p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠早期胚胎及围植入期子宫内膜的表达

目的检测p38MAPK在小鼠不同发育阶段胚胎和围植入期子宫内膜的表达。方法取小鼠早期胚胎、动情期未孕、真孕及假孕1～8d小鼠子宫，利用免疫组织化学染色及图像分析法，检测p38MAPK在不同发育阶段早胚及围植入期子宫内膜中的表达和变化规律。结果① p38MAPK在小鼠胚植入前各细胞期均呈阳性表达,随着妊娠进展,其表达逐渐加强;② 真孕组孕3d,小鼠子宫内膜腔上皮p38MAPK呈阳性表达,孕4d呈强阳性表达，此后腔上皮表达逐渐减弱；腺上皮p38MAPK的表达一直维持在阳性水平，而蜕膜细胞的表达从孕5d开始逐渐增强。假孕组只有孕4?d呈弱阳性表达。结论① p38MAPK可能参与了小鼠植入前胚的发育分化。② p38MAPK参与胚泡植入过程，并可能参与子宫内膜的蜕膜化反应。③ p38MAPK 在子宫内膜中的表达不仅受母体因素调控，还与胚泡的刺激有关。     

STAT3与胚泡植入关系的实验研究

目的观察信号转导和转录激活因子3（STAT3）在早孕小鼠子宫内膜中的表达,探讨STAT3与胚泡植入的关系。方法取未孕动情期及孕1～8d的小鼠子宫做切片,采用免疫组织化学SP法和图像处理系统,对STAT3在早孕小鼠子宫内膜的表达位置和强度进行检测。结果①STAT3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和蜕膜细胞。②妊娠小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮中STAT3的表达随妊娠进行逐渐增强,孕4d呈强阳性表达,此后表达逐渐减弱;而蜕膜细胞的表达从孕5d开始逐渐增强。③未孕组小鼠子宫内膜中STAT3弱表达。结论①STAT3参与胚泡植入过程和子宫内膜容受性的建立。②STAT3还可能参与了植入后胚泡滋养层的扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应。     

STAT3与胚泡植入关系的实验研究

目的观察信号转导和转录激活因子3（STAT3）在早孕小鼠子宫内膜中的表达,探讨STAT3与胚泡植入的关系。方法取未孕动情期及孕1～8d的小鼠子宫做切片,采用免疫组织化学SP法和图像处理系统,对STAT3在早孕小鼠子宫内膜的表达位置和强度进行检测。结果①STAT3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和蜕膜细胞。②妊娠小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮中STAT3的表达随妊娠进行逐渐增强,孕4d呈强阳性表达,此后表达逐渐减弱;而蜕膜细胞的表达从孕5d开始逐渐增强。③未孕组小鼠子宫内膜中STAT3弱表达。结论①STAT3参与胚泡植入过程和子宫内膜容受性的建立。②STAT3还可能参与了植入后胚泡滋养层的扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应。     

p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂对小鼠早胚发育及植入的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对小鼠早胚发育及植入的影响。方法①采用体外胚胎培养技术,将孕2?d小鼠早胚随机分组,接种到添加不同浓度抑制剂的培养液内进行培养,以观察p38MAPK特异性抑制剂对早胚发育的影响;②体内宫腔注射：取孕4?d小鼠,由子宫角注射不同浓度的SB203580,于孕8?d检查胚胎植入数,同时取子宫,观察内膜的组织学变化。结果①添加抑制剂组的早胚不能发育为胚泡,停滞在8～16细胞阶段。但去除抑制剂后继续培养,幼胚仍能发育到胚泡阶段;②注射SB203580组的小鼠,胚胎植入数明显少于对照组（P＜0.01）。镜下可见,其胚胎组织呈退化坏死状态,胚胎周围蜕膜细胞呈明显的空泡样变性,蜕膜及胚胎中均见大量血细胞浸润。结论①p38MAPK在小鼠植入前胚胎发育过程中起作用;②p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制在体小鼠胚泡植入及植入后胚胎和蜕膜细胞的发育。     

降钙素在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨降钙素在胚泡植入过程中的生物学作用。方法:取未孕动情期、真孕及假孕3～8d的小鼠子宫作切片,用免疫组织化学方法和图像分析方法对降钙素在围植入期子宫内膜中的表达进行定性和定量分析。结果:降钙素仅分布于子宫内膜腺上皮。在真孕及假孕组小鼠,受精后第3～4d(植入前),子宫内膜腺上皮中降钙素的含量均明显高于未孕组(P<0.01);受精后第6～7d(植入后),真孕小鼠子宫内膜中降钙素的含量进一步增多,明显高于假孕及植入前各时间组(P<0.01)。结论:①降钙素参与胚泡植入过程,还可能间接参与植入后胚泡的滋养层扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应;②降钙素在子宫内膜中的表达不仅受母体因素调控,还与胚泡的刺激有关。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的 检测胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布及其生物学作用.方法取未孕动情期、真孕及假孕3～6 d小鼠子宫做切片,采用免疫组化SP法检测IGFBP-4在小鼠子宫内膜的表达情况.结果 IGFBP-4在小鼠子宫内膜主要分布于腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞及蜕膜细胞.IGFBP-4在真孕组小鼠子宫内膜于孕3 d出现阳性表达;孕4～5 d中等强度表达;孕6 d表达最强,主要分布于整个蜕膜区细胞.未孕动情期小鼠子宫内膜IGFBP-4呈弱表达.假孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4只在孕5～6 d有微弱表达.真孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4表达明显强于同期假孕组.结论 IGFBP-4在围植入期小鼠子宫内膜持续表达,提示IGFBP-4可能在小鼠胚泡植入过程发挥重要生物学作用.     

植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达及超微结构特点

目的观察植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达分布状况及超微结构。方法用免疫化SP法检测妊娠1~4d小鼠子宫内膜整合素α4的表达;用透射电镜观察植入前小鼠子宫内膜的超微结构。结果整合素α4主要表达于子宫内膜腔上皮及腺上皮,表达强弱不等,于妊娠第4天表达最强。透射电镜观察妊娠第4天子宫内膜腔上皮和腺上皮内线粒体、粗面内质网、分泌颗粒等丰富,内膜间质水肿,基质细胞肥大变圆,胞质内富含糖原、脂滴。结论妊娠1~4d小鼠子宫内膜持续表达整合素α4;妊娠第4天子宫内膜腔上皮、腺上皮和基质细胞处于植入前分泌功能旺盛阶段。提示整合素α4可能参与小鼠胚泡植入过程,其表达强弱与植入前子宫内膜的发育同步化。     

GRB7基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：研究生长因子结合受体7（growth factor receptor bound 7,GRB7）在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法：分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜GRB7基因及蛋白的表达;孕3 d下午8点子宫角注射GRB7反义寡核苷酸,孕7 d观察胚泡着床数较正常组有无变化。结果：实时荧光定量PCR测得未妊娠（d0）和妊娠早期（d1～7）小鼠子宫内膜组织均有GRB7 mRNA表达,并在孕5 d达到峰值;免疫组化及Western blot分析显示GRB7蛋白在子宫内膜的表达规律与实时荧光定量PCR基本一致,孕1 d到孕4 d,GRB7蛋白主要表达部位为腔上皮、腺上皮,基质细胞少量表达,孕5 d、孕6 d,GRB7蛋白表达较之前增强,并且在基质细胞开始明显表达,孕5 d最强;孕6 d着床点GRB7蛋白高表达于初级蜕膜区,着床旁GRB7蛋白高表达于基质细胞;子宫角注射GRB7反义寡核苷酸后胚泡着床数较正常组明显减少。结论：GRB7在早孕小鼠子宫内膜中呈动态表达,提示它参与了胚胎着床的发育过程。     

凝集素WGA和DBA的受体在孕第6、9天小鼠子宫内膜中的研究

目的探讨凝集素WGA和DBA的受体在胚泡植入过程中的生物学作用。方法采用亲合细胞化学和图像分析方法，检测真孕组、单纯假孕组和蜕膜化假孕组小鼠孕6d、9d子宫内膜中两种凝集素受体的分布状况和变化规律。结果WGA受体广泛分布于子宫内膜腔上皮和腺上皮的游离缘以及内膜基质，DBA受体仅见于子宫内膜血管的内皮及其基膜。并且两种凝集素受体在真孕组和蜕膜化假孕组的水平均显著高于单纯假孕组。结论胚泡植入过程中．WGA受体和DBA受体的变化受母体与胚泡信号的共同调节。     

超排卵对着床的影响及中药帮得孕的改善作用

目的:观察超排卵对小鼠着床的影响和中药帮得孕的改善作用。方法:仿照临床超排卵方案,运用腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU,于48h后注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU的方法造模。观察妊娠第8天正常组、超排卵组、不同剂量帮得孕组小鼠胚泡着床率和平均胚泡着床点数。伊文思蓝染色观察妊娠第5天子宫内膜血管通透性情况,HE染色观察妊娠第5天子宫内膜蜕膜化情况,免疫组化和Western blot方法观察妊娠第5天子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:与正常组相比,超排卵组着床率明显下降(P<0.05),与超排卵组相比,帮得孕各剂量组着床率均明显提高(P<0.05);超排卵抑制小鼠子宫内膜血管渗透性,延缓子宫内膜蜕膜化,抑制子宫内膜MMP-9表达,中药帮得孕则有利于促进子宫内膜血管渗透性、促进内膜蜕膜化、促进MMP-9表达。结论:超排卵可致着床障碍,与超排卵药物抑制血管渗透性、抑制子宫内膜蜕膜化和抑制内膜基质降解有关,帮得孕可以一定程度上降低和抵消超排卵这种不良的影响,有利于胚泡成功着床。     

子宫内膜巨噬细胞通过调控血管内皮生长因子A的表达影响胚胎着床

目的研究小鼠子宫内膜巨噬细胞（macrophages, Mφ）对血管内皮生长因子A（VEGFA）表达的影响,探讨其在胚胎着床过 程中的作用。方法取第3.5（雌鼠交配后次日晨阴道见栓为第0.5）孕鼠30只,随机分为3组,实验组（E）、对照组（C）和空白组 （B）。E组向左侧宫腔内注射消除巨噬细胞的药物：氯膦酸二钠脂质体（clodronate liposomes, CL）,右侧注射磷酸缓冲盐脂质体 （PBS liposomes, PL）;C组向双侧宫腔内注射PL;B组向双侧宫腔内注射等体积灭菌PBS溶液。注射后48 h,获取第5.5小鼠子 宫和卵巢,统计各单侧子宫的胚胎着床数。采用免疫组化技术检测子宫内膜、卵巢内Mφ数量,并观察着床位点和非着床位点 VEGFA的表达变化。流式细胞学方法检测子宫F4/80+CD11b+Mφ相对百分比,观察注射CL对子宫Mφ的选择性抑制作用。结 果流式细胞学和免疫组织化学方法均显示,E组左侧子宫注射氯膦酸二钠脂质体后,与E组右侧和C、B组比较,局部巨噬细胞 被显著抑制（P<0.05）,抑制率达74%。各组卵巢Mφ数量间则未见明显差异。E组左侧子宫的胚胎着床部位宫腔未闭合,平均 胚胎着床数为2.20±1.81个,显著低于E组右侧5.10±1.91个（P<0.05）。在着床位点,伴随子宫Mφ受到抑制,子宫内膜的VEGFA 蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论子宫内膜中的Mφ为胚胎着床所必需,其机制可能是通过调控VEGFA的表达,影响宫内膜 容受性及胚胎着床。     

地屈孕酮对多囊卵巢综合征促排妊娠大鼠早期妊娠结局的影响

目的：观察地屈孕酮对多囊卵巢综合征（PCOS）、经枸橼酸氯米芬（CC）促排卵妊娠大鼠早期妊娠结局及种植窗期子宫内膜同源框基因A10（HOXA10）、EMX2及整合素ανβ3的影响。方法：20只正常雌鼠自80日龄起予生理盐水灌胃后与雄鼠合笼,将妊娠大鼠作为正常妊娠组（A组）。70只雌鼠予以脱氢表雄酮制作PCOS模型,自大鼠80日龄起予CC灌胃后与雄鼠合笼,选取其中24只妊娠大鼠随机分为PCOS妊娠组（B组）、PCOS妊娠＋地屈孕酮组（C组）。于妊娠第5天各组随机选取6只大鼠断头处死,留取子宫和子宫内膜标本,以半定量RT-PCR、Western blot检测各组大鼠子宫内膜HOXA10、EMX2及整合素ανβ3的表达;妊娠第8天将剩余大鼠断头处死,留取双侧子宫计算胚泡数量。结果：大鼠胚泡的着床率A组〉C组〉B组;3组平均胚泡着床数比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。子宫内膜HOXA10、整合素ανβ3的mRNA及蛋白表达A、C组明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0.001）;而EMX2的mRNA及蛋白表达A组明显低于B、C组,差异有统计学意义（P〈0.01）,B、C组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：PCOS大鼠经促排卵治疗后种植窗期子宫内膜HOXA10、整合素ανβ3的表达下调,EMX2的表达上调,可能是早期流产的原因之一;而地屈孕酮可能通过上调子宫内膜容受因子HOXA10、整合素ανβ3的表达减少早期妊娠丢失。     

健胎液对模型小鼠着床期子宫内膜容受性的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫内膜容受性的影响。方法:于妊娠第4天9∶00利用米非司酮建立胚泡着床障碍小鼠模型,予健胎液进行干预,于妊娠第4天21∶00处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,采用放免法检测血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测子宫ERmRNA、PRmRNA表达。结果:与模型组相比,中药组着床率和平均着床胚胎数均显著升高,与对照组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;3组血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量无显著改变;中药组子宫ER mRNA、PR mRNA表达均较模型组显著提高,与正常组比较差异无显著性。结论:健胎液通过促进子宫内膜发育,调节胚泡着床障碍小鼠子宫组织ER、PR基因的表达,改善子宫内膜容受性,利于胚泡着床。     

脱氢表雄酮对卵巢储备功能减退患者IVF结局及卵泡液GDF-9、BMP-15的影响

目的 探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve, DOR)患者的卵巢功能、卵泡液中生长分化因子-9(growth differentiation factor-9, GDF-9)、骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein-15, BMP-15)浓度及体外受精/卵胞质内单精子显微注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer, IVF/ICSI-ET)结局的影响。方法 采用历史性队列研究,共纳入163例行IVF/ICSI-ET助孕的DOR患者,根据预处理方案分为DHEA组和对照组。比较两组患者基础内分泌水平、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)、窦卵泡数(antral follicle counts, AFC)、促性腺激素(gonadotropin, Gn)总量、Gn使用天数、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)日激素浓度和子宫内膜厚度、获卵数、成熟卵数、受精率、优胚率、胚胎种植率及临床妊娠率。比较两组患者卵泡液GDF-9、BMP-15浓度,并将其与卵巢储备功能指标进行相关性分析。结果 DHEA预处理前两组基础内分泌、AMH、AFC差异均无统计学意义(P>0.05),预处理后,DHEA组基础卵泡刺激素(basal follicle stimulating hormone, bFSH)降低、AFC增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Gn总量、Gn天数、hCG日激素浓度、hCG日子宫内膜厚度、获卵数、成熟卵数、受精率、优胚率、胚胎种植率、临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。DHEA组卵泡液中BMP-15浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),GDF-9差异无统计学意义(P>0.05)。双侧Pearson相关系数分析显示卵泡液BMP-15表达与基础雌二醇(estradiol,E₂)呈正相关。结论 DHEA可通过增加AFC和下调FSH改善DOR患者的卵巢储备功能并提高卵泡液BMP-15的浓度。     

坤泰胶囊对小鼠子宫内膜容受性影响的研究

目的：通过比较溶血磷脂酸受体‐3（LPAR3）在小鼠胚胎着床期子宫内膜的表达,了解坤泰胶囊对小鼠子宫内膜容受性的影响。方法将90只6～8周龄的昆明雌鼠分为3组[A组：控制性超促排卵（CO H ）;B组：坤泰＋CO H ;C组：生理盐水对照）,每组30只],检查合笼次日晨阴栓,于第1～6天每天每组处死5只雌鼠,测定血清中雌二醇（E2）、孕酮（P ）水平,以及腺体数和LPAR3免疫组化光密度值（IOD）。结果 A、B组血清E2、P水平值均高于同期C组（P＜0．05）;HE染色,A组较B、C组腺体数明显减少（P＜0．05）。A组第3天 LPAR3的IOD值高于B、C组（P＜0．05）,而 A组第4天IOD值明显小于B、C组（P＜0．05）,B组较C组略高,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论坤泰胶囊可能通过改善COH小鼠LPAR3正常时空表达,起到改善子宫内膜容受性的作用。     

抗骨桥蛋白(OPN)和整合素β3抗体中和OPN、整合素β3对小鼠胚泡种植的影响

目的研究骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体对小鼠胚泡着床的影响。方法取20只孕4d小鼠,分别在两侧子宫角内注射骨桥蛋白抗体、整合素β3抗体,对照组注射生理盐水,正常妊娠空白对照组未行任何处理,于孕8d处死小鼠,统计胚泡着床数及妊娠率,取子宫观察内膜的组织学变化。结果结果显示骨桥蛋白抗体组小鼠妊娠率为60%,平均胚胎着床数为1.6±1.19,整合素β3抗体组妊娠率为70%,平均胚胎着床数为1.7±1.28,明显低于生理盐水组及空白对照组(90%,10.0±1.63及100%,10.5±1.58),提示骨桥蛋白抗体和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡着床。结论骨桥蛋白和整合素β3抗体明显抑制小鼠胚泡的着床并导致子宫内膜的形态学变化,这提示骨桥蛋白和整合素β3与子宫内膜容受性获得有关。骨桥蛋白和整合素β3参与了小鼠胚泡的着床。     

胰岛素抵抗协同性激素刺激大鼠子宫平滑肌生长研究

目的:探讨胰岛素抵抗协同性激素刺激大鼠子宫平滑肌生长的作用,揭示胰岛素抵抗与子宫肌瘤形成间可能存在的关系。方法:将雌性、未孕、体重相似的Waster大鼠45只,随机分为3组:A组为对照组,B组为性激素刺激组,C组为性激素刺激+高糖高脂饲料饲养组,3组均饲养8周后测量体重、子宫重量,计算子宫脏器系数;测定空腹血糖、空腹血清胰岛素、血清雌二醇和孕酮水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数。子宫标本测量肌壁厚度,检测子宫平滑肌雌激素受体、孕激素受体和增殖细胞核抗原的表达。结果:B组HOMA-IR小于C组(P<0.05);B组E2小于C组(P<0.05);B组子宫脏器系数和子宫肌层厚度均小于C组(P<0.05),C组的ER、PR、PCNA表达均高于B组(P<0.05)。结论:胰岛素抵抗对性激素刺激大鼠子宫平滑肌生长具有促进作用,提示胰岛素抵抗有可能在子宫肌瘤的发生中具有作用。     

定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨定坤丹联合戊酸雌二醇对肾阳虚薄型子宫内膜大鼠Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法 选取处于动情期的雌性SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、定坤丹组、戊酸雌二醇组、联合用药组,每组8只.除空白组外,其余各组大鼠建立肾阳虚薄型子宫内膜模型.空白组自由饮食,模型组给予蒸馏水灌胃,定坤丹...