维化的病程进展。     

鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理及足细胞表型改变的研究

 目的观察鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理和足细胞表型改变的时序变化,寻找输尿管梗阻后肾脏发生不可逆损伤的时相。方法建立单侧输尿管完全梗阻动物模型,梗阻后不同时间点取出肾脏,经HE染色和免疫荧光双标方法,观察肾脏病理及足细胞表型的改变。结果大体观察,梗阻24h后出现肾盂扩张,梗阻3d后出现肾皮质变薄。组织学观察,梗阻12h后出现一部分近曲小管扩张,小管上皮细胞呈水样变性肿胀,在梗阻3d后出现大量小管上皮细胞变形肿胀。免疫荧光双标法,梗阻24h后有少量足细胞、巨噬细胞同时被2种抗体标记,2d后足细胞呈减少趋势,而巨噬细胞逐渐增多。结论输尿管梗阻后在肾脏病理改变早于肾脏发生形态学改变的发生,输尿管梗阻后24h发生足细胞表型的改变,与肾脏肾盂出现明显扩张的时间相近,随着梗阻时间的延长,肾脏病理改变逐渐加重,足细胞转化逐渐增多。     

骨形态形成蛋白-7在实验性肾间质纤维化大鼠模型中作用的研究

目的:观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中骨形态形成蛋白-7(BMP-7)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾间质纤堆化的 关系。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组、假手术组和单侧输尿管梗阻组,分别于术后1d、3d、7d、14d处死大鼠,采用RT-PCR检测BMP-7mRNA、 转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平,用免疫组化检测肾小管间质中BMP-7、TGF-β1蛋白的定位和表达及其与输尿管梗阻后肾间质损害的关系。 结果:与时照组相比,BMP-7mRNA于术后第1天即出现表达下降并随梗阻时间延长递减,而TGF-β1mRNA则随着梗阻时间延长增加(P均<0.05)。BMP -7蛋白在对照组中高度表达,髓质区表达明显高于皮质区,主要分布在肾小管及肾间质,肾小球内基本无表达。在梗阻组BMP-7蛋白表达呈进行性下 降,而TGF-β1蛋白表达则逐渐增加(P均<0.01)。结论:BMP-7蛋白于肾小管间质病变早期即出现表达下调,早于肾间质纤维化的出现,且随间质病变进 展进行性下降。BMP-7表达下调可能参与介导肾小管间质损害的发生发展。     

加减草果知母汤对单侧输尿管结扎大鼠肾组织中结缔组织生长因子表达的影响

目的研究加减草果知母汤阻缓肾纤维化的机制。方法大鼠随机分为模型组、加减草果知母汤组、贝那普利组、假手术组和空白组,每组6只,前3组行左侧输尿管结扎术,14天后检测每组梗阻侧肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）表达的含量。结果加减草果知母汤组肾组织中结缔组织生长因子明显低于模型组（P〈0.01）。结论加减草果知母汤具有阻缓肾纤维化的作用,机制可能与降低肾组织中CTGF表达有关。     

哮喘息儿血清可溶性P-、L-选择素表达的变化及意义

目的观察可溶性P-、L-选择素在哮喘急性期、缓解期患儿和健康儿童血清中的变化，探讨其在哮喘患儿中的表达及意义．方法选取儿童哮喘急性期病例42例、缓解期病例18例及健康对照组儿童20例，应用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定其血清可溶性P-、L-选择素浓度并进行统计分析．结果血清P-选择素浓度哮喘急性期组较缓解期组和健康儿童组明显增高（P〈0．01），而哮喘缓解期组和健康儿童组相比无统计学意义（P〉O．05）；血清L-选择素浓度哮喘急性期组和缓解期组较健康儿童组明显升高（P〈0．01），而哮喘急性期组和缓解期组相比无统计学意义（P〉O．05）．结论血清可溶性P-选择素水平可以反映气道炎症严重程度，L-选择素可反映儿童哮喘的气道炎症及高反应性情况．     

输尿管结扎对小鼠肾皮质骨架蛋白与炎症因子表达的影响

目的 通过对UUO小鼠肾组织俚一平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（vimentin）、炎症介质细胞间粘附分子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、单核细胞趋化因子（monocyte chemoattractant protein1,MCP-1）表达的研究,探讨肾间质纤维化机制。方法实验取单侧输尿管结扎（UUO）21天小鼠结扎侧肾组织,肾组织α-SMA、Vimentin表达采用免疫组化技术;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果 UUO模型组小鼠肾小管间质α-SMA、Vimentin的表达较假手术组显著增高,肾组织中ICAM-1蛋白表达、MCP-1基因表达亦较假手术组显著增高。结论 输尿管结扎21天可诱导肾小管间质肌成纤维细胞的大量积聚,可能与肾组织炎症因子的高度表达相关。     

抗纤灵方对大鼠单侧输尿管梗阻所致肾纤维化的防治作用

目的：探讨中药抗纤灵方对大鼠单侧输尿管结扎（UUO）所致肾纤维化的防治作用及机制。方法：用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗组以抗纤灵方在造模的同时开始灌胃,1次／d,共4周。治疗的第2周末检测BUN、Scr含量等指标,观察肾功能变化;第4周末采用HE染色、丽春红染色观察。肾组织病理变化和胶原纤维沉积变化;采用RT-PCR法观察梗阻肾皮质C-Met、HGF、Erk1 mRNA表达。结果：模型组大鼠BUN、Scr明显升高;肾小管和间质的结构基本消失,呈现弥漫的细胞增殖;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润;肾组织C-Met mRNA表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药抗纤灵方治疗组肾脏炎性细胞浸润及间质损伤均轻于模型组;BUN含量显著降低,Scr含量趋向正常;肾组织C-Met mRNA表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。ERK总基因水平的表达在假手术组、模型组及中药治疗组之间比较无明显差异。结论：抗纤灵方可能与抑制肾组织C-Met mRNA表达并增加抗肾纤维化的细胞因子HGF mRNA表达来改善大鼠梗阻性肾间质纤维化及肾功能有关。     

FTY720对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的 研究FTY720对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的防治作用及机制.方法 将45只SD大鼠随机分成假手术组(SHAM),单侧输尿管梗阻组(UUO)和FTY720治疗组(UUO FTY720).治疗组于术前3 d给予FTY720 0.5 mg/(kg·d)灌胃,UUO模型组和SHAM组给予等量生理盐水.3组分别于术后7、14、21 d各处死5只大鼠,并收集血清和24 h尿液,观察肾功能和24 h尿蛋白变化.取梗阻侧肾做组织学检查,观察肾间质纤维化程度.用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、CD3、ED-1的表达水平.结果 术后14 d时治疗组24 h尿蛋白较模型组明显降低(P＜0.05).术后7、14、21 d治疗组血肌酐水平与模型组相比较均明显降低(P＜0.05),治疗组与SHAM组比较差异无显著性意义.治疗组术后7、14 d血尿素氮较模型组均有一定程度下降(P＜0.05).病理检查显示,治疗组纤维化程度较模型组明显减轻.免疫组化结果显示,α-SMA表达,SHAM组仅限于血管,治疗组和模型组表达明显增多,但治疗组表达要弱于模型组(P＜0.05).SHAM组肾间质有少量Ⅲ型胶原表达,模型组表达逐渐增强,治疗组较模型组表达明显减少(P＜0.05).SHAM组肾间质各时间点均未见炎性细胞浸润,与模型组相比,治疗组肾问质CD3、ED-1阳性细胞数降低(P＜0.01).结论 新型免疫调节剂FTY720可以明显减少UUO大鼠肾间质T淋巴细胞和巨噬细胞浸润,在一定程度上可以抑制肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质积聚,从而减轻UUO后大鼠肾问质纤维化的程度,保护肾功能.