丁酸盐不同给药方式诱导K562细胞向红系分化的比较研究

目的 研究丁酸盐对血红蛋白合成的诱导作用和不同给药方式对丁酸盐诱导的K562细胞向红系分化的影响。方法 以K562细胞为体外模型，采用联苯胺染色定性技术检测细胞内血红蛋白，比较丁酸盐不同浓度、不同给药方式诱导K562细胞前后的阳性细胞率；测量波长为414nm的D(λ）值和醋酸纤维膜电泳检测药物诱导的血红蛋白含量的7变化。结果 不同浓度的丁酸盐诱导后联苯胺染色阳性细胞率（BZ％）增加4－6倍，细胞平均血红蛋白较用药前增加9－14倍；丁酸盐选择性地刺激HbF合成；单次脉冲式给药BZ％在72h达高峰，峰值在19％－28％之间，之后迅速下降，约在7－9d接近用药前水平，孵育时间的长短与BZ％上升以及上升后持续时间的长短无关；丁酸盐持续诱导的BZ％变化与一次脉冲式用药总体趋势相似；间断脉冲式用药BZ％在72h达到峰值后持续保持在20％－30％之间的水平，直至3个周期的用药结束。结论 丁酸盐可诱导珠蛋白基因表达，促进血红蛋白的合成，尤其能够选择性地刺激胎儿血红蛋白的合成增加；间断脉冲式用药能够持续诱导K562细胞向红系分化，可作为丁酸盐治疗β珠蛋白基因缺陷疾病的理想给药方式。     

苦参碱诱导K562细胞合成γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制

目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制.方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10 μmol/L)处理1 h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h 的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100 μmol/L)诱导72 h的K562细胞为阳性对照.分别提取细胞总RNA 和总蛋白.采用RT-PCR、Western blotting和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平.结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05).K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05).结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用.     

丁酸盐和羟基脲诱导7种珠蛋白基因mRNA表达的研究

目的　研究丁酸盐和羟基脲分别诱导后 7种珠蛋白基因 (α ,β ,Aγ ,Gγ ,ζ ,ε ,δ)mRNA水平的改变。 方法　以K5 6 2细胞为体外模型 ,采用联苯胺染色技术观察 0 5mmol/L丁酸盐和 10 0 μmol/L羟基脲对珠蛋基因表达的诱导作用 ;采用RT -PCR技术同时扩增 7种珠蛋白mRNA ,比较丁酸盐和羟基脲诱导前后 7种珠蛋白基因mRNA水平的改变及这种改变在两种药物之间的不同。结果　 0 5mmol/L丁酸盐和 10 0 μmol/L羟基脲诱导K5 6 2细胞 3～ 6d ,联苯胺染色阳性率达高峰 ,为 36 5 %和 41 5 % ;K 5 6 2细胞用药前后均不表达 β -珠蛋白基因。丁酸盐和羟基脲诱导 4～ 5d后α ,ζ ,ε ,δmRNA增加分别为 1 2 4,1 19,1 17,1 11倍和 1 2 3 ,1 2 0 ,1 14 ,1 15倍 ,γ -mRNA的增加为 ( 3 81± 0 14 )倍和 ( 3 71±0 11)倍 (P <0 0 1) ,其中Gγ增加显著而Aγ不显著。各珠蛋白基因增加在丁酸盐与羟基脲间无差别。结论　丁酸盐和羟基脲均具有相似的诱导珠蛋白基因表达并选择性地刺激γ珠蛋白基因 ,尤其Gγ的转录增加的作用 ;对α -珠蛋白基因亦有微弱的转录激活的作用     

黄芪多糖诱导K562细胞γ-珠蛋白基因表达

目的 探讨黄芪多糖(APS)对K562细胞γ-珠蛋白基因表达的诱导作用.方法 以K562细胞为模型,以APS诱导的细胞为实验组,未加药细胞为空白对照,丁酸钠(NaB)处理的细胞为阳性对照,分别用联苯胺染色和RT-PCR分析联苯胺染色阳性率、Aγ-和Gγ-珠蛋白基因mRNA表达水平.结果 (1)与空白对照组相比,300 mg/L APS诱导48 h后联苯胺染色阳性率由(4.37±0.58)%升高至(15.67+1.80)%(P<0.05).300 mg/L APS诱导K562细胞48 h的联苯胺染色阳性细胞总数为(60.40±6.33)×102.与NaB组(42.02±16.42)×102相比差异有显著性意义(P<0.05).(2)与空白对照组相比,300 mg/L APS诱导48 hAγ和Gγ珠蛋白基因tuRNA表达分别增加3.59±0.16倍和5.02±0.81倍(P=0.000).结论 APS可诱导K562细胞Aγ和Gγ珠蛋白基因mRNA表达增强,具有治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血的潜能.     

当归多糖对K562细胞增殖抑制及定向红系细胞分化的实验研究

目的:研究当归多糖(Angelica polysaccharide,APs)对人红白血病细胞株(K562)增殖抑制及定向红系细胞分化的影响.方法:采用细胞体外培养技术、MTT法、台盼蓝拒染法与流式细胞术检测APS对K562细胞增殖的影响.光镜观察细胞形态变化;联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系分化的特征和血红蛋白含量的变化.结果:APS对K562细胞的增殖有明显的抑制作用,抑制强度与APS的剂量和作用时间密切相关;经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,合成血红蛋白的量提高.结论:APS在体外对K562细胞有明显的增殖抑制及诱导其向红系细胞分化的作用.     

AQP1在维甲酸诱导红白血病细胞红系分化中的作用

目的建立稳定抑制水通道蛋白1（AQP1）表达的K562细胞株,探讨AQP1在维甲酸（RA）诱导红白血病细胞红系分化中
的作用。方法RA处理K562细胞,通过real-time PCR法检测γ-珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白的含量研究RA对K562
细胞红系分化的影响。Real-time PCR法、蛋白质印迹法检测RA诱导后K562细胞AQP1转录和蛋白表达水平的变化。设计特
异AQP1shRNA序列,构建pSUPER-retro-puro重组质粒转染K562细胞,筛选建立稳定抑制AQP1基因表达的K562细胞株
（K562-shAQP1）;通过比较K562-shAQP1细胞株与对照组细胞在维甲酸诱导后γ-珠蛋白和血红蛋白的表达,研究AQP1在维甲
酸诱导K562细胞红系分化中的作用。结果RA处理K562细胞后红系分化指标γ-珠蛋白和血红蛋白的表达均明显增加,同时
AQP1mRNA及蛋白表达随RA作用时间显著增加（P<0.01）。pSUPER-retro-puro-shAQP1干扰载体转染K562细胞后AQP1基
因在转录和蛋白水平上的表达均被抑制,差异有统计学意义（P<0.01）;K562-shAQP1细胞与对照K562细胞相比,在RA诱导后
γ-珠蛋白和血红蛋白表达受到不同程度的抑制,差异有统计学意义（P<0.01）。结论RA诱导K562细胞红系分化后AQP1表达
显著增加,而抑制AQP1基因的表达可部分阻断RA诱导红系分化的作用,说明AQP1在RA诱导K562细胞红系分化过程中发
挥重要作用。
     

人β-珠蛋白小分子RNAs调控γ-珠蛋白基因表达及开关机制研究

目的从RNA角度研究珠蛋白基因表达调控,探讨人γ-珠蛋白向β-珠蛋白转换的分子机制,为β-珠蛋白生成障碍性贫血的分子治疗提供新靶位,并为诱导肿瘤细胞分化治疗肿瘤提供依据。方法通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较白血病和非白血病患者外周血白细胞血红蛋白基因分子水平的差异,将β-珠蛋白基因转染K562细胞,运用噻唑蓝比色法、细胞流式分选等技术检测β-珠蛋白基因对K562细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,通过Western blot及RT-PCR分别从蛋白质水平和mRNA水平分析其调控γ-珠蛋白基因表达的作用,同时运用生物信息学预测人β-珠蛋白基因可以产生具有基因表达调控作用的小分子RNAs。结果白血病患者血红蛋白A1、血红蛋白B、血红蛋白E1、细胞珠蛋白、脑红蛋白的mRNA表达均显著低于非白血病患者(P<0.05)。β-珠蛋白基因能以时间依赖的方式诱导K562细胞增殖受抑,并在第7天达到最佳时间效应。用RT-PCR检测转染后K562细胞α、β、γ-珠蛋白等mRNA的表达,发现β-mRNA上升导致转染后的K562细胞γ-珠蛋白表达下调,同时α-珠蛋白表达上调;β-珠蛋白基因可能产生作用于γ-珠蛋白的小分子RNA,符合条件的二级结构在热力学上稳定,空间位阻也在一定范围内。结论白血病患者外周血白细胞珠蛋白基因低表达,β-珠蛋白基因能以时间依赖的方式诱导K562细胞增殖受抑,其高表达可诱导K562细胞增殖受抑和凋亡,并抑制K562细胞γ基因表达,通过小分子RNAs调控γ-珠蛋白基因表达沉默,有助于揭示人γ-珠蛋白向β-珠蛋白转换的基因表达调控及开关机制。     

低剂量羟基脲联合丁酸钠对K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用

目的：探讨低剂量羟基脲（hydroxyurea,HU）与丁酸钠（sodium butyrate,NaB）联合诱导人白血病细胞株（K562）细胞对γ珠蛋白基因表达的作用。方法：以K562细胞株为研究对象,用不同浓度HU和／或NaB作用于K562细胞,台盼蓝拒染活细胞计数观察细胞生长;联苯胺染色了解细胞红系分化,RT—PCR测定珠蛋白基因γ-mRNA表达。结果：25μmol／L HU与100μmol／LNaB是最佳用药组合,其对细胞生长抑制率为（46．09±1．54）％,与HU100μmol/L（64．31±5．19）％、NaB500μmol／L（86．25±1．10）％比较差异有显著性（P〈0．05）;联苯胺染色阳性细胞率达（17．72±0．58）％,与HU100μmoL／L（15．72±0．27）％、NaB500μmol／L（14．32±0．74）％比较差异有显著性（P〈0．05）;与亲本细胞比较Gγ—mRNA表达上调（2．04±0．13）倍,Aγ-mRNA表达上调（1．27±0．01）倍,差异有显著性（P〈0．05）。结论：低剂量HU与NaB联合用药能使K562细胞γ珠蛋白基因表达上调,并减轻细胞生长抑制,为临床联合用药提供实验依据。     

K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化

目的:观察K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化,探讨miR-451在红细胞(RBC)形成过程中的作用.方法:应用Northern印迹法分析小鼠不同组织细胞(肝、骨髓、红细胞、白细胞)及人RBC、鸡RBC中miR-451的表达情况.采用氯高铁血红素(hemin,50 μmol/L)诱导K562细胞红系分化,诱导36 h后应用联苯胺染色及血红蛋白mRNA RT-PCR鉴定K562细胞红系分化结果,采用Northern印迹法及茎环RT-PCR分析K562细胞经hemin诱导不同时间点(24、48、72、96 h)miR-451表达的变化.结果:除红细胞外,小鼠白细胞、肝脏及骨髓Northern印迹均未检测到miR-451表达;人RBC及具有细胞核的鸡RBC亦检测到miR-451表达.小鼠及人RBC检测到2种miR-451,发现了1条较Sanger中心报道的序列3′端多1个尿嘧啶的miR-451序列.50 μmol/L hemin诱导后K562细胞出现红系分化,与诱导前相比,诱导36 h后联苯胺染色阳性细胞增多(P＜0.05),γ、δ及ε血红蛋白表达增加(P＜0.05).Northern印迹未能检测到K562细胞诱导前后miR-451表达变化,但更敏感的茎环RT-PCR分析显示,诱导前K562细胞本身低丰度表达miR-451,hemin诱导24 h后,miR-451表达丰度开始增加,随着血红蛋白(δ-globin)表达增加,miR-451表达进一步增加,72 h达高峰.结论:miR-451是红系分化终末特异高表达的miRNA,在人及小鼠RBC中均存在相差1个碱基的2种序列,其在K562细胞红系分化过程中表达升高.     

腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1抗血管新生衍生物基因转移抑制K562细胞裸鼠体内生长

目的　探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白 1(thrombospondin 1,TSP1)抗血管新生衍生物(TSP1f)基因转移对人白血病细胞株K5 6 2裸鼠移植瘤的抑制活性及作用机制。方法　应用RT PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1fcDNA序列 ;采用AdEasy系统构建TSP1f 重组腺病毒ADV TSP1f;用Western印迹方法检测ADV TSP1f 介导的TSP1f 在K5 6 2细胞中的表达 ;18只皮下移植瘤模型小鼠分为 3组 ,分别于移植瘤内注射 10 9pfuADV TSP1f、10 9pfuADV LacZ及PBS观察对K5 6 2裸鼠体内生长的抑制作用 ;用免疫组化方法比较移植瘤内微血管密度 (MVD)。结果　K5 6 2细胞经ADV TSP1f感染可高效表达 /分泌TSP1f 多肽 ;治疗后 3周ADV TSP1f 治疗组移植瘤体积为 ( 110 8mm3± 179mm3) ,远小于ADV LacZ组 ( 45 18mm3± 45 2mm3)及PBS组 ( 46 6 6mm3± 45 8mm3) ,(P <0 0 1) ;每× 2 0 0倍视野中 ,ADV LacZ、PBS及ADV TSP1f 治疗组组织切片内CD31阳性血管内皮细胞平均数分别为 36± 7,34± 9和 14± 4。结论　ADV TSP1f可显著抑制K5 6 2细胞裸鼠体内生长 ,有望成为治疗恶性肿瘤包括造血系统恶性肿瘤有效的基因治疗药物。     

白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系

目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.     

Comparative proteomic analysis of differentially expressed proteins between K562 and K562/ADM cells

Background Multidrug resistance to chemotherapeutic agents is an important clinical problem during the treatment of leukemia. The resistance process is multifactorial. To realize the total factors involved in multidrug resistance, we analyzed the differentially expressed proteins of K562 and K562/ADM cells and we investigated one of the up-regulated proteins （CRKL） using siRNA to determine its role in K562/ADM cells. Methods Altered protein expressions between K562/S （K562 ADM-sensitive cell line） and K562/ADM （K562 multidrug resistant cell line induced by adriamycin） were identified by 2D-DIGE coupled with mass spectrometry. Meanwhile, we confirmed the differential expression of CRKL and Stathmin in both K562 and K562/ADM cells by Western blot analysis. Furthermore, we used RNA interference to silence the CRKL gene expression. Results Among the 9 differentially expressed proteins, 3 were up-regulated in K562/ADM cells, while 6 were down-regulated in the K562/ADM cells compared with its parent cell line. The expression of CRKL was up-regulated significantly in K562/ADM cells, and it can be decreased by recombinant lentivirus. Moreover, the multidrug resistance of K562/ADM cells was efficiently reversed by silence of CRKL gene expression. Conclusions The data provided the differentially expressed proteins in K562 and its resistant cell line and highlights the power of 2D-DIGE for the discovery of resistance markers in cancer. We found CRKL may be a new protein involved in the multidrug resistanse of leukaemia cells.     

ZM-66, a New Podophyllotoxin Derivative Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis in K562/ADM Cells

Objective To investigate the anti-tumor effect of ZM-66 on multidrug-resistant leukemic cell line K562/ADM. Methods The K562/ADM cells were treated with varying concentrations （0, 1, 2, 4×10^-3 mmol/L） of ZM-66 or etoposide for 24 hours. The proliferation was detected by Sulforhodamine B Sodium Salt （SRB） assay and apoptosis was detected by flow cytometry analysis and fluorescent staining. In addition, the expression levels of p53 and bax genes in K562/ADM cells were detected by RT-PCR analysis. The level of P-glycoprotein （P-gp）, P53 and Bax protein in K562/ADM cells were detected by Western blot assay. Results SRB assay demonstrated that etoposide had little inhibitory effect on K562/ADM cells, whereas ZM-66 （1, 2, 4×10^-3 mmol/L） had significantly inhibitory effect on K562/ADM cells （all P〈0.01）. The acridine orange/propidium iodide dual staining showed that there were typical condensation of chromatin and nuclear fragmentation nuclei with red color in ZM-66 treated cells. Flow cytometric analysis showed that there was a significantly increase of apoptotic cells i~ K562/KDM cells after treated with ZM-66. RT-PCR showed that the p53 and bax mRNA expression levels in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 1, 2, 4×10^-3 mmol/L were higher than those in the cell without treatment. Western blot showed that the P53 and Bax protein expression levels in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 2, 4x 10 s mmol/L were higher than those in the cell without treatment. But the P-gp protein expression level in K562/ADM cells treated with ZM-66 at 2, 4×10^-3 mmol/L was gradually lower than those in the cell without treatment. Conclusion ZM-66 is able to induce cell death by apoptosis in vitro, as a result of the reverse of theapoptosis resistance in drug-resistant K562/ADM cells by modulating expression of key factors associated with apoptosis induction.     

丙戊酸钠诱导髓系白血病细胞分化、凋亡作用及其机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导髓系白血病细胞体外分化和凋亡作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法增殖抑制实验和锥虫蓝拒染法检测VPA对细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的表达和细胞凋亡,Western印迹法检测组蛋白H3的9位赖氨酸残基(H3-Ac-lys9)的乙酰化水平变化。结果VPA抑制U937和K562髓系白血病细胞增殖,并呈时间-剂量依赖效应。在VPA较低浓度下(0.5～1mmol/L)作用6d后,VPA诱导U937细胞分化,其细胞表面髓系分化抗原CD11b表达明显上调,细胞形态呈终末分化改变。VPA与全反式维甲酸和(或)粒细胞集落刺激因子联合应用,诱导分化作用更为显著。在VPA较高浓度下(2mmol/L),VPA诱导U937细胞磷脂结合蛋白结合力明显上升,细胞呈现凋亡状态。而同样条件下VPA不能诱导K562细胞出现显著的分化和凋亡。U937和K562细胞在H3-Ac-lys9的乙酰化水平存在差异。VPA能够上调U937细胞H3-Ac-Lys9乙酰化,而K562细胞未观察到类似调变作用。结论VPA诱导U937细胞分化和凋亡,其作用与U937细胞的H3-Ac-lys9乙酰化水平及其对VPA处理后的上调有关。     

白血病K562/ADM细胞耐药性与白血病干细胞及耐药蛋白表达的关系

目的 观察白血病药物敏感和耐受细胞中白血病干细胞(ISC)、耐药蛋白表达和耐药性的关系.方法 以白血病多药耐药株K562/ADM细胞及其亲本K562细胞为模型,MTT比色法测定细胞的药物耐受性;流式细胞术检测细胞免疫标志、P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达;甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖潜能.结果 K562/ADM细胞对阿霉素、柔红霉素和鬼臼乙叉苷高度耐受.K562/ADM细胞中CD34+、CD123+和CD34+CD38-细胞含量均显著高于K562细胞,LSC细胞相对含量是K562细胞的4.12倍;共表达P-gP和BCRP的K562/ADM细胞比K562细胞高11.25倍,其中CD34+ CD38- CD123+ BCRP+和CD34+ CD38- P-gp+ BCRP+细胞数量分别为K562细胞的3.66倍和11.37倍.K562/ADM细胞集落形成率是K562细胞的4.17倍,与LSC含量相当.结论 白血病K562/ADM耐药细胞中存在的高表达耐药蛋白的耐药性LSC是其多药物耐受性的根源.     

过氧化氢对K562细胞凋亡的影响

目的 :探讨活性氧对K5 6 2细胞凋亡的影响。方法 :用过氧化氢 (hydrogenperoxide ,H2 O2 )作用于对数生长期的K5 6 2细胞。结果 :Hoechst 332 5 8染色法观察到K5 6 2细胞明显凋亡 ;caspase活性定量测定及WesternBlotting检测显示caspase 3, 8, 9同时被激活。结论 :H2 O2 可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,且通过同时激活线粒体途径和死亡受体途径起作用。     

磁性纳米四氧化三铁及纳米金协同柔红霉素作用于K562/A02细胞的初步研究

目的：研究磁性纳米四氧化三铁（Nano-Fe3O4）及纳米金（Nano-Au）是否具有逆转K562/A02细胞耐药的作用。方法：用MTT法测定盐酸柔红霉素（DNR）对K562/A02和K562细胞的毒性,并观察DNR与Nano-Fe3O4或Nano-Au的联合作用。结果：体积分数为25%的Nano-Fe3O4及Nano-Au能有效增强DNR的细胞毒作用,提高细胞的凋亡率,差异具有显著性。结论：Nano-Fe3O4及Nano-Au结合DNR后均能有效逆转K562/A02细胞的耐药性。     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10 μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexin Ⅴ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡（[ 42.50±2.63）%,P<0.01],显著增加了细胞周期G0/G1期细胞比率（[ 57.23±1.44）%,P<0.01]。Western blot结果表明,两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高（P<0.01）,Caspase-9蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论 Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用,其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达,使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调,Caspase-9蛋白表达上调来实现的。