卵巢癌细胞凋亡和细胞倍性与p53基因突变的关系

目的了解Ｐ５３基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型Ｐ５３基因在肿瘤发生中的作用机制。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测２０例正常卵巢组织、２０例良性卵巢肿瘤、４５例恶性卵巢癌（其中肿瘤未转移组２０例,肿瘤转移组２５例）患者的Ｐ５３基因突变,流式细胞仪Ｆａｃｓｃａｎ检测卵巢癌细胞染色体倍性,凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果卵巢癌转移组的Ｐ５３基因突变率为６０％,未转移组为４０％（Ｐ     

电化学疗法与恶性淋巴瘤细胞凋亡与相关基因表达

目的：探讨电化学疗法（ECT）与肿瘤细胞凋亡的关系。方法：采用Tunel法和免疫组化S－P法,分别检测肿瘤未治疗对照组和ECT组B细胞淋巴瘤组织的细胞凋亡率和p53,bcl-2基因的表达。结果：ECT组肿瘤细胞凋亡率（5．18）显著高于对照组（1．05）,p53,bcl-2在ECT组表达分别为80％,25％,在对照组表达分别为15％,90％,ECT组中p53表达与癌细胞凋亡率呈正相关,而bcl-2则与癌细胞凋亡率呈负相关。结论：ECT可诱导癌细胞凋亡,其发生可能与p53和bcl-2基因调控有关。     

痰标本检测P53和K—ras基因突变在非小细胞肺癌早期诊断中的价值

目的：研究P53和K-ras基因在非小细胞肺癌（NSCLC）患痰中突变率及其在NSCLC早期诊断中的意义。方法：研究组为经病理证实的非小细胞肺癌患45例，对照组为明确诊断的慢支、 肺 结核等良性病变患15例。两组患均留取痰标本，痰处理后行PCR扩增，扩增物变性后聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳，溴化锭中染色，紫外灯下观察。统计突变与未突变例数,x^2检验，分析结果。结果；研究组和对照组的 P53基因突变率分别为48．8％和20％（P＜0．05），K-ras基因突变率分别为55．6％和26．7％（P＜0．05），P53和K－ras基因同时突变率分别为5％和0（P＜0．05）。结论：研究组P53和K－ras 基因突变率明显高于对照组，研究组P53和K－ras基因同时突变率显高于对照组。P53和K-ras基因突变可以作为NSCLC的早期诊断指标，两联合检测意义更大。     

非小细胞肺癌患者外周血及组织中p53基因突变的研究

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中p53 基因突变检测的可行性及其临床意义.方法 应用PCR-SSCP分析技术,检测69例原发性NSCLC 患者血浆(手术前、后)及对应新鲜肺肿瘤组织中p53基因5～8外显子的突变情况,以15例肺良性病变组织及血浆、5例健康献血员血浆作对照.并同时对相应的组织病理切片进行p53蛋白的免疫组化染色检测.结果 NSCLC患者血浆(术前)和对应肿瘤组织中p53基因突变率分别为38%(26/69例)、54%(37/69例),其共同检出率达54%(20/37例);而对照组肺良性病变及健康人血浆中均未检出该基因突变.术后血浆中p53突变率明显低于术前,仅7例(10%)检测到p53突变,包括Ⅲ期3例,Ⅳ期4例, 多为有远处转移的患者.免疫组化染色p53蛋白表达阳性率为64%(44/69例), PCR-SSCP分析与免疫组化染色两种方法检测符合率为81%(56/69例).NSCLC患者血浆(术前)中p53基因突变在不同临床分期及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05).肿瘤组织中该基因的突变及表达在有无淋巴结转移患者间差异有统计学意义(P<0.05),而在不同病理分型、分化程度及临床分期间差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 p53基因突变在NSCLC患者血浆与原发肿瘤组织中有较高的一致性和检出率,且其改变与NSCLC临床分期和转移相关;监测肺癌患者手术前、后血浆中p53突变具有一定意义,通过检测外周血中p53基因的改变可能对肺癌的诊断、预后判断及术后追踪具有一定价值.     

卵巢癌细胞凋亡与端粒酶活性、p53突变的相关性研究

目的　研究卵巢癌组织中细胞凋亡与凋亡调控因子———端粒酶活性、p5 3突变之间的关系。方法　TRAP -ELISA法半定量测定卵巢癌组织的端粒酶活性 ;流式细胞计量术 (flowcytometry ,FCM)分析细胞凋亡率(Apo)、S期细胞比率 (SPF)、p5 3突变蛋白阳性率。结果　①随着临床分期、病理分级的升高及淋巴结转移 ,Apo、SPF均显著增加 (P <0 .0 1、P <0 .0 1、P<0 .0 5 ) ,直线相关分析显示二者中度相关 (r =0 .6 5 ,P <0 .0 1)。②随着临床分期、病理分级的升高及淋巴结转移 ,端粒酶阳性率、阳性程度及p5 3突变蛋白阳性率均显著增加 (端粒酶活性比较为 :P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 1;p5 3突变蛋白阳性率比较为 :P <0 .0 1,P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。③随着端粒酶活性增高 ,p5 3突变蛋白阳性率、Apo、SPF均显著增加 (P均 <0 .0 1)。④p5 3突变蛋白阳性率与Apo无明显相关性 (r =0 .2 7,P >0 .0 5 ) ,与SPF轻度相关 (r =0 .38,P <0 .0 1)。结论　端粒酶和p5 3突变都可通过调节细胞凋亡与增殖来调控卵巢癌的恶性行为及转移潜能。卵巢癌早期 ,二者都促使细胞增殖失控导致肿瘤发生 ;随着肿瘤进展 ,p5 3调节凋亡与增殖的作用减弱 ,而端粒酶的作用渐强。联合检测可从不同的分子生物学角度评价卵巢癌的恶性行为及转移潜     

p53基因突变与贲门癌的关系及其临床病理意义

目的 研究p53基因突变在贲门癌中的作用及其临床病理意义。方法 银染聚合酶链反应－单链构像多态性分析法（PCR－SSCP）检测贲门癌新鲜冰冻组织中p53基因5－8外显子点突变情况。结果 PCR－SSCP检测p53基因5－8外显子点突变率为52．6％（20／38）,以第8外显子出现突变的频率最高。其中有淋巴结转移者的p53基因突变率（70．6％）较无淋巴结转移者的突变率（38．1％）高（P＜0．05）,除此以外,p53基因突变率与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度及组织类型等均无明显相关性（P＞0．05）。结论 p53基因突变是贲门癌常见的分子事件,并可能是导致贲门癌野生型p53功能丧失的重要遗传改变,p53基因突变与贲门癌淋巴结转移之间有相关性,提示检测p53基因突变对估计该肿瘤的预后可能有所帮助。     

肺癌组织p53V、p16基因表达与DNA倍体的相关性及其临床意义

目的:探讨肺癌组织细胞肿瘤相关基因p53V、p16基因的表达与DNA倍体类型的相关性及其临床意义。方法:采用流式细胞术对63例非小细胞肺癌患者瘤组织p53V 、p16 细胞表达率和DNA含量进行了检测,并分析了p53V、p16基因表达与肿瘤细胞DNA倍体类型、S期细胞比例(SPF)、凋亡指数(AI)及肿瘤是否转移的关系。结果:肺癌组织细胞的p53V 细胞检出率、DNA指数(DI)及SPF均显著高于正常对照组(P<0.01),肿瘤转移者也显著高于未转移者(P<0.01),而AI分别显著低于正常对照组及未转移者(P<0.01);随着DNA倍体从D→ND→T→AN→M,p53V 细胞检出率逐渐增高。肺癌患者瘤组织p16 细胞检出率的变化规律与p53V的变化恰好相反。二者相关性分析显示,p53V 细胞与p16 细胞表达率呈显著负相关(r=-0.712,P<0.05)。结论:肺癌患者瘤组织细胞p53V和p16基因编码蛋白的表达水平与肿瘤细胞生物学特性关系密切,不仅可用于肺癌发生的分子机制研究,而且还可以为肺癌恶性度、转移、预后判断提供可靠的客观依据。     

大肠腺瘤及腺癌细胞凋亡与p53和bcl-2的表达

目的探讨大肠粘膜癌变中细胞增殖和凋亡的特征以及凋亡相关调控基因的表达。方法对60例大肠腺瘤．癌用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测PCNA增殖指数（proliferative index,PI）及bcl-2和p53蛋白的表达。另选大肠高分化腺癌和正常粘膜20例作为对照检测。结果①正常粘膜、腺瘤和腺癌的p53蛋白表达率为5％、33．3％和70％。三组间有显著的差异（P均〈0．05）。②正常粘膜、腺瘤和腺癌的bcl-2蛋白表达率分别为15％、70％和65％．腺瘤和腺癌组均高于正常对照组（P均〈0．01）,腺瘤与腺癌组间差异不显著（P均〉0．05）。③大肠腺瘤和腺癌细胞的凋亡指数（AI）均高于正常粘膜（P均〈0．01）,bcl-2和p53蛋白的表达率与细胞AI呈显著负相关（rs=-0．66,rs=-0．62）。结论凋亡和增殖在肿瘤的发生、发展、转化中起着重要作用,上述指标的联合检测可以作为临床早期判断人肠腺瘤癌变的重要参考指标。     

突变型p53、MDM2、caspase-3在非小细胞肺癌的表达及意义

目的:探讨突变型p53、MDM2、caspase-3在NSCLC中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测117例NSCLC,26例对照组断端支气管黏膜中突变型p53、MDM2的表达水平;流式细胞术检测caspase-3的表达.结果:突变型p53、MDM2在NSCLC中阳性表达高于对照组(P<0.05),与分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);随分化程度降低,分期增高,淋巴结转移表达增强.caspase-3在NSCLC中表达低于对照组(P<0.05),表达与肿瘤的组织类型、分期和淋巴结转移有关(P<0.05),caspase-3鳞癌组表达高于腺癌组,随分期增高,淋巴结转移组caspase-3表达增强.突变型p53表达与MDM2无关(P>0.05);突变型p53与caspase-3有关,阳性表达者caspase-3的FI值低于阴性组(P<0.05);MDM2与caspase-3有关,MDM2阳性组caspase-3表达低于阴性组(P<0.05).结论:NSCLC存在凋亡耐受,多指标共同检测评价肿瘤细胞凋亡能力可为临床化疗提供参考.     

p53基因突变与口腔肿瘤关系的研究进展

野生型p53作为抗肿瘤基因可以通过停止细胞生长和启动细胞凋亡机制而发挥抑癌作用。但是,p53基因突变率高导致其诱导细胞凋亡的功能下降,有利于肿瘤的发生。本文将对p53基因的分子生物学特性、突变、对口腔肿瘤发生及预后的影响予以综述。     

胶质瘤中p53基因突变p16基因缺失细胞增殖和凋亡及与临床病理特征的相关性研究

目的探讨P53基因突变、p16基因缺失、肿瘤细胞增殖活性(PCMNA)和凋亡在胶质瘤发生发展中的作用、相互关系及其与临床病理特征的相关性。方法应用LSAB免疫组化法检测96例不同类型胶质瘤中P53,P16蛋白表达及其肿瘤细胞增殖活性(PCNA);应用非同位素PCR-SSCP技术检测p53基因5-8外显子突变。应用PCR-DNA测序技术检测SSCP阳性标本中p53基因5-8外显子碱基突变谱和氨基酸顺序改变。应用TUNEL技术检测肿瘤细胞中凋亡的改变。结果结果显示96例不同类型胶质瘤中P53蛋白阳性表达率为41.7%(40/96),其中Ⅱ级肿瘤阳性率为27.3%(13/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率分别为62.5%(20/32)、63.6%(7/11),低分级与高分级胶质瘤中P53蛋白阳性表达率有显著性差异(χ2=4.88,P<0.05)。SSCP检测结果显示34/96(35.4%)例胶质瘤出现p53基因异常移动的单链DNA电泳带,主要分布在5,7,8外显子。在40例P53蛋白阳性的病例中有32例呈现该基因的单链构象多态性改变,两种方法检测的符合率基本一致。DNA序列分析显示,17例SSCP有异常电泳带的标本中均存在p53基因突变,而且主要发生在5-8外显子,突变类型多数为点突变或碱基缺失,突变位点多分布在第5外显子130-175号密码子之间,第8外显子270-291密码子之间,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p16蛋白的表达缺失率为60.4%(58/96),其中Ⅱ级肿瘤为39.6%(21/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤为81.2%(26/32)、100%(11/11),在高级别胶质瘤中P16表达缺失率均显著高于低级别的肿瘤。复合表达研究显示,p53蛋白的表达与p16缺失之间存在负相关性(P<0.05)。96例胶质瘤细胞增殖活性及凋亡检测显示,PCNA标记指数(PCNALabelIndex,PCNALI)随着肿瘤分级的升高而递增,而凋亡指数(Apoptosis Index,AI)随着肿瘤分级的升高而递减,PCNALI/AI之比随着肿瘤分级的升高而递增。结论p53异常表达和突变是胶质瘤中最常见的基因改变,与胶质瘤的组织学分级呈显著正相关;p53突变更常位于5、7、8外显子,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p53基因突变可以通过p53蛋白的表达来间接反映,p53基因的异常表达及突变与胶质瘤的发生和进展密切相关。p16的缺失更多见于高级别的胶质瘤,与胶质瘤的发生和进展密切相关。胶质瘤发生、发展与PCNA的高表达和细胞凋亡的抑制密切相关,PCNALI/AI比PCNALI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。p53基因突变、p16基因表达的缺失及PCNALI的增高和细胞凋亡的抑制在胶质瘤发生、发展中可能起着重要协同作用并与肿瘤的分化和异常增生显著相关,而胶质瘤细胞凋亡的发生受p53、p16基因的调控,p53及p16抑癌基因的失活,是胶质瘤逃逸凋亡的重要原因之一。     

大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性研究

目的研究大肠癌细胞对化疗药物的敏感性与p53基因突变的相关性.方法用MTT比色法检测20位大肠癌患者的癌细胞对化疗药物的敏感性,并用PCR-SSCP技术分析其癌细胞的p53基因突变.结果大肠癌细胞对5-Fu[IR=(54.7±14.1)%]比对MMC[IR=(43.9±10.8)%]及ADM[IR=(43.9±9.4)%]更敏感(P＜0.05),但对DDP有耐药性[IR=(25.9±12.8)%,P＜0.01].p53基因的突变率为45%(9/20).癌细胞对MMC和ADM的敏感性与p53基因突变呈正相关(rmmc=0.589,rabm=0.624,P＜0.005).结论化疗药物MMC和ADM对大肠癌的作用依赖于p53基因的状态,而大肠癌对5-Fu和DDP的敏感性却与p53基因突变无关.     

食管癌及癌前病变组织中癌基因的表达

目的：研究ｐ５３基因点突变在食管癌及癌前病变粘膜细胞癌变过程中的变异作用臁定量分析。对病人预后的关系。方法：选取手术新鲜标本及蜡块９０例,ＤＮＡ提取分析。应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＤＮＡ序列分析,免疫组化ＡＢＣ法,利用ＭＰＶ－２型显微分光光度计检测分析。结果ｐ５３基因在食管癌、不典型增生组织中点突变频率较高,分别为６０％、２９．４％,错义突变和移码突变占全部突变的７３％、ｐ５３表达强度与生存期有相关性     

Relationship of p53 gene mutation with pathological characteristics and prognosis of thyroid carcinoma]

This study was directed to the role of p53 gene in the carcinogenesis of thyroid carcinomas and to the correlation between p53 gene and the clinicopathological characteristics of the cancer. Single-stranded conformation polymorphism of PCR was used in detecting p53 gene point mutations in exons 7, 8. The result showed that ten of thirty-one thyroid carcinomas had mutations in exons 7 and 8 (32.3%). The frequency of p53 gene mutations was significantly higher in relapse group than in no relapse group (P < 0.01). No statistically significant differences in p53 mutation were found relating to metastasis, histological type and differentiation (P > 0.05). These data suggest that the mutation of p53 gene may play an important role in thyroid carcinoma and the mutations of p53 gene be associated with the prognosis of thyroid carcinoma.     

胃癌和胃癌前病变bcl-2基因表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的探讨胃癌前病变及胃癌中bcl-2基因表达状况及其与细胞凋亡的关系.方法应用原位杂交和免疫组织化学技术检测10例正常胃粘膜、72例慢性萎缩性胃炎和53例胃癌中bcl-2基因的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较.结果bcl-2基因在正常胃粘膜及不同胃粘膜病变中均有不同程度的表达.bcl-2 mRNA在胃癌组织中的表达率为77.36%,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生(20.00%,25.00%,44.44%,P＜0.01);异型增生组织bcl-2 nRNA表达率为75.00%,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎(P＜0.05).胃癌组织bcl-2蛋白表达率为81.13%,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生(20.00%,31.25%,52.78%,P＜0.01),异型增生组织bcl-2蛋白表达率为75.00%,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎(P＜0.01).x2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.凋亡细胞原位检测结果显示,bcl-2蛋白表达阳性肠化生和胃癌组织中的凋亡细胞指数显著低于bcl-2蛋白阴性组(P＜0.05及P＜0.01),bcl-2蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈负相关.结论bcl-2基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有抑制性调控作用,细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用.     

p53基因突变与人食管癌转移的关系研究

目的：探讨ｐ５３基因突变与人食管癌淋巴结转移的关系。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术,对４７例食管瘤组织中ｐ５３ 基因第５～８外显子进行了突变分析。结果：４７例食管癌标本中,ｐ５３基因第５～８外显子出现突变者２０例,其突变率为４２．６％;其中２２例伴有淋巴结转移的原发癌中１３例出现了突变（５９．１％）,其与无淋巴结转移组（２８．０％,７／２５）相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ｐ５３基因突变与人食管癌的转移可能关系密切。     

结直肠腺瘤，单原发及多原发结直肠癌中P53及K-ras基因的突变分析

【摘要】 目的 探讨结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中P53及K-ras基因的突变。 方法 收集25例正常结直肠组织、38例结直肠腺瘤、78例单原发结直肠癌、19例(同时性多原发癌7例,异时性多原发癌12例)多原发结直肠癌组织标本及患者临床病理资料,提取标本组织中基因组DNA, 直接测序方法进行P53基因外显子5、6、7、8及K-ras基因密码子12、13序列分析,并对结直肠腺瘤及单原发结直肠癌的临床资料与其P53及K-ras基因突变进行多因素相关性分析。 结果 正常结直肠组织、结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中P53基因的突变概率分别是0%(0/25)、44.8%（17/38）、43.6%（34/78）、42.1%（8/19）,K-ras基因的突变概率分别为0%（0/25）、18.4%（7/38）、39.7%（31/78）、47.4%（9/19）,正常结直肠组织中P53和K-ras基因突变概率与结直肠腺瘤、单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中突变概率相比,差异均有统计学意义(P<0.05）,结直肠腺瘤中K-ras基因突变概率与单原发结直肠癌、多原发结直肠癌中突变概率相比,差异均有统计学意义(P<0.05）,结直肠腺瘤中P53基因突变概率高于K-ras基因(P<0.05）。P53及K-ras基因在单原发结直肠癌的Ⅰ、Ⅱ期及高分化类型中的突变概率与其在Ⅲ、Ⅳ期及中低分化类型中差异无统计学意义。患者的年龄、性别、家族史、肿瘤位置与结直肠腺瘤及单原发结直肠癌中P53及K-ras基因突变无相关性,肿瘤分期及肿瘤的分化程度亦不是单原发结直肠癌中P53及K-ras基因发生突变的危险因素。 结论 本研究再次证实在结直肠肿瘤的发生和发展过程中,P53及K-ras基因的突变起着重要的作用,并且在结直肠的肿瘤发生发展过程中P53基因的突变可能早于K-ras基因。     

大肠癌患者外周血CK20表达及p53基因突变的研究

目的建立高效,快速的外周血Cytokeratin20(CK20)表达的检测方法,探讨大肠癌患者外周血中CK20的表达与微转移的关系,研究大肠癌与P53基因突变的关系.方法,运用荧光监测技术结合RT-PCR,检测36例大肠癌患者术前后不同时间外周血中的CK20的表达,用SSCP技术对大肠癌患者进行P53基因突变检测.结果36例患者术前的外周血中检出CK20表达的有27例,阳性率为75%手术后24h患者外周血中检出CK20表达的有30例,阳性率为83.3%,术后早期化疗结束后仅13例为阳性,阳性率为36%.36表达可以监测癌症微转移的发生,简便快速,检出率高.     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

大肠癌组织P21~(WAF1/CIP1)的表达与p53基因突变的关系

目的 :探讨大肠癌组织P2 1WAF1/CIP1的表达与p5 3基因突变的关系及其意义。方法 :应用RT -PCR、RCR -SSCP方法对 42例新鲜大肠癌组织中上述两种基因的表达进行研究。结果 :p5 3基因在大肠癌组织中的突变率为47.6 % (2 0 / 42 ) ,且在中、低分化大肠癌组织中的突变北显著高于高分化者 (P <0 .0 5 ) ;P2 1WAF1/CIP1在中、低分化大肠癌组织中的表达显著低于高分化癌组织 (P <0 .0 1)。 2 0例p5 3基因突变组中 ,P2 1WAF1/CIP1表达阳性率明显低于 2 2例p5 3基因未突变组 (P <0 .0 5 )。结论 :大肠癌组织中P2 1WAF1/CIP1的低表达可能与p5 3基因突变有关。