香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

深圳市淡水鱼中香港海鸥菌污染状况调查

目的了解深圳市淡水鱼受香港海鸥菌污染的状况。方法于2011年2-3月共采集深圳市2家农贸批发市场和1家商场淡水鱼共计329份,将鱼肠中、后段内容物直接涂布改良麦康凯琼脂平板,凡生化符合的同时用特异性荧光PCR确诊香港海鸥菌。结果在329份淡水鱼中共检出香港海鸥菌7份,总阳性率为2.13%,其中塘虱鱼的阳性率最高为7.50%,鳙鱼的阳性率为2.50%,草鱼的阳性率为1.22%,其它淡水鱼未检出。7株香港海鸥菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。结论深圳市场淡水鱼中香港海鸥菌的污染不容忽视,应加强对淡水鱼产品中香港海鸥菌污染的监测,及时进行食品安全的预防和预警。     

海南省2008～2011年鲜水产品香港海鸥菌污染监测

目的了解海南省鲜水产品中香港海鸥菌污染状况及海南分离株的形态、培养、生化和药敏等特性。方法2008年10月～2011年10月在海南省不同农贸市场采集监测样本,用改良头孢哌酮麦康凯平板进行分离培养,API20E、API 20NE和VITEC2GN进行生化鉴定,采用AST-GN31进行药敏测定。结果在1 656份鲜水产品和119份涂抹拭子中,分离出6株香港海鸥菌,其生化特点：氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶、硝酸盐还原和精氨酸双水解酶阳性,对糖和醇类不利用。结论海南省鲜水产品中存在香港海鸥菌污染,今后应继续加强对香港海鸥菌的监测。     

顺德地区香港海鸥型菌流行情况与耐药性规律研究

目的：对从淡水养殖鱼类、青蛙样品以及腹泻病人大便样品分离的菌株作临床常用抗生素的耐药性分析,为相关疾病的治疗提供实验依据。方法获取临床腹泻病人的新鲜大便标本和在水产品市场采集淡水鱼和青蛙样品取肠道内含物分别涂布选择性培养基,选取疑似菌落进行生化鉴定和16S rRNA 基因分子鉴定,确证为香港海鸥型菌的菌株采用纸片扩散法测定分离株对几类临床常见抗菌药物的敏感性。结果本次检测的24株香港海鸥型菌分离株对八种常用的抗生素药物表现不同程度的耐药性。蛙源株对环丙沙星、阿米卡星、头孢他啶的耐药率高于鱼源株。其中分离的11株分离株（45．8％）对3个种类及以上抗生素表现耐药,为多重耐药株。结论抗生素作为促生长剂和动物疾病防治被广泛加于动物饲料中,可能导致食源性细菌耐药性增加。人们有可能通过摄入含有香港海鸥型多重耐药株污染的食物而获得抗生素耐药性的潜在危险。     

广东省水产品中香港海鸥型菌的污染调查与耐药性检测

目的 初步了解广东省水产品中香港海鸥型菌（Laribacter hongkongensis）污染及分离株的耐药情况.方法 采用改良头孢哌酮麦康凯琼脂（CMA）作为分离培养基,以API 20NE鉴定系统鉴定结果作为确认依据;采用K-B法进行药物敏感试验.结果 222份水产样本检出15株目标菌,阳性率6.76%.其中14株分离自草鱼肠脏,1株来自鲤鱼肠脏.分离株及香港海鸥型菌模式株HKU1的药敏结果,对β-内酰胺类抗生素如氨苄西林、头孢噻酚、头孢他啶、头孢曲松等均出现耐药株,未见耐庆大霉素和阿米卡星株.结论 结果表明香港海鸥型菌在广东省的草鱼污染率最高,为17.3%（14/81）,分离株对β-内酰胺类抗生素耐药情况较严重.     

酵素菌中乳酸菌的分离鉴定

目的　对分离自酵素菌的 2株乳杆菌 (Lacotbacillus)进行分类鉴定。方法　观察实验菌细胞的形态大小 ,染色特征。葡萄糖氧化试验、氧化酶试验、触酶试验、生长因子试验、硝酸盐还原试验、葡萄糖产气试验。阿拉伯糖、葡萄糖、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、松三糖、密二糖、棉子糖、核糖、木糖、鼠李糖、甘油等糖醇类发酵产酸试验。厌氧生长试验。菌株的 15℃生长试验、4 5℃生长试验。乳酸产气试验。营养要求、底物利用、代谢途径及代谢产物检测等 ,进行表型性状的观察分析。结果　 2株乳酸菌 (Lacotbacillus)被鉴定为植物乳杆菌 (Lactobacilluaplantarum)。结论　植物乳杆菌 (Lactobacilluaplantarum)是酵素菌的主要活性菌种。     

一株蔗糖发酵阳性沙门菌的鉴定

目的 对一株不典型的沙门菌进行生化反应和遗传基因鉴定分析.方法 采用革兰染色镜检、培养基生长特性、全自动生化鉴定系统VITEK2、API20E、血清学试验、噬菌体实验、荧光PCR检测以及16S rDNA序列分析.结果 发酵蔗糖,三糖铁底层斜面均产酸(变黄),三糖铁斜面不产H2S,血清型为山夫登堡,噬菌体在O-I裂解,荧光PCR阳性,16SrDNA分析符合沙门菌定义.结论 该菌是一株发酵蔗糖,三糖铁斜面上不产H2S的山夫登堡沙门菌.     

腹泻病原菌在不同培养基中的分离检测

目的:提高腹泻致病菌的检出率.方法:将我院2001年1月～2003年11月急性腹泻患者粪便标本接种SS、MAC、4号琼脂等5种培养基,分离鉴定致病菌及药敏试验.结果:1230份粪便标本检出620株病原菌,检出率为50.4%,其中致病菌292株(48.7%),条件致病菌328株(52.9%),292株致病菌中志贺菌94株(32.19%),沙门菌44株(15%),致病菌大肠艾希菌94株(32.19%),条件致病菌的优势生长菌为肺炎克雷伯菌、粪肠球菌等.结论:志贺菌、沙门菌不是唯一引起本地急性腹泻的致病菌,应重视条件致病菌在腹泻病原学上的重要位置.     

实验室病原菌检测能力的自我评估

目的 通过国际实验动物科学协会(ICLAS)提供的盲样对本实验室微生物检测能力进行自我评估.方法 将ICLAS提供的7个盲样接种到血平板培养并纯化,依次通过革兰染色、氧化酶试验和触酶试验选择相应的梅里埃生化条上机进行鉴定.对于上述方法无法确认的样品则采用PCR和基因测序的方法进一步鉴别.结果 对7个盲样进行分析后,最终确认1号为金黄色葡萄球菌,2号为铜绿假单胞菌,3号为肺炎链球菌,4号为欣氏鲍特菌,5号为粘质沙雷菌,6号为牛棒状杆菌,7号为嗜肺巴斯德杆菌,检测结果与ICLAS提供结果一致.结论 本实验室病原菌检测质量可靠,实验人员的检测水平合格.     

空肠弯曲菌肠炎的临床研究

<正> 近年,空肠弯曲菌被认为是小儿肠炎的常见病原菌之一,已引起世界各国重视。国内1978年以来始有发现,但我省至今尚未见报道。我们自1984年4月至9月,从218例腹泻患儿中检出本病10例,报道如下。对象和方法一、对象凡入我科未经治疗的腹泻患儿,不拘年龄、病程均列为观察对象。二、方法 1.材料:取患儿新鲜粪便或用肛拭子采样,即刻保存于Cary-Blair氏运送培养基中,于12小时内划种到Camp-BAP平板培养基上。43℃孵育48小时。 2.细菌染色镜检:菌体呈海鸥、纺锤、逗点、S等形状。革兰氏染色阴性。1％甘氨酸、过氧化酶、氧化酶、硫化氢(TSI)、TTC琼脂试验、马尿酸试验均阳性。35％氯化钠试验阴性。结果一、粪便培养 218例腹泻患儿的粪便全部作空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶氏菌、致病性大肠杆菌、