羧甲基壳聚糖对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达PGE2的影响

目的:观察脂多糖(LPS)干预下,不同浓度羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)表达前列腺素E2(PGE2)的影响. 方法:取冻存的人牙周膜成纤维细胞进行复苏培养,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的CMC进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化.结果:不同浓度CMC能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随CMC浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势(P<0.05). 结论:CMC可能对LPS诱导的HPDLFs炎症损伤过程中表达PGE2有重要的抑制作用.     

˫�ȷ����ƶ�֬�����յ���������Ĥ����άϸ��IL-1β��TNF-α����Ӱ���о�

目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

双氯芬酸钠对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞IL-1β和TNF-α表达的影响研究

目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用

目的 观察在脂多糖（LPS）刺激下,人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）中Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基（RANKL）的影响。方法 选用100 ng·mL-1、1 μg·mL-1、10 μg·mL-1大肠杆菌LPS分别刺激HPDLFs,刺激6、12、24、48 h后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HPDLFs表达RANKL的水平。分别运用不同滴度的anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,观察
1 μg·mL-1 LPS刺激下,其RANKL表达水平的变化。结果 LPS刺激HPDLFs 6 h后,即可检测到RANKL的表达,24 h达到顶峰,然后逐渐下降;各LPS质量浓度组的规律基本一致。分别用anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,在1 μg·mL-1 LPS刺激下,其产生RANKL的水平明显下降（P<0.05）;3组中,RANKL的表达水平有明显差异（P<0.05）,其中anti-TLR2+anti-TLR4抗体处理组RANKL表达量最少,anti-TLR4抗体处理组次之,anti-TLR2
抗体处理组RANKL的表达量最高。结论TLR2、TLR4均参与了LPS诱导HPDLFs表达RANKL的过程;与anti-TLR2抗体相比,anti-TLR4抗体能更有效地抑制LPS刺激后HPDLFs表达RANKL的能力。     

氧化苦参碱对内毒素作用下人牙周膜细胞白细胞介素-6和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的研究氧化苦参碱对内毒素（LPS）作用下人牙周膜细胞（PDLC）白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达的影响,探讨氧化苦参碱抑制LPS所造成的牙周炎症反应的机制。方法体外分离及培养PDLC,实验组分别为LPS和不同质量浓度的氧化苦参碱溶液的不同组合,对照组为仅含1% FBS的DMEM培养液。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-6和IL-1β mRNA的水平。结果质量浓度为25 μg·mL-1 LPS能够有效地增强IL-6和IL-1β mRNA水平的表达,实验组高于对照组,差异有统计学意义,加入氧化苦参碱进行干预后实验组与对照组IL-6和IL-1β mRNA的表达无显著差异。结论氧化苦参碱可抑制LPS所造成的PDLC IL-6和IL-1β mRNA表达。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞表达白细胞介素-23

目的：探讨牙髓卟啉单胞菌（P．e）脂多糖（LPS）对小鼠成骨细胞 IL-23mRNA 和蛋白表达的影响,以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路是否参与了该过程。方法：采用 real-time PCR 和 Western blot 法检测 P．e LPS 诱导 MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA 和蛋白的情况,以及用 PI3K 信号通路抑制剂 LY294002预处理细胞后,IL-23mRNA 和蛋白表达的变化。结果：P．e LPS 刺激 MC3T3-E1细胞后,IL-23mRNA 的表达增加具有浓度依赖性和时间依赖性（P ＜0．05）,IL-23蛋白的表达增加具有时间依赖性（P ＜0．05）;LY294002预处理细胞后,P．e LPS 诱导的 IL-23mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P ＜0．05）。结论：P．e LPS 能诱导小鼠成骨细胞表达 IL-23mRNA 和蛋白,PI3K 信号通路可能参与了此过程。     

牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达炎症因子的信号通路研究

目的检测细胞外信号调节激酶（ERK）1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素（LPS）诱导成骨细胞白细胞介素（IL）-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响,探讨根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制。方法成骨细胞MG-63经PD98059和SB203580预处理1 h后,加入牙髓卟啉单胞菌LPS作用6 h,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平。结果PD98059预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA的水平下降。SB203580预处理后,牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA水平均下降。结论牙髓卟啉单胞菌LPS诱导MG-63细胞表达IL-1β mRNA依赖ERK1/2和p38MAPK信号转导通路,表达IL-6 mRNA依赖p38MAPK信号转导通路。     

氧化苦参碱对内毒素作用下人牙周膜细胞白细胞介素-6和白细胞介素-1β mRNA表达的影响

目的 研究氧化苦参碱对内毒素(LPS)作用下人牙周膜细胞(PDLC)白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达的影响,探讨氧化苦参碱抑制LPS所造成的牙周炎症反应的机制.方法 体外分离及培养PDLC,实验组分别为LPS和不同质量浓度的氧化苦参碱溶液的不同组合,对照组为仅含1%FBS的DMEM培养液.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6和IL-1β mRNA的水平.结果 质量浓度为25 μg·mL-1 LPS能够有效地增强IL-6和IL-1β mRNA水平的表达,实验组高于对照组,差异有统计学意义,加入氧化苦参碱进行干预后实验组与对照组IL-6和IL-1β mRNA的表达无显著差异.结论 氧化苦参碱可抑制LPS所造成的PDLC IL-6和IL-1β mRNA表达.     

LPS对成骨细胞IL-6表达的影响

目的:探讨LPS(lipopolysaccharide)对成骨细胞产生细胞因子IL-6的影响。方法:原代培养大鼠头盖骨成骨细胞,以不同浓度的大肠杆菌LPS作用成骨细胞,RT-PCR法检测细胞IL-6 mRNA的表达,凝胶电泳图象分析条带灰度值,ELISA法检测成骨细胞表达IL-6蛋白的含量。SPSS10.0软件进行统计学分析。结果:1×10-5g/L～1×10-3g/L浓度的LPS能够诱导成骨细胞IL-6 mRNA的表达,并且还能刺激成骨细胞IL-6蛋白的产生,随着浓度的增加,各实验组IL-6 mRNA和IL-6蛋白的表达出现不同程度的增强,以1×10-4、1×10-3g/L浓度的LPS作用显著,其差异具有统计学意义。结论:大肠杆菌LPS能够在基因水平和蛋白水平上促进成骨细胞细胞因子IL-6的表达,在骨的代谢中发挥重要作用。     

������ŵ���ض�֬����������������Ĥ����άϸ��IL-6 mRNA���Ӱ���о�

目的研究盐酸米诺环素对脂多糖（LPS）作用下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。方法本研究于2011年10月至2012年2月在井冈山大学医学院重点实验室进行。培养HPDLF并分为以下5组：对照组（未加药）、高剂量组（0．01g／LLPS＋0．2班盐酸米诺环素）、低剂量组（0．0lg／LLPS＋0．05g/L盐酸米诺环素）、中剂量组（0．01g／LLPS＋0．1g／L盐酸米诺环素）、模型组（0．0lg／LLPS）,每组均复种3孔。实时荧光定量PCR检测各组HPDLF中的IL-6mRNA表达情况。结果对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组、模型组的IL-6mRNA相对表达量分别为：0．61±0．08、0．62±0．10、0．88±0．17、0．49±0．21、1．88±0．07。模型组IL-6mRNA的相对表达量高于对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组,且差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组及低、中、高剂量组的IL-6mRNA相对表达量两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下HPDLF中的IL-6mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炙的作用机制之一。     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

离心作用下人牙周膜细胞内诱导型一氧化氮合酶和胱硫醚分解酶的表达

目的研究在离心力作用下人牙周膜细胞内的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和硫化氢合酶胱硫醚分解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）的表达变化。方法采用组织块一酶消化联合法培养人牙周膜细胞,对细胞施加离心力（167g）,SABC法染色及胞浆透光度检测iNOS和CSE在10、30、60、90、120和240min不同加力时间点的表达变化。结果正常人牙周膜细胞内几乎无iNOS和CSE表达;加力10min,iNOS和CSE有表达（Pd0．01）;之后两种酶表达逐渐加强,加力60min,iNOS和CSE表达达到高峰（P〈0．01）;之后逐渐减弱,加力240min,iNOS和CSE恢复到基础水平。结论离心力可诱导人牙周膜细胞内iNOS和CSE的表达短暂性升高,提示一氧化氮（NO）和硫化氢（Hzs）可能参与了牙周组织改建中的力学信号转导过程。     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

bFGF和壳聚糖对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的:探讨水溶性壳聚糖和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)二者联合应用,对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生长增殖和成骨性能的影响。方法:原代培养HPDLFs,观察bFGF和壳聚糖联合作用于HPDLFs后,细胞的增殖情况(MTT比色测定法)、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素(OC,放免法检测)的变化情况,并进行统计学分析。结果:bFGF(10ng/ml)和低剂量壳聚糖(0.2mg/ml)组促进细胞增殖,不降低碱性磷酸酶活性,且提高骨钙素合成量。相对bFGF单独作用组,bFGF和壳聚糖联合作用组可上调ALP活性,bFGF(10ng/ml)和高剂量壳聚糖(2mg/ml)组抑制细胞增殖,不降低碱性磷酸酶活性,且有较高的骨钙素合成量。结论:bFGF和低剂量壳聚糖联合作用既可促进细胞增殖,又可促进HPDLFs向成骨细胞转化。bFGF和壳聚糖联合应用可能是一种新型的牙周组织再生的诱导材料。     

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目的探讨雷洛昔芬对体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞的增殖及分化能力的影响。方法本研究于2012年10月至2013年6月在福建医科大学附属口腔医院进行。采用组织块法体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,分别给予不同浓度的雷洛昔芬进行培养,以17β-雌二醇（10 nmol/L）为阳性对照,单纯DMEM培养液为空白对照。观察雷洛昔芬对人牙周膜成纤维细胞增殖及分化能力的影响。结果与空白对照组相比,17β-雌二醇及不同浓度雷洛昔芬（1~1000 nmol/L）可显著刺激人牙周膜成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,雷洛昔芬最大促增殖浓度为10 nmol/L。17β-雌二醇及浓度为1~100 nmol/L的雷洛昔芬可显著提高人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶的表达（P〈0.01）,但1000 nmol/L雷洛昔芬对细胞碱性磷酸酶的表达无明显促进作用（P〉0.05）。17β-雌二醇及不同浓度雷洛昔芬（10及100 nmol/L）可显著提高人牙周膜成纤维细胞体外矿化能力,与空白对照组相比差异有显著性（P〈0.05）。100 nmol/L雷洛昔芬对细胞体外矿化能力的作用最明显。结论雷洛昔芬可提高体外培养的人牙周膜成纤维细胞的增殖、分化及矿化能力。     

miR-146a在人牙髓细胞中的表达及其作用研究

目的 检测miR-146a在正常及脂多糖（LPS）刺激的人牙髓细胞（hDPC）中的表达,探讨miR-146a对hDPC分泌炎性因子的影响及其机制.方法 （1）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法测定正常及LPS刺激的hDPC miR-146a的表达水平.（2） Lipofectamine 2000脂质体分别转染化学合成的miR-146a类似物（miR-146a mimics）、miR-146a抑制剂（miR-146a inhibitor）及其相应无关序列小RNA对照,转染24 h后1μg/ml LPS刺激hDPC,4h后实时荧光定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）、IL-8 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清IL-6、IL-8的分泌;Western blot 法检测miR-146a下游靶标白细胞介素1受体相关激酶1（IRAK1）及肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的蛋白表达水平.两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用方差分析.结果 （1）经LPS刺激的hDPC miR-146a表达水平高于正常hDPC（12 h：t=8.488,P=0.014;24 h：t=39.661,P＜0.001）.（2）转染miR-146a mimics的hDPC在1μg/mlLPS刺激下产生炎性因子IL-6、IL-8的水平低于阴性对照,差异有统计学意义（IL-6 PCR：P＜0.001,IL-6 ELISA：P＜0.001;IL-8 PCR：P＜0.001,IL-8ELISA：P=0.011）;过表达miR-146a后IRAK1及TRAF6蛋白水平明显下调（IRAK1：P=0.002; TRAF6：P＜ 0.001）.结论 miR-146a在LPS刺激的hDPC中表达上调,转染miR-146a可下调其靶基因IRAK1及TRAF6表达并降低IL-6、IL-8分泌,推测miR-146a参与牙hDPC的炎症反应调控.     

IFN-γ对牙龈卟啉单胞菌内毒素诱导的细胞耐受的影响

目的：观察IFN-γ对牙龈卟啉单胞菌（porphyromonasgin givalis,P．gingivalis）脂多糖（1ipopolysaccharides,LPS）诱导人单核细胞株THP-1细胞耐受后,炎症因子IL-1β和趋化因子IL-8分泌水平的影响。方法：将THP-1细胞用1mg／LIFN-γ预先处理24h,同时采用1mg／L P．gingivalisLPS刺激该细胞24h,洗脱后,采用P．gingivalis LPS再刺激24h,构建内毒素耐受模型。采用大肠杆菌（escherichiacoli,E．coli）LPS作为阳性对照。运用ELISA技术检测细胞条件培养液中IL-1β和IL-8分泌水平的变化。结果：P．gingivalis LPS重复刺激THP-1细胞后,IL-1β分泌水平较第-次刺激后明显降低（P〈0．05）,IL-8分泌水平与第-次刺激后差别不大。经过IFN-γ预先处理的细胞,P．gingivalis LPS重复刺激诱导细胞耐受后,IL-1β分泌水平较无预处理的细胞明显增高（P〈0．05）,IL-8分泌水平无明显变化。结论：IFN-丫能够促进P．gingivalisLPS诱导的耐受细胞分泌IL-1β,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。