用分型方法检测溯源副溶血性弧菌

目的用分型的方法分析副溶血性弧菌的流行优势型,溯源其亲缘关系,为追踪感染源提供依据。方法用诊断血清进行血清学分型,用PFGE和ERIC进行基因分型。结果607株分离于海产品的VP分出10个血清群,有30株不能分型,分型率为94．64％,0：6群和0：5群为流行优势株;480株病人VP分为6个血清群,0：3群为流行优势株。377株分离于海产品的VP分成29个 PFGE型;480株病人VP分成12个 PFGE 型。261株不同来源的VP分出42个ERIC基因型。结论3种方法均能用于VP的分型,但各有特点。由于基因分型方法敏感性高、特异性强、分型率和分辨率佳的优点,将逐渐取代传统的表型分型技术。     

宁波地区副溶血弧菌分型与毒力分析

目的:了解宁波地区不同来源副溶血性弧菌的毒力及血清型、基因型,为追溯病原和防控副溶血性弧菌提供依据。方法:海产品菌株分离采用PCR+GB筛检方法,病人采用全国临床检验操作规程方法;用诊断血清进行血清学分型,用PFGE进行基因分型;用PCR检测tdh和trh毒力基因。结果:海产品流行优势血清群为O6群和O5群,病人株为O3群;海产品株PFGE分型与病人株相比较为分散;88.04%的病人株带毒力基因,海产品株带毒力基因仅有1.11%。结论:海产品株和病人株在流行优势株上存在明显差别,提示血清型分型和PFGE分型能发现菌株间的亲缘关系,可用于病原的追踪与溯源;病人株带毒率明显高于海产品株(P<0.01),认为海产品株致病性不强,建议将VP分为致病的和非致病两类,有利于鉴别和防控措施的改进。     

甬沪两地海产品中副溶血性弧菌携带与分型

目的:了解宁波和上海两地市售海产品中副溶血性弧菌污染情况以及菌株的流行优势型和毒力等.方法:用PCR快速筛检与GB法相结合方法分离海产品中副溶血性弧菌;用血清学和PFGE方法对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;结果:从3 740份海产品中分离出1 507株疑似副溶血性弧菌,检出率为40.29％,其中宁波地区检出率为41.42％,上海地区检出率为21.86％;菌株的生化反应典型,560株副溶血性弧菌分出10个血清群,有30株VP未被分型,分型率为95.06％,377株副溶血性弧菌分出29个PFGE型;497株副溶血性弧菌检出7株带tdh毒力基因的副溶血性弧菌,均未检出trh毒力基因,检出率为1.41％.结论:宁波、上海海产品中副溶血性弧菌携带率较高,是诱发副溶血性弧菌疾病的原因食品.菌株的血清型和PFGE型较分散,其流行优势群与致病性副溶血性弧菌的相关性不明显;菌株带tdh和trh毒力基因较低,与病人分离株有明显差别,根据该特征,可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类,便于分析和检测.     

宁波地区副溶血性弧菌耐药性与分型

目的:了解VP的耐药性,发现流行优势型,为追溯病原和治疗提供依据。方法:VP分离海产品采用筛检方法,病人采用GB方法;用诊断血清进行血清分型,用PFGF进行基因分型;用K-B法进行耐药性测定。结果:1040株VP分为10个血清型,分型率为94.64%,海产品VP的流行优势型为0:6群和0:5群,病人VP为0:3群;VP对氨苄西林耐药率较高,达92.64%,未检出多重耐药菌;按PFGE带型变化病人VP分为12型,海产品VP为29型,1型为流行优势型。结论:宁波地区海产品VP的血清型和PFGE型较分散,病人VP则反之,流行优势株上两者有明显差别,提示我们可用血清和PFGE分型,对其追踪与溯源;VP对青霉素类耐药性较高,是否与养殖广泛使用有关需进一步探讨。     

宁波地区海产品中副溶血性弧菌分布与研究

目的了解宁波地区海产品中副溶血性弧菌的分布,菌株血清型、PFGE型别及产毒基因等特征,为防控副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据。方法用PCR筛检与GB法相结合方法分离细菌;用标准血清和PFGE对菌株进行分群和基因分型;用PCR方法检测tdh和trh毒力基因;用K-B法进行耐药性测定。结果从3 525份海产品中检出1460株副溶血性弧菌,检出率为41.42%;象山、宁海检出率分别为73.72%和70.69%,与其他县(市)区差异有统计学意义(χ2=42.694,P<0.01);560株副溶血性弧菌分出10个血清群,0∶6群和0∶5群为流行优势血清群;菌株对氨苄西林耐药率达92.64%,但对常用抗生素均敏感;450株副溶血性弧菌检出5株带tdh的,阳性率为1.11%,未检出trh毒力基因。依据PGFE带型差异将330株副溶血性弧菌分为29个型。结论在海产品中副溶血性弧菌带菌率较高,是引发疾病的高危食品;菌株的流行优势群型较分散;可用常用抗生素治疗;菌株带tdh和trh毒力基因较低,根据该特征可将副溶血性弧菌分为致病的和非致病两类。     

三亚地区副溶血性弧菌血清分型、毒力基因及药敏分析

目的 了解三亚地区副溶血性弧菌食物中毒分离株和海产品分离株的血清分型、毒力基因及药敏情况。 方法 依照 GB47897-2008方法进行血清分型、采用荧光定量PCR法检测毒力基因、K-B琼脂纸片扩散法进行药敏实验。 结果 100菌株分属10个群14个血清型,以O4群为主,占32%,其次O2群(19%)。40株中毒患者分离株以O4 群(62.5%)为主,主要血清型是O4:K8;60株海产品分离株以 O2群(31.7%)为主。100株VP均携带tlh,未携带trh。40株食物中毒患者分离株中,38株携带tdh,携带率为95.0%,海产品VP株均未携带tdh。均对青霉素G、苯唑西林、氨苄青霉素耐药。 结论 三亚地区食物中毒的主要优势血清型为O4:K8,病人和海产品的分离株携带毒力基因不一致;药敏试验均对喹诺酮类和大部份氨基糖苷类抗生素高度敏感。     

宁波地区致泻性病原菌检测与主要流行株的分子分型研究

目的了解宁波地区致泻性病原菌组成和主要流行株的基因分型,探讨菌株的同源性,为追踪传染源提供依据。方法病原菌检测采用直接与增菌分离相结合的方法;细菌鉴定采用生化筛检和API等法;细菌分型采用诊断血清和PFGE分型。结果本组9 256份样本检出8类16种3 473株致泻性病原菌,检出率为37.52%,以副溶血性弧菌最高,与其他病原菌比差异有统计学意义(P<0.05);血清分型发现副溶血性弧菌的O3群、沙门菌的甲型副伤寒、志贺菌的褔氏志贺菌、致病性大肠埃希菌O119为各病原菌的优势菌;PFGE分型副溶血性弧菌分出19个,伤寒沙门菌分出3个,甲型副伤寒沙门菌分出12个。结论副溶血性弧菌是引起宁波地区感染性腹泻最主要的流行株,PFGE分型能显示菌株间的亲缘关系,PFGE分子分型可分析菌株的来源,为流行病学追踪传染源提供依据。     

2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究

目的 了解四川地区2009年副溶血弧菌食物中毒疫情分离株和监测食品样品分离菌株菌型分布、致病力及分子分型特征,为四川地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用血清玻片凝集试验对2009年从食物中毒疫情和常规监测食品中分离的副溶血孤菌菌株进行血清分型、应用PCR方法进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测、小鼠腹腔注射进行致病力实验和进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析等.结果 40株菌分属于5个血清群,疫情分离株分属于O3和O4群,监测分离株主要为O1群占43.75％ (7/16),其中2起疫情分离到多个血清型的菌株;所有菌株trh基因均为阴性,其中20株携带tdh毒力基因,携带tdh毒力基因和不携带tdh、tlh毒力基因的菌株均有致病力.40株菌通过PFGE分型,共得到29个带型,同一疫情分离株具有多个PFGE型别..结论 四川省食品分离株和暴发疫情无太多联系,食品分离株血清型和PFGE型别呈多样性.对于从同一起暴发疫情中检出的不同血清型和不同PFGE型别的副溶血性弧菌需要确认各菌株与暴发的关系.     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

副溶血性弧菌海产品及临床分离株毒力基因及多位点序列分型分析

目的了解宁波地区海产品和临床分离的副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)血清型、毒力基因和多位点序列分型分布情况。方法选取2016年从海产品中和临床腹泻患者粪便标本中分离的副溶血性弧菌各30株,进行血清分型,利用PCR技术检测毒力基因tdh、trh,对所有60株菌株进行多位点序列分型(MLST)分析。结果 30株海产品来源的VP血清型较多样,共分得15种血清型,4株未分型成功,O3血清群最多有12株。临床来源的VP共分得8种血清型,O3∶K6最多,有19株,1株未分型成功。30株海产品来源的VP毒力基因tdh和trh全部阴性,临床来源的VP毒力基因29株tdh阳性,tdh携带率为96.7%,1株trh阳性。对60株副溶血性弧菌进行MLST检测,海产品来源的VP共分得11种ST型,分布较分散,5株未分型成功。临床来源的VP共分得6种ST型,其中ST3有20株,占66.7%。结论宁波地区海产品及临床来源副溶血性弧菌血清型分型具有多样性,MLST优势型别分布较散,具有遗传多样性。     

广东省2009年副溶血弧菌暴发与散发菌株的病原学特征分析

目的 了解2009年广东省副溶血弧菌食物中毒分离株和腹泻患者监测分离株的血清分型、毒力基因携带情况及分子特征.方法 对95株副溶血弧菌食物中毒分离株和15株腹泻患者分离株进行血清分型,耐热直接溶血素相关基因(trh)和耐热直接溶血素基因(tdh)PCR检测以及选取不同血清型副溶血弧菌81株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.结果 从监测腹泻患者分离的15株副溶血弧菌,血清型以O3:K6(46.67％)和O4:K8(33.33％)为主;从11起副溶血弧菌食物中毒分离的95株菌,血清型以O3:K6(44.21％)和O4:K8(28.42％)居多;7株食品分离株都不是O3:K6血清型;93株(84.54％)为tdh+ trh-菌株,13株(11.81％)为tdh-trh菌株,3株(3.65％)为tdh+ trh+菌株.81株副溶血弧菌的PFGE相似值为57.7％～100.0％,被分为36种不同的PFGE型别,PFGE001型和029型为2009年广东省副溶血弧菌优势PFGE型别.结论 2009年广东省引起感染性腹泻和食物中毒的副溶血弧菌以O3:K6和O4:K8型为主要血清型,多数菌株携带tdh基因,存在优势PFGE型别菌株不断引起各地区的散发和暴发.     

表型和分子分型技术在霍乱弧菌研究中的应用

目的分析1999～2005年广州地区O1群和O139群霍乱弧菌代表菌株的致病基因型和PFGE型别,确定霍乱菌株的分子流行病学特征和同源性,研究本地霍乱弧菌的分子特性。方法采用多重PCR方法检测霍乱弧菌的4种致病相关基因,采用限制性内切酶Not I,以脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型,采用分型处理软件BioNumerics Version对PFGE图谱做聚类分析。结果本地霍乱弧菌代表株中存在3种致病基因型(A、B、C型),病例分离的霍乱弧菌多为A型基因,而环境分离的霍乱弧菌则多为C型和B型。总共96株霍乱弧菌分为60个不同的PFGE型,带型范围:8 kb-650 kb。相同或相近的PFGE型(相差1～3条带)存在于多次霍乱暴发疫情分离株中、环境分离霍乱与临床株之间、输入病例与本地病例分离霍乱弧菌间,不同的PFGE克隆型(4～6带及以上)的流行病学联系也较远。结论将致病基因分型、PFGE型与流行病学资料结合,揭示了本地霍乱菌株从受污染的珠江水及水产品传递给人并引起霍乱暴发、散发的特征,提示开展霍乱菌株PFGE分子分型监测及加强地区间合作的必要性和急迫性。     

2016-2019苏州市副溶血性弧菌的毒力基因和耐药性及分子分型研究

目的了解2016-2019年苏州市副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)分离株毒力基因携带情况,耐药性及分子分型。方法利用荧光定量PCR技术对154株分离自苏州各区、县级市的VP的3种毒力基因(tlh、tdh、trh)进行检测。采用微量肉汤稀释法测定其对14种抗生素的耐药性。采用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis, PFGE)进行分子分型。采用卡方检验对统计结果进行分析(α=0.05)。结果 154株VP分离株tlh基因均为阳性;trh基因阳性4株,阳性率为2.60%,均为病患分离;tdh基因阳性107株,阳性率为69.48%,其中病患分离株阳性106株,食品及环节(用具)分离株阳性1株。154株VP仅对氨苄西林耐药,总体耐药率为80.52%(124/154),其中病患分离株耐药率为88.98%(105/118)高于食品及环节分离株耐药率52.78%(19/36),差异具有统计学意义(P<0.001)。154株VP经PFGE分子分型显示带型相似性为45%～100%,按相似度85%为判读标准可分为73个带型...     

PFGE技术对一起副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:了解一起食物中毒事件中副溶血性弧菌(VP)分离株的同源性。方法:按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型及tdh、trh毒力基因检测;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行基因分型。结果:从10例患者肛拭子和1份砧板涂抹物中分离到的11株VP,血清型均为O3:K6,tdh毒力基因均为阳性,PFGE分型图谱也完全相同。结论:这是一起因VP污染了食品加工环节而导致的食物中毒事件。     

2005年福建省霍乱弧菌流行菌型特征分析

目的:了解福建省霍乱弧菌流行菌型特征,为控制传染来源提供科学依据。方法:采用血清学分型法、噬菌体-生物分型法及PFGE(脉冲场凝胶电泳)分型法对2005年霍乱疫情中不同来源的142株霍乱弧菌进行分型分析。结果:142株霍乱弧菌血清学、噬菌体-生物分型结果:流行株124株中O1群埃尔托稻叶1d型占95.16%(118/124株);其余菌株为6型以上非流行株。70株霍乱弧菌PFGE分型结果呈现3大类8种带型。结论:2005年霍乱疫情期间患者菌株与福州市闽江水系分离株菌型一致,表明具有高度同源性,而与市场水产品不相关。流行菌型更换而出现的埃尔托稻叶1d型,提示福建省今后仍有发生霍乱流行的可能。     

四川省2005年霍乱分子流行病学特征

目的：分析四川省2005年霍乱弧菌分子特征,以及霍乱暴发疫情分离的菌株与菌株之间,疫情分离的菌株与海、水产品监测分离的霍乱弧菌之间的遗传相关性,查找霍乱传染来源,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法：利用聚合酶链反应（PCR）检测O139群霍乱弧菌特异性编码脂多糖基因（LPS）和霍乱毒力基因（ctxAB）;脉冲场凝胶电泳对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果：所试16株霍乱弧菌14株LPS阳性,为O139群霍乱弧菌;另2株为O1群稻叶型霍乱弧菌.2株稻叶型霍乱弧菌和1株O139群霍乱弧菌ctxAB阴性,其余13株菌均具有ctxAB,为产毒株.对16株菌以NotⅠ酶切后PFGE可分为5个型别.O139群霍乱弧菌优势流行株与从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌PFGE型别一致,且同为产毒株.结论：甲鱼等海、水产品被O139群霍乱弧菌污染情况严重,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源,被污染的甲鱼可能是本年度食源性霍乱暴发的主要传染来源之一,海、水产品的监测是近期霍乱防控的重点.     

Comparison of pulsed-field gel electrophoresis and ribotyping for subtyping of Vibrio cholerae O139 isolated in Thailand.

Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of Cpo I-digested genomic DNA and ribotyping (Bgl I) were applied to 60 Vibrio cholerae strains including 48 V. cholerae O139 from Thailand to compare their value in differentiating strains of the present V. cholerae O139 epidemic. PFGE patterns were divided into groups A and B representing five and four subtypes, respectively, while ribotyping showed four different patterns. PFGE group B subtypes were only presented among O139 isolates from Thailand, whereas four O139 strains from Bangladesh and India showed identical PFGE group A subtypes observed in O139 isolates from Thailand. Two nontoxigenic O139 isolates from Thailand showed different and unique PFGE types as did five V. cholerae non-O139 isolates containing a gene virulence complex found in V. cholerae O139. These results indicate that PFGE (Cpo I) can resolve recent evolutionary divergence within V. cholerae O139 and offers a useful supplementary tool for following the progressing V. cholerae O139 epidemic.     

我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157：H7脉冲电场凝胶电泳分型

目的 探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7菌株的分布，流行以及分型情况。方法 用脉冲电场凝胶电泳（PFGE）方法进行分型，辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株进行研究。结果 根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱，可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHECO157：H7菌株分成8个PFGE型别（PFGE1-PFGE8），宁夏菌株为PFGE1型和2型，徐州菌株有6个PFGE型，1986-1988年的分离菌株属于PFGE7型，1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型，1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE5型，从家畜家禽的粪便，食品，蔬菜等标本分离的19株菌，可以分为PFGE3-6等4个型别，其中，PFGE5型占优势（10株菌）。结论 爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品，蔬菜等有关，从我国部分地区分离的EHECO157：H7菌株的PFGE型别有地区性差异。     

脉冲场凝胶电泳分型技术在追溯O139霍乱传染来源中的应用

目的分析四川省2004年7起因聚餐暴发霍乱疫情的分离菌株之间,及其与常规监测中从外环境、水产品中分离的霍乱弧菌之间的分子分型特征和遗传相关性,查找霍乱传染来源.方法利用聚合酶链反应检测霍乱毒力基因（ctxAB）,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果所试72株O139群霍乱弧菌中所有4株从河水分离的菌株ctxAB阴性,其余均具有ctxAB,为产毒株.对其中的67株菌以Not I酶切后PFGE可分为16个型别.从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌与同期流行的O139群霍乱弧菌优势PFGE型别一致,并且也为产毒株.7起暴发中分离的菌株型别各不相同.结论2004年四川省O139霍乱暴发感染来源复杂,提示并非因为菌株在该地持续存在而引起,但甲鱼可能是2004年度霍乱聚餐暴发的主要传染来源之一.