三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

目的 研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理。方法 将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后，测定细胞的生长曲线及活性，流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变；同时，采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化。结果 ①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长，其作用呈时间和浓度依赖性；②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱，但可明显诱导K562细胞在G2／M期停滞，此效应也呈时间和浓度依赖性；③三氧化二砷作用后，细胞周期抑制基因p57表达明显上调，而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制。结论 三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长，其机理主要为诱导细胞G2／M期周期停滞；该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关。     

辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制

目的探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞G1期的分子水平的变化,以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0／G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖。方法体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化。结果辛伐他汀能使K562细胞停滞在G1／G0期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达。结论辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

青蒿酸对人红白血病K562细胞增殖抑制的体外研究

目的：探讨青蒿酸体外作用对K562细胞增殖的影响及其机制.方法：采用MTT法检测青蒿酸对K562细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期分布情况,透射电子显微镜进行形态学观察.结果：青蒿酸作用K562细胞24h、48h,能显著抑制细胞增殖,随药物浓度增加,对细胞增殖的抑制强度也显著增高.经青蒿酸作用48h,处于G0/G1期K562细胞增加,且能诱导K562细胞发生凋亡.电镜可观察到细胞凋亡的形态学改变.结论：青蒿酸能抑制K562细胞增殖,这种抗肿瘤作用可能与抑制K562细胞进入细胞增殖周期和诱导细胞凋亡有关.     

P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.     

恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响

[目的]探讨恩替诺特对K562人慢性粒细胞白血病细胞株G_0/G_1细胞周期的影响.[方法]采用CCK-8试剂盒观察恩替诺特对体外培养的K562人慢性粒细胞白血病细胞生长抑制的影响,并利用流式细胞仪检测细胞周期.[结果]CCK-8试剂盒观察结果显示,与对照组比较,随着恩替诺特药物浓度的增加及作用时间的延长,K562细胞抑制率显著升高(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示,恩替诺特可使K562细胞阻滞于G_0/G_1期,且阻滞细胞的数量与药物浓度呈正相关(P<0.05);恩替诺特作用48h时对细胞周期的阻滞作用最强.[结论]恩替诺特通过阻滞细胞周期于G_0/G_1期而抑制K562细胞增殖.     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

太白楤木总皂苷对K562细胞增殖抑制及其作用机制的研究

目的 以人慢性髓系白血病细胞株K562细胞为模型,研究太白楤木的体外抗肿瘤活性及其作用机制.方法 MTT法检测太白楤木总皂苷对K562细胞的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳检测K562细胞DNA损伤;流式细胞术检测K562细胞细胞周期的改变.结果 太白楤木总皂苷对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性;能显著诱导K562细胞DNA损伤;促进凋亡的发生;细胞周期阻滞于S期.结论 太白楤木总皂苷能抑制K562细胞的增殖,诱导凋亡发生,其机制可能与通过诱导K562细胞DNA损伤来改变细胞周期时相的分布有关.     

尿多酸肽诱导慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药细胞生长抑制及分化的体外观察

目的观察尿多酸肽（CDA-2）在体外对慢性粒细胞性白血病（CML）伊马替尼（IM）耐药细胞株K562R生长抑制及诱导分化的作用。方法MTT和集落形成实验观察CDA-2对CML细胞株K562、IM耐药细胞株K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞生长抑制作用。吉姆萨染色观察细胞形态,膜联蛋白-V（Annexin-V）／碘化丙啶（PI）染色分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b、CD14的表达,反转录PCR（RT-PCR）检测细胞分化相关基因、细胞周期调节基因及DNA甲基化转移酶基因的表达。结果CDA-2均可抑制K562、K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞的生长,且对K562R细胞和IM耐药CML患者骨髓细胞的生长抑制更明显;CDA-2改变了K562和K562R细胞形态,诱导细胞向成熟分化,并引起细胞周期在G1期的停滞;这种停滞可能与CDA-2抑制DNA甲基转移酶活性,逆转细胞周期调节基因的甲基化状态有关。结论CDA-2在体外对K562R细胞株有很强的生长抑制和诱导分化的作用,提示CDA-2可能成为治疗IM耐药的CML患者的一种新药。     

OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用

目的研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用。方法应用细胞计数的方法研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的生长曲线的影响;用MTT研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的细胞毒作用;用流式细胞仪技术研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞周期的影响。结果OD-PTD融合蛋白能显著抑制细胞的生长（P〈0.01）;并且对K562细胞具有明显的细胞毒作用（P〈0.01）。OD-PTD融合蛋白作用于K562细胞后,细胞周期变化明显,细胞从G0/G1期到S期发生明显阻滞（P〈0.05）。结论OD-PTD融合蛋白对K562细胞有明显的抑制作用,为进一步探讨慢性粒细胞白血病新的治疗手段提供了实验依据。     

CP对恶性胸水的治疗作用及机理探讨

应用非特异性免疫佐剂厌氧棒状杆菌菌苗(CP)对122例恶性胸水病人进行治疗,使大量胸水迅速控制和消退,并末见有复发,有效率达94.3%。病人生存期延长平均为11.4月,与对照组比较有非常显著意义。20例病人注射CP24小时后癌细胞的超微结构发生明显变化。应用[~3H]-TdR和[~3H]-UR掺入法,发现CP对K562细胞有直接毒性作用.提示CP对恶性胸水抗癌活性有直接作用。     

DIRECT TOXIC EFFECT OF CORYNEBACTERIUM PARVUM ON K562 CELLS

The direct effect of Corynebacterium Parvum (CP) on cultured K562 cells was examined in vitro by means of incorporation of isotope labeled precursors and flow cytometry. CP was found to inhibit synthesis of DNA and RNA in K562 cells in proportion to the dose of CP applied. The effect of CP on K562 cells led to their unbalanced growth. It was also found that the direct effect of CP did not cause a significant change in the distribution of K562 cells in cell cycle. These results indicate that CP possessed direct toxic effect on K562 cells, which was cell cycle nonspecific. It is suggested that the mechanism by which intrapleural CP is effective for malignant pleural effusions might involve the direct toxic effect of CP on tumor cells.     

脐血血浆对K562细胞增殖抑制作用研究

目的　研究脐血血浆 (CBP)对人红白血病细胞株K5 6 2增殖影响及可能机制。方法　台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;MTT法检测CBP对K5 6 2细胞的抑制作用 ;流式细胞术分析细胞周期变化 ;免疫细胞化学方法检测增殖相关核抗原 (PCNA ,Ki 6 7)表达。结果　细胞生长曲线可见CBP作用 2 4h即观察到抑制作用 ,随时间增加 ,抑制作用更加明显 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1 )。MTT法结果与生长曲线结果相符。CBP作用 3d后 ,S期细胞数减少 ,G0 /G1 期细胞增多 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并出现G0 /G1 期凋亡细胞。CBP作用后 ,K5 6 2细胞增殖相关核抗原PCNA、Ki 6 7表达阳性程度降低 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　CBP对K5 6 2细胞增殖有明显抑制作用 ,与浓度、时间正相关 ;其机制可能与诱导凋亡、下调PCNA、Ki 6 7表达 ,抑制细胞增殖活性有关     

柚皮素对人髓系白血病K562细胞增殖的作用

目的:探讨柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株生长的影响及其作用机制。方法:MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间对K562细胞的影响;倒置显微镜下,Wight-Giemsa染色(W-G染色),免疫荧光染色和透射电镜下观察细胞形态变化、凋亡发生情况以及超微结构的变化;并用流式细胞仪分析细胞周期分布,用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:柚皮素对K562细胞增殖有明显抑制作用,作用24,48和72 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为455,225和175μmol/L;柚皮素处理组细胞在普通光镜和电镜下均见观察到显著的增殖抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0/G1期,S期细胞减少;在处理组PCNA的表达显著低于对照组。结论:柚皮素对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,这一作用可能是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡两种机制实现的。     

蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:观察蟾蜍毒素提取物对白血病K562细胞杀伤作用及对细胞周期的影响。方法:用无水乙醇、二甲基亚砜(DMSO)、PBS缓冲液浸溶中华大蟾蜍的耳后腺及皮下腺分泌物,采用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果:3种浸液均能抑制K562细胞的增殖,其抑制强度依次为乙醇浸液>DMSO浸液>PBS浸液。5 ng/ml的乙醇浸液、50 ng/ml的DMSO浸液、500 ng/ml的PBS浸液均能使K562细胞发生G2/M期阻滞。结论:蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞增殖具有明显的抑制作用,并伴有G2/M期阻滞。     

白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制

目的:探讨白藜芦醇(RES)诱导人肝癌HepG2、人慢粒K562肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制. 方法: 应用形态学方法,Annexin V荧光染色检测HepG2,K562细胞凋亡的发生,应用流式细胞术(FCM)检测细胞周期,应用四唑蓝比色法(MTT)检测HepG2,K562肿瘤细胞对,RES的药物敏感性. 结果: RES对人肝癌HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡. 凋亡细胞表现为细胞固缩, 核染色质碎裂. Annexin V荧光染色检测HepG2细胞凋亡率为33.7%,用FCM检测细胞周期明显阻止于G1期,而K562细胞凋亡率为9.97%. MTT检测表明RES对人肝癌HepG2细胞有剂量-效应关系. 但RES对人K562细胞的生长无明显的抑制作用. 结论:RES通过诱导HepG2细胞凋亡抑制肿瘤的生长,并有剂量-效应关系. 同时RES对肿瘤细胞的抑制及诱导凋亡的作用有细胞选择性.     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。