胃癌及其癌前病变中细胞凋亡与细胞增殖间关系的研究

目的　通过观察胃癌及其癌前病变中细胞凋亡与细胞增殖间的关系,探讨细胞凋亡在胃癌发生中的作用．方法　利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄ ＵＴＰ 缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ） 技术及增殖细胞核抗原（ ＰＣＮＡ） 免疫组织化学染色对１０ 例正常胃粘膜、１６ 例萎缩性胃炎、３６ 例肠化生、２０ 例异型增生和５３ 例胃癌中的凋亡细胞、增殖细胞进行原位观察和比较．结果　萎缩性胃炎、肠化生、异型增生中凋亡细胞指数（１１－９ ％ ;１４－７ ％ ,８－０ ％ ） 均显著高于正常胃粘膜和 胃癌（３－５ ％ ,５－８ ％ ,ｔ ＝ ２－０５８ ～７－９０１ ,Ｐ＜ ０－０１ ～Ｐ ＜ ０－０５） ;异型增生、胃癌与肠化生相比,凋亡细胞明显减少、增殖细胞明显增多（ Ｐ＜ ０－０５） ;胃癌细胞增殖指数（４７－５ ％ ） 显著高于异型增生（３０－１ ％ ,Ｐ＜ ０－０１） ． 胃癌前病变及胃癌组织中的凋亡细胞指数与 增 殖细 胞指 数 呈显 著相 关（ ｒ ＝ ０－９６６ , － ０－８９７ ,Ｐ＜ ０－０５） ．结论　胃粘膜癌变过程中不仅存在活跃的细胞增殖,而且存在细胞凋亡异常． 高增殖能力的细胞可能通过选择而占据优势,导致胃癌的发生． 细胞凋亡与细胞增殖平衡失调在胃癌发病中可能起重要作用     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡

目的探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义.方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas 单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了SGC -7901细胞表面Bcl-2的表达情况..结果抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用. 经抗Fas单克隆抗体处理后,SGC-7901细胞表面Bcl-2蛋白表达无明显变化. .结论抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡. 抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Bcl-2表达无关.     

胃癌细胞凋亡相关基因、PCNA与细胞凋亡的关系

目的探讨细胞凋亡相关基因、增殖细胞核蛋白(PCNA)与胃癌细胞凋亡的相关性。方法采用原位末端标记法及免疫组化技术,检测115例胃癌及癌前病变患者和正常人胃黏膜上皮细胞凋亡指数bcl-2、bax、PCNA的表达。结果正常人、浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生、胃癌的细胞凋亡指数分别为(4.58±1.92)%、(10.14±2.56)%、(24.6±35.19)%、(19.35±4.04)%、(19.81±4.66)%;bcl-2蛋白表达分别为0、18.5%、20.3%、44.6%、58.5%;bax蛋白表达分别为20.4%、51.5%、55.2%、27.6%、16.8%;PCNA分别为(3.93±1.02)%、(13.58±4.65)%、(20.16±4.89)%、(24.30±4.44)%、(39.79±6.37)%、(54.79±10.6)%。结论胃黏膜癌变过程中,起初三个阶段细胞凋亡指数、bcl-2、bax和PCNA同时增加,而至萎缩性胃炎后,细胞凋亡指数、bax表达显著减少,bcl-2、PCNA表达显著增加,说明以上因素在胃癌演变过程中可能起重要作用。     

细胞凋亡与细胞增殖在人肝细胞癌中的表达和意义

目的了解人肝细胞癌中细胞凋亡的形态与分布规律，探索细胞凋亡标记率和增殖标记率与肝细胞癌组织学分级的关系。方法 对２１例人肝细胞癌和１７例慢性肝病分别作ＴＵＮＥＬ标记和ＰＣＮＡ免疫组化检测，采用图像细胞仪作阳性细胞计数。结果 （１）细胞核染色质浓缩，边聚，胞浆嗜酸性变及核周空晕与ＴＵＮＥＬ标记有极好的相关性；（２）凋亡细胞胞多呈弥散分布，以癌坏死区周围多见，包膜浸润处少见；（３）增殖细胞率和凋亡细胞     

反义寡核苷酸转染对SGC-7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨端粒酶反义寡核脱氧核苷酸（PS－ASODN）对SGC－7901胃癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导的PS－ASODN作用于SGC－7901细胞后，台盼蓝拒染法计算细胞生长抑制剂，采用半定量TRAP－银染法检测端粒酶活性，用流式细胞仪观察细胞凋亡率及细胞周期变化，采用光镜及电镜观察细胞凋亡形态。结果：终浓度为3、2及1μM的PS－ASODN对SGC－7901细胞均有抑制作用，抑制率与对照组比较，差异有显著性（P＜0．01）；PS－ASODN转染后48h，端粒酶活性明显降低（P＜0．05）。以上抑制作用呈剂量依赖性及序列特异性。流式细胞仪检测到凋亡峰，细胞受阻于G0/G1期；光镜及电镜显示典型的细胞凋亡形态改变。对照寡核苷元上述作用。结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷不但明显抑制胃癌细胞的增殖，降低端粒酶活性，而且具有促凋亡作用，对胃癌具有重要治疗价值。     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞

目的探讨抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义．方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Ｆａｓ单克隆抗体对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２的表达情况．．结果抗Ｆａｓ单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用．经抗Ｆａｓ单克隆抗体处理后,ＳＧＣ７９０１细胞表面Ｂｃｌ２蛋白表达无明显变化．．结论抗Ｆａｓ单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１细胞凋亡．抗Ｆａｓ单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Ｂｃｌ２表达无关     

肺腺癌组织的细胞增殖及其凋亡

目的探讨肺腺癌组织的细胞增殖与凋亡特点。方法应用免疫组化技术检测41例肺腺癌组织中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,同时通过TUNEL法检测肺腺癌细胞凋亡,计算PCNA增殖指数（PCNALI）和细胞凋亡指数（ALI）,并对不同临床特点肺腺癌患者的PCNALI、ALI进行比较分析。结果41例肺腺癌的PCNALI为（23.15±0.29）%,ALI为（0.21±0.07）%。不同性别、不同年龄、不同临床分期肺腺癌患者PCNALI、ALI比较差异无统计学意义（P〉0.05）,不同肿瘤大小、不同分化程度肺腺癌患者PCNALI、ALI比较差异有统计学意义（P〈0.05）。PCNALI与ALI呈正相关（r=0.53,P〈0.05）。结论肺腺癌患者的细胞增殖与凋亡受肿瘤原发灶的大小及分化程度的影响;肺腺癌PCNA表达与肿瘤的发生和分级密切相关。     

顺铂诱导人胃癌SGC-7901细胞

目的探讨顺铂对胃癌（ＳＧＣ７９０１）细胞凋亡的诱导作用，以揭示顺铂治疗胃癌的作用机制．方法选用不同剂量顺铂与人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１共同孵育不同时间后，应用光镜、电镜进行细胞形态学观察；细胞ＤＮＡ经特异性荧光染色后，用流式细胞仪分析细胞周期变化．结果细胞经顺铂处理后浓缩、深染、致密的染色质沿核膜下凝集、有凋亡小体形成．细胞周期分析Ｇ１期峰前出现典型的细胞凋亡峰，以２５ｍｇ／Ｌ顺铂作用２４ｈ，５０ｍｇ／Ｌ作用１６ｈ为例，定量分析凋亡细胞发生率分别为９３％和１４９％．结论顺铂可通过诱导人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１发生细胞凋亡达到消灭肿瘤细胞的目的．     

肺癌组织与细胞凋亡和增殖的关系

目的　探讨肺癌与细胞凋亡和增殖的关系。方法　对 38例肺癌组织及 2 1例肺部良性组织 ,应用 TUNEL 技术对细胞凋亡情况进行检测 ,应用免疫组织化学法对增殖细胞核抗原(PCNA)等进行检测 ,并对细胞凋亡和 PCNA阳性细胞进行计数 ,分别定义凋亡指数和增殖指数。结果　肺癌组织中凋亡指数 [(3.73± 2 .42 ) % ]和增殖指数 [(13.86± 15 .0 5 ) ]%均高于肺部良性组织 [(0 .77± 0 .5 0 ) %、(0 .91± 3.19) % ],P <0 .0 1。结论　细胞凋亡和 PCNA均可作为肺癌的标志物     

人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

背景端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达.因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一.目的检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡.方法用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果SGC-7901细胞有端粒酶活性表达.不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96 h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在.错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P＜0.05).结论端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性.端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行.     

siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

Galectin-3属于半乳凝素家族成员,参与细胞生长和凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润和转移等多种生理和病理过程,在多种恶性肿瘤细胞中呈高表达。目的:研究siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:合成靶向galectin-3的siRNA并转染SGC-7901细胞,以real time PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Galectin-3siRNA转染24 h后转染效率为83.8%,转染后SGC-7901细胞的galectin-3表达显著受抑,mRNA和蛋白表达量分别较空白对照组降低87.8%和90.4%(P0.01)。转染后24 h、48 h和72 h,galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞增殖抑制率分别为15.57%±1.45%、32.90%±0.76%和57.35%±1.05%,转染后72 h该组细胞凋亡率为46.17%±2.39%,均显著高于同时间点空白对照组、空脂质体组和阴性对照siRNA组(P0.01)。Galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞由化疗药物奥沙利铂诱导的增殖抑制亦较其余三组显著增加(P0.01)。结论:以siRNA干扰galectin-3表达后,SGC-7901细胞增殖减少、凋亡增加,对化疗药物的敏感性增强,表明galectin-3有望成为胃癌基因治疗的有效靶点。     

AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3表达的影响

背景：JAK2酪氨酸激酶特异性抑制剂AG490可抑制胃癌细胞生长,但目前对其作用机制还知之甚少。目的：探讨AG490对胃癌细胞株SGC-7901细胞周期、凋亡和STAT3 mRNA表达的影响。方法：以不同浓度AG490处理胃癌细胞株SGC-7901,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR法检测STAT3 mRNA表达。结果：胃癌细胞株SGC-7901经AG490作用48 h后,100μmol/L组的S期、G2/M期细胞比例显著增加（P〈0.01）,1μmol/L组和10μmol/L组仅G2/M期细胞比例显著下降（P〈0.05）。AG490作用48h后,各浓度组的细胞凋亡率均显著增加（P〈0.01）。AG490作用24 h和48 h后,各浓度组的STAT3 mRNA表达均无明显变化（P〉0.05）。结论：AG490可影响胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期并诱导细胞凋亡,但不影响STAT3 mRNA的表达。     

粘附法筛选胃癌细胞亚株

目的：筛选不同表型的胃癌细胞亚株。方法：用体外粘附法筛选对层粘素（ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｍ）有不同粘附力的ＭＫＮ－４５胃癌细胞亚株，并用Ｂｏｙｄｅｎ小室法和裸鼠接种法观察细胞亚株的体内、外侵袭转移能力。结果：经体外反复以层粘素粘附筛选，得到高粘附力的ＭＫＮ－４５Ｌｍ＾＋细胞亚株和低粘附力的ＭＫＮ－４５Ｌｍ＾－细胞亚株。Ｌｍ＾＋细胞体外对人工基膜Ｍａｔｒｉｇｅｌ的侵袭、移行能力及在裸鼠体内的成瘤性和肺转     

IL-17A在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的影响~

背景:白细胞介素-17A(IL-17A)在炎症反应中发挥重要作用。既往研究发现IL-17A基因多态性与某些亚型胃癌的发生风险增加有关。目的:探讨IL-17A在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:以免疫组化法和RT-PCR法分别检测胃癌组织、相应癌旁非癌组织以及胃癌细胞株的IL-17A表达。以不同浓度重组人IL-17A处理胃癌细胞株SGC7901,以MTT法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡,以real-time RT-PCR检测细胞中的IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达。结果:胃癌组织中IL-17A阳性细胞数较相应癌旁非癌组织显著增多(P0.05),且主要表达于炎性细胞和血管内皮细胞,在胃癌细胞株中无表达。重组人IL-17A可刺激SGC7901细胞增殖,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡,并上调其IL-6、MMP-13 mRNA表达。结论:IL-17A可直接或通过诱导炎症信号通路分子间接促进胃癌进展。     

趋化因子受体CCR7在胃癌组织和细胞株中过度表达

背景:趋化因子受体CCR7高表达与肿瘤淋巴结转移等因素密切相关。目的:检测CCR7在胃癌组织和细胞株中的表达情况,探讨CCR7在胃癌中的作用。方法:采用实时PCR技术检测30例胃癌组织及其配对癌旁组织中的CCR7 mRNA表达,RT-PCR检测人胃癌细胞株SGC-7901和AGS中的CCR7 mRNA表达。分析胃癌组织中的CCR7mRNA表达与胃癌临床病理特征间的相关性。结果:CCR7 mRNA在胃癌组织中的表达水平显著高于其配对癌旁组织(P0.05),人胃癌细胞株SGC-7901和AGS中均存在明显CCR7 mRNA表达。CCR7 mRNA表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关(P0.05)。结论:CCR7在胃癌中存在过度表达,可能参与了胃癌的进展过程。     

rmhTNF对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型的治疗作用

背景:重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)是原型TNF-α的改构体,前期实验显示其对体外培养的人胃癌细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用。目的:初步研究rmhTNF对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型的治疗作用。方法:雄性BALB/c裸鼠皮下接种人胃癌细胞株BGC-823构建移植瘤模型,随机予rmhTNF、TNF-α,5-氟尿嘧啶(阳性对照)和0.9%NaCl溶液(阴性对照)进行干预,观察各组裸鼠一般情况、移植瘤生长情况及其组织病理学改变。结果:建模裸鼠成瘤率为100%。各药物干预组移植瘤生长均明显减慢,其中rmhTNF组生长抑制最为明显,生长曲线较阴性对照组明显下移,抑瘤率显著高于TNF-α组和阳性对照组(83.1%对59.8%和50.1%,P0.01),一般情况与接种前相比无明显改变,移植瘤组织中可见较多凋亡和坏死细胞。结论:BGC-823细胞在BALB/c裸鼠皮下有良好的成瘤性。rmhTNF在体内能直接诱导胃癌细胞凋亡和坏死,对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型具有治疗作用。     

卡托普利抑制胃癌细胞生长的体外研究

背景:胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对多种肿瘤具有抑制作用,但在胃癌中尚无研究。目的:探讨卡托普利对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法:以不同浓度卡托普利作用于人胃癌细胞株AGS。采用CCK-8法检测细胞增殖率;采用DAPI染色法检测细胞凋亡表现;采用Annexin V-FITC/PI双染法、TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Transwell法检测细胞侵袭力。结果:卡托普利作用后,AGS细胞增殖抑制,凋亡增加,细胞侵袭力降低,均呈浓度和(或)时间依赖性(P0.05)。结论:卡托普利可抑制胃癌细胞株AGS增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞侵袭力,效应呈浓度和(或)时间依赖性。     

氧化砷对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的:研究三氧二化砷(氧化砷)对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用。方法:应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡的作用。结果:氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用.10μmol/L氧化砷作用24小时细胞杀伤率为24.6％ 48小时接近50％,氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质疑集.呈新月型紧贴于核膜周边.核碎裂.染色质片断化,凋亡小体形成等,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”TU-NEL染色法显示,细胞凋亡指数为1.4％～9.5％。氧化砷的细胞毒作用呈时间和剂量依赖性,且表现为细胞周期特异性,作用48小时后,SGC-7901细胞的细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从54.2％下降到17.7％ 而G2/M期细胞则从20.2％上升到63.4％,说明氧化砷主要作用于细胞周期的G2/M期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。结论:氧化砷对胃癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用.具有治疗胃癌的潜在价值。值得进一步研究     

生存素反义寡脱氧核苷酸对人胃癌细胞株凋亡的影响

背景：生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族成员之一，在多数肿瘤组织中高表达。目的：观察生存素反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株凋亡的影响。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901分为不同浓度生存素ASODN组、无关寡脱氧核苷酸（N-ODN）组和对照组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验检测生存素ASODN对SGC-7901细胞生长的影响；通过形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪分析反映细胞凋亡情况；以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）方法检测端粒酶活性。结果：生存素ASODN能抑制SGC-7901细胞生长，诱导细胞凋亡，抑制端粒酶活性。凋亡细胞形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；DNA电泳呈现凋亡特征性阶梯状条带；流式细胞仪分析显示G1期前出现亚二倍体凋亡峰。结论：生存素ASODN能诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡，抑制细胞生长及其端粒酶活性。