CD25~＋ Foxp3~＋调节性T细胞和Th17细胞在口腔白斑组织中的表达

目的：通过观察CD25＋Foxp3＋和IL-17阳性细胞在口腔黏膜白斑（oral leukoplakia,OLK）和口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）组织中的表达情况,探讨Treg细胞和Th17细胞在口腔癌发生发展过程中的变化。方法：采用免疫组织化学方法检测CD25＋Foxp3＋、IL-17阳性细胞在10例单纯增生性白斑、32例异常增生性白斑、13例OSCC和10例正常口腔黏膜中的变化情况。结果：正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组CD25＋Foxp3＋Treg细胞数量逐渐增高（P〈0.05）,依次为（2.5±0.65）、（5.22±1.19）、（31.4±16.8）和（42.8±12.67）个/每高倍镜视野。重度异常增生白斑组织中,CD25＋Foxp3＋Treg细胞的数量高于轻、中度异常增生白斑组织（P〈0.05）。此外,正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组中表达IL-17的阳性细胞虽有递增趋势,但差异无统计学意义。CD25＋Foxp3＋Treg细胞和Th17细胞数量改变在口腔白斑和OSCC组织中呈正相关（r=0.318,P〈0.05）。结论：Treg细胞的数量在白斑和OSCC组织中增多,Th17细胞协同Treg细胞,在口腔癌发生发展过程中发挥了一定的作用。     

LAIR-1与 TGF-β在口腔扁平苔藓患者外周血中表达的相关性研究

目的：研究 LAIR-1和 TGF-β在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达情况,探讨 LAIR-1和 TGF-β对 OLP 患者免疫功能的影响。方法：采用流式细胞术检测 LAIR-1在 OLP 患者（n ＝22）和健康人（n ＝22）外周血 Treg 上的表达水平, ELISA 检测外周血 TGF-β的水平。结果：OLP 患者外周血 CD4＋Foxp3＋Treg 上 LAIR-1阳性率高于健康人,TGF-β的水平亦高于健康人,LAIR-1在 CD4＋Foxp3＋Treg 上的表达水平和 TGF-β的水平呈正相关（r ＝0．43,P ＜0．05）。结论：LAIR-1和TGF-β在 OLP 患者外周血中表达上调,提示 LAIR-1和 TGF-β可能参与了 OLP 的发病。     

调节性T细胞和白介素15在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的:研究外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)和白介素15 (IL-15)的表达在口腔扁平苔藓(OLP)发病机制中的作用.方法:采用免疫荧光染色技术,经流式细胞仪检测36例口腔扁平苔藓患者和20例正常人外周血Treg表达水平.应用ELISA技术检测外周血IL-15的表达水平,采用SPSS16.0软件包对其表达差异进行统计学分析.结果:口腔扁平苔藓患者外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞数量较正常组显著上升,IL-15表达水平也显著高于正常组,但是口腔扁平苔藓糜烂型与非糜烂型之间的差异无显著性.Treg的表达与IL-15的水平呈正相关(P＜0.05).结论:Treg和IL-15的表达上升可能是OLP的发病机制之一.     

口腔扁平苔藓损害组织中树突状细胞亚群数量和比例

目的：研究口腔扁平苔藓（oral lichen planw,OLP）组织中树突状细胞（dendritic cell,DC）的亚群数量和比例,探索其在OLP疾病中的作用。方法：收集正常对照（HC组）,萎缩糜烂型OLP（E－OLP组）,斑纹型OLP（R－OLP组）的颊黏膜,通过流式细胞术染色和免疫组化染色,检测朗格汉斯细胞（CD1a＋CD11cint／lo CD207＋MHC II＋）、髓样DC （CD11c＋MHC II＋）、浆细胞样DC（CD11cint／lo CD123＋MHC II＋）和细胞毒性T细胞（CD3＋CD8＋）在组织中的浸润情况。结果：收集样本23例（HC组5例,E－OLP组7例,R－OLP组11例）,Bartlett检验各组数据方差不齐,采用Kruskal－Wallis非参数检验。朗格汉斯细胞的中位数比例分别为0．092％（HC）、0．564％（E－OLP）和0．541％（R－OLP）,3组间无统计学差异;髓样DC的中位数比例分别为0．311％（HC）、0．996％（E－OLP）和0．448％（R－OLP）,其中E－OLP组与HC组之间有统计学差异（P＜0．05）;浆细胞样DC的中位数比例分别为0．090％（HC）、3．490％（E－OLP）和2．010％（R－OLP）,2组OLP组与HC组之间均有统计学差异（P＜0．05）;CD8＋T细胞的中位数比例分别为0．126％（HC）、4．210％（E－OLP）和1．850％（R－OLP）,2组OLP组与HC组之间均有统计学差异（P＜0．05）。结论：DC在OLP中数量和比例增加,可能与疾病的自身免疫发病机制有关。     

OLP外周血中CD4＋CD25＋T细胞体外增殖及对CD4＋CD25-T细胞增殖的影响

目的：通过检测口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞的体外增殖及对CD4＋CD25＋T细胞增殖的影响,探讨调节性T细胞对OLP特异性细胞免疫的调节作用及其在该病发生中的意义。方法：通过免疫磁珠分离系统（MACS）分选OLP患者和健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中的调节性T细胞（regulatory Tcell,Treg）和效应性T细胞（responder Tcell,Tresp）,采用流式细胞术检测其纯度、3H--脱氧胸腺嘧啶苷方法检测CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD25＋T细胞增殖的影响,比较OLP患者和健康志愿者体内Treg细胞功能。结果：分选后健康对照组及OLP患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞纯度均高于85％。无论是健康对照还是OLP患者的CD4＋CD25-T细胞均明显抑制CD4＋CD25-T细胞的增殖。与健康对照组相比,OLP组CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD25-T细胞增殖的抑制作用显著降低旧〈0．01）。结论：调节性T细胞可能通过抑制OLP特异性细胞免疫应答促进疾病的发生发展。     

少突胶质细胞谱系基因-髓鞘碱性蛋白在口腔扁平苔藓组织中的表达

目的：探讨少突胶质细胞谱系基因一髓鞘碱性蛋白（genes of the oligodendrocyte lineage—myelin basic protein,Golli—MBP）在口腔扁平苔藓（orallichenplanus,OLP）组织中的表达及其与OLP发病的关系。方法：采用实时荧光定量PCR的方法,检测39例OLP患者病损组织和16例健康口腔黏膜组织中Golli—MBP的基因表达水平,采用免疫组化法检测38例OLP及20例正常口腔黏膜组织石蜡标本中Golli—MBP的表达情况。结果：Golli一删即mRNA在OLP组中的表达显著高于正常对照组（P〈0．001）。OLP患者石蜡标本中Golli—MBP的表达水平亦显著高于对照组（P〈0．001）;固有层淋巴细胞中Golli—MBP的表达高于对照组（P〈0．05）;上皮细胞中Golli—MBP的表达在OLP患者及对照组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Golli—MBP在OLP组织中高表达,可能在OLP的发病机制中起一定作用。     

正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白（RANTES）及其受体CCR3在OLP中的表达

目的：检测正常T细胞表达和分泌的活性调节蛋白（RANTES）及其受体CCR3在口腔扁平苔藓（OLP）病损中的表达,探讨其在OLP发生发展过程中的作用及意义。方法：sP免疫组化染色检测30例OLP黏膜组织和10例正常口腔黏膜组织中RANTES、CCR3的表达。结果：OLP黏膜组织RANTES、CCR3的表达均高于正常口腔黏膜组织,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：与正常口腔黏膜组织相比,OLP组织中RANTES及CCR3表达增多且分布存在差异,提示RANTES及CCR3在OLP的发生发展过程中发挥一定作用。     

口腔扁平苔藓患者外周血单个核细胞中 PD-1和 PD-L1的表达及意义

目的：了解口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中 PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA 的表达及意义。方法：分别采用流式细胞术和散射比浊法分析36例 OLP 患者外周血淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋、CD16＋＋56＋）状况和检测患者体液免疫指标（lgG、lgA、lgM、C3、C4）。采用荧光定量 PCR 法（qPCR）检测36例 OLP 患者及18例健康对照组 PB-MCs 中 PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA 的表达情况并分析其与 OLP 患者免疫功能状况的相关性。结果：OLP 患者外周血中 CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD16＋＋56＋（NK）均低于正常值（P ＜0．05）,CD19＋（B）高于正常值（P ＜0．05）;血清补体 C3、C4较正常值降低（P ＜0．05）,免疫球蛋白 lgM较正常值增高（P ＜0．05）。OLP 患者 PBMCs 中 PD-1 mRNA 及 PD-L1 mRNA 的相对表达量均高于对照组（P ＜0．05）,且 PD-1 mRNA 与 PD-L1 mRNA 的相对表达量呈正相关。PD-1 mRNA 的相对表达量与 OLP 患者 CD4＋呈负相关,与 lgG 呈正相关;PD-L1 mRNA 的相对表达量与 CD19＋呈正相关。结论：OLP 患者 PBMCs 中 PD-1、PD-L1 mRNA 的表达上调与 OLP 患者免疫功能状况相关,提示 PD-1／PD-L1通路可能参与 OLP 的免疫发病机制。     

T细胞免疫和细胞凋亡在口腔扁平苔藓发病中的作用

目的通过探讨口腔扁平苔藓（OLP）中细胞凋亡情况及CD4＋、CD8＋T细胞和CD4/CD8比例的变化分析细胞免疫与细胞凋亡的关系,进一步了解OLP的发病机制。方法应用免疫组化SP法检测27例OLP组织中CD4＋、CD8＋T细胞的表达水平,并用原位末端转移酶标记法（TUNEL）定位检测17例OLP中细胞凋亡情况。结果OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞明显高于对照组（P＜0.05）,CD4/CD8值降低。OLP组中上皮内细胞凋亡指数高于对照组,固有层淋巴细胞凋亡指数明显低于对照组。结论OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞浸润的增加、CD4/CD8比值的变化及OLP中上皮细胞和固有层淋巴细胞凋亡异常,说明细胞免疫功能紊乱和细胞凋亡异常在OLP发病中起重要作用。     

口腔扁平苔藓外周血中辅助性T细胞/调节性T细胞平衡与临床特征相关性分析

目的 了解口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中辅助性T细胞17（Th17）与调节性T细胞（Treg）的平衡变化,探讨它们在OLP发病机制中的作用及意义。方法 选取17例正常组和33例OLP患者（网纹型15例,糜烂型18例）的外周血,应用流式细胞术（FCM）检测Th17、Treg细胞的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测它们的转录因子维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）和叉头状转录因子3（Foxp3）mRNA的表达。结果 OLP外周血中Th17、Treg细胞及RORγt、Foxp3 mRNA表达均升高（P<0.05）,但Treg细胞和Foxp3 mRNA表达在OLP两型间差异无统计学意义。Th17/Treg比值在OLP中升高（P<0.05）,其中糜烂型OLP显著高于正常组及网纹型OLP（P<0.01）,但网纹型OLP与正常组相比差异无统计学意义。Spearman相关分析显示Th17细胞和Th17/Treg比值与体征计分、RAE计分存在正相关关系（r=0.66,P=0.00;r=0.66,P=0.00;r=0.52,P=0.00;r=0.50,P=0.00）;同时Th17细胞与Treg细胞也存在正相关关系（r=0.39,P=0.03）。结论 OLP外周血中Th17和Treg细胞以及它们的比例均增高,Th17/Treg失衡在糜烂型OLP的发病过程中起了一定作用。     

曲安奈德和帕夫林联合治疗老年糜烂型OLP疗效观察

目的：探讨局部注射曲安奈德配合口服帕夫林治疗老年人糜烂型OLP的疗效。方法：对34例老年糜烂型OLP患者用药治疗前后检测T淋巴细胞亚群的变化及观察临床疗效指标。结果：患者经治疗后临床有效率91.18%,T淋巴细胞亚群检测CD3＋、CD4＋T细胞升高（P〈0.01）,CD8＋T细胞下降（P〈0.01）,CD4＋/CD8＋治疗后上升（P〈0.01）。结论：口腔糜烂型OLP经治疗后,临床疗效肯定,血中T淋巴细胞亚群状态有明显改善。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的变化及临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞特异性转录因子FOXP3在口腔鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达情况,以探讨其在口腔鳞癌发生发展中的临床意义。方法 通过免疫组化SP法检测10例正常口腔黏膜组织和36例口腔鳞状细胞癌中FOXP3的表达。结果 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞在高分化组中的阳性率为26.4%、中分化组为42.7%、低分化组为63.5%,与正常组2.81%相比,差异有统计学意义(P<0.05),且其阳性率与与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。结论 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平的增加与机体免疫功能低下密切相关,其在口腔鳞癌的发生发展中可能起着重要的作用。     

白细胞介素35对口腔扁平苔藓患者外周血辅助性T细胞17与调节性T细胞平衡的影响

目的探讨外源性白细胞介素(interleukin,IL)35对口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者外周血中辅助性T细胞17(helper T cell 17,Th17)与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)平衡的影响。方法选取2016年10至12月就诊于贵州医科大学附属医院口腔内科黏膜专科门诊的12例OLP患者外周血(OLP组)(男性1例,女性11例,26~68岁;其中非糜烂型OLP4例,糜烂型OLP 8例),同期收集贵州医科大学附属医院体检中心的13名健康人外周血(健康对照组)(男性1名,女性12名,20~68岁),无菌提取两组外周血单个核细胞,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分选外周血CD4+T细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测两组外周血CD4+T细胞中Th17、Treg细胞特异转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoic acid receptor-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子(forkhead box3,Foxp3)mRNA表达水平;将OLP患者外周血分选出的CD4+T细胞分为实验组与对照组,实验组加入重组人IL-35蛋白(recombinant human IL-35,rhIL-35),对照组加入等体积磷酸盐缓冲液,分别进行细胞体外培养,收集培养结束后的细胞,qPCR检测上述因子的表达水平。结果OLP组CD4+T细胞中Foxp3、RORγt mRNA的相对表达量[M(Q25,Q75)分别为0.15(0.09,0.30)和1.04(0.45,2.15)]均显著大于健康对照组[分别为0.04(0.02,0.06)和0.10(0.05,0.11)](Z=-4.134,P<0.01;Z=-3.699,P<0.01)。OLP组RORγt/Foxp3 mRNA比值[6.22(3.67,15.34)]显著大于健康对照组[2.50(1.24,5.23)](Z=-2.665,P=0.007)。OLP患者外周血实验组CD4+T细胞Foxp3 mRNA相对表达量[0.40(0.21,1.22)]显著大于对照组[0.15(0.11,0.26)](Z=-2.510,P=0.012),两组RORγt mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),实验组RORγt/Foxp3 mRNA比值[3.44(1.55,8.16)]显著小于对照组[6.22(4.43,12.21)](Z=-2.746,P=0.006)。结论OLP患者外周血中存在Th17细胞占优势的Th17/Treg平衡异常,外源性IL-35可通过促进Treg细胞扩增,实现对OLP患者外周血中Th17/Treg平衡的调节。     

端粒酶逆转录酶mRNA在OLP和OSCC中的表达

目的：探讨端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA在口腔扁平苔藓（OLP）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达以及在OLP癌变过程中的作用。方法：应用mRNA原位杂交法对正常口腔黏膜12例,非糜烂型OLP20例,糜烂型OLP20例及OSCC20例,进行hTERTmRNA的检测。结果：正常口腔黏膜、非糜烂型OLP、糜烂型OLP及OSCC中hTERTmRNA阳性表达率分别为8.33％（1／12）、15％（3／20）、45％（9／20）、80％（16／20）。其中,除正常口腔黏膜与非糜烂型OLP中hTERT mRNA阳性率无显著性差异外,其余各组间均有显著性差异（P〈0.05）。而且,正常口腔黏膜与非糜烂型OLP的hTERT mRNA染色强度明显低于糜烂型OLP及OSCC（P〈0.05）。结论：hTERT mRNA可能在糜烂型OLP的癌变过程起着一定的作用。     

IL-2、IL-1O在口腔扁平苔藓发病中的作用

目的：通过对口腔扁平苔藓（OLP）局部组织及外周血中IL-2、IL-10表达进行研究,进-步探讨OLP发病机制。方法：应用免疫组织化学SABC法检测30例OLP中IL-2、IL-10的表达数量及分布,同时用ELISA法检测外周血中IL-2、IL-10的含量。结果：①在病损组织中,OLP组中IL-2、IL-10表达显著高于对照组（P〈0．05）。IL-2主要分布在淋巴细胞浸润带,在基底膜附近较集中;IL-10主要分布在固有层,远离基底膜。②在外周血中,糜烂型OLP组IL-2、IL-10含量明显高于对照组和非糜烂型OLP组（P〈O．05）。结论：①根据IL-2、IL-10在OLP中表达和分布情况,提示IL-2、IL-10在OLP发病机制中参与了机体免疫的调节和介导作用。②外周血中IL-10高表达,提示糜烂型OLP患者全身的免疫反应参与了本病的形成或可能伴有全身免疫系统功能紊乱。