糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓小胶质细胞Toll样受体3的变化

目的：观察糖尿病痛性周围神经病变大鼠脊髓小胶质细胞Toll样受体3（TLR3）的变化。方法：雄性SD大鼠,采用腹腔注射链尿佐菌素（STZ）制备糖尿病痛性周围神经病变模型。取造模成功的大鼠10只作为糖尿病组（D组）,取10只同月龄腹腔注射0.9%氯化钠液大鼠为对照组（C组）。观测2组大鼠的血糖水平和行为学评分,并应用免疫荧光双标记和激光共聚焦显微镜技术比较各组脊髓背角TLR3的变化。结果：与C组比,D组血糖在注射STZ2d后显著升高;在注射STZ后14～28d机械缩足阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）降低;注射STZ后28d,D组TLR3表达显著上调并且主要与小胶质细胞共标。结论：小胶质细胞TLR3可能参与了糖尿病周围神经痛的发生。     

单关节炎诱导胶质细胞在大鼠颈、胸、腰、骶段脊髓背角的活化

目的:探讨小胶质细胞和星形胶质细胞在单关节炎大鼠颈、胸、腰、骶段脊髓背角的活化.方法:16只SD雄性大鼠随机均分为正常对照组和单关节炎组(n=8).左侧踝关节腔注射完全弗氏佐剂(complete Freund' s adjuvant,CFA)建立单关节炎模型.分别采用Hargreaves’法和von Frey纤毛测定单关节炎大鼠双侧后爪致炎前及致炎后3d的热刺激缩爪反应潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)、机械刺激抬腿反应阈值(paw withdrawal threshold,PWT).行为学测定结束后,每组取4只大鼠,灌注后取脊髓颈、胸、腰、骶段,采用免疫荧光组织化学法检测Iba-1(小胶质细胞标记物)和GFAP(星形胶质细胞标记物)在大鼠脊髓背角的表达情况.结果:单关节炎组大鼠致炎侧后爪的PWL和PWT值在致炎3d后均显著低于对照组(P＜0.01),对侧后爪差异无显著性(P＜0.05).单关节炎组大鼠致炎3d后,Iba-1和GFAP的荧光强度在颈、胸、腰段脊髓的双侧背角相较于对照组均明显增高,差异有显著性(P＜ 0.05或P＜0.01),而在骶段无统计学差异(P＜0.05),但有明显增加趋势.致炎侧和对侧脊髓背角Iba-1和GFAP的荧光强度在颈、胸、腰、骶各节段差异均无统计学意义(P＜0.05).结论:单关节致炎导致大鼠患侧后爪出现触诱发痛和热痛觉过敏,并诱导小胶质细胞和星形胶质细胞在大鼠颈、胸、腰段双侧脊髓背角的活化.     

脊髓缝隙连接细胞间通讯在糖尿病大鼠神经病理性痛维持中的作用

目的:评价脊髓缝隙连接细胞间通讯在糖尿病大鼠神经病理性痛维持中的作用。方法:雄性SD大鼠,2个月龄,体重180~220 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)方法制备糖尿病模型,注射STZ后48 h血糖>16.7 mmol/L的大鼠作为糖尿病大鼠。采用随机数字表法将16只糖尿病大鼠分为糖尿病组(D组)和甘珀酸治疗组(G组),每组8只,另取8只同月龄的雄性SD大鼠为正常对照组(C组)。G组于注射STZ后28 d鞘内注射缝隙连接阻滞剂甘珀酸25μg,1次/d,连续7 d;而D组大鼠则鞘内注射相同容量的甘珀酸溶剂。分别于注射STZ前(T1)、注射STZ后7、14、21、28、35 d时(T2~T6)测定机械缩足反应阈(PWT)。于T6时处死大鼠,取腰段脊髓组织检测Cx43的表达。结果:与C组比较,D组、G组T4~T6时PWT降低(P<0.05),T6时脊髓Cx43的表达增加(P<0.05);与D组比较,G组T1~T5时PWT无显著变化(P>0.05),T6时PWT升高(P<0.05),脊髓Cx43的表达减少(P<0.05)。结论:脊髓缝隙连接细胞间通讯可能参与糖尿病大鼠神经病理性痛的维持。     

氯胺酮对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X_4受体mRNA表达的影响

目的:研究氯胺酮对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X_4受体mRNA表达的影响.方法:雄性SD大鼠45只,体重180～220g,随机分为假手术组(S组)、对照组(C组)和氯胺酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组),每组9只.S组大鼠仅分离坐骨神经但不结扎,其余组建立坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型,K Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于CCI后3d开始至取材点每天腹腔注射氯胺酮5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg;S组和C组注射相同体积的生理盐水.各组大鼠分别于术前1d,术后3d、7d、14d、21d测定大鼠机械性痛觉过敏(MWT)和热痛觉过敏(TWL).各组均分别于CCI术后7d、14d、21d取3只大鼠,测定痛阈后处死,取L_(4～5)脊髓组织,用逆转录PCR(RT-PCR)方法测定P2X_4受体mRNA表达水平.结果:与术前及S组比较,C组、K Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组术后3d开始热痛阈及机械痛阈显著降低(P＜0.05).与C组比较,K Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组术后7d,14d,21d热痛阈及机械痛阈显著升高(P＜0.05).与S组比较,C组、K Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠脊髓P2X_4受体表达在术后7d、14d、21d均显著增加(P＜0.05);与C组大鼠比较,K Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组脊髓P2X_4受体表达明显减少(P＜0.05).结论:腹腔注射氯胺酮可抑制慢性神经痛大鼠痛觉过敏,该作用可能是通过作用于P2X_4受体介导的.     

鞘内和腹腔注射米诺环素对糖尿病性神经痛大鼠脊髓P2X4受体表达的影响

目的:评价鞘内和腹腔注射米诺环素对糖尿病性神经痛大鼠机械痛阈和脊髓P2X4受体表达的影响.方法:78只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组:Ⅰ组(正常对照),实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)用链脲佐茵素(streptozotocin,STZ)制备糖尿病模型;Ⅱ组鞘内注入10 μL生理盐水;Ⅲ组,腹腔内注入与Ⅴ组等量的生理盐水:Ⅳ组鞘内注入米诺环素;Ⅴ组腹腔注入米诺环素.各实验组从建糖尿病模型前1d起每日注入米诺环素或生理盐水,共28 d.测定各组50%PWT.注入STZ后3、7、14、21、28 d从各组随机取出3只大鼠,取腰段脊髓,测定P2X4受体表达.结果:与Ⅰ组相比,实验组均在注药后14 d后50%PwT降低;与Ⅱ组相比.Ⅳ组在注药14 d后50%PWT回升;与Ⅲ组相比,Ⅴ组在注药后各时点50%PWT无明显差异.与Ⅰ组相比,各实验组大鼠脊髓P2X4受体mRNA在注药后各时点表达量增加;与Ⅱ组相比,Ⅳ组在注药后各时点脊髓P2X4受体mRNA表达下降;与Ⅲ组相比,Ⅴ组在注药后各时点脊髓P2X4受体mRNA表达无明显差异.结论:脊髓小胶质细胞通过P2X4受体表达参与了糖尿病神经痛发生和维持,米诺环素鞘内应用可抑制P2x4受体表达,并改善了神经痛.     

丙泊酚对慢性神经痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响

目的 :研究丙泊酚对慢性神经痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响。方法 :Wistar大鼠 4 0只 ,随机分为 4组 ,Ⅰ组为正常对照 ;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组结扎左侧坐骨神经 ,术后第 7天 ,Ⅰ、Ⅱ组腹腔均注射生理盐水 5 0ml·kg 1,Ⅲ、Ⅳ组腹腔分别注射丙泊酚 5 0、75mg·kg 1( 1mgoml 1) ,共 7d ;术后第 6、10和 13天 ,使用VonFrey纤维分别测定各组动物触诱发痛阈 ,观察丙泊酚对其影响 ;随后取脊髓切片 ,观察星形胶质细胞在脊髓背角的分布。结果 :①与Ⅰ组比较 ,Ⅱ组双侧的 5 0 %缩足阈值 (PWTs)在术后第 6、10和 13d均较低 (P <0 .0 5 ) ;与Ⅱ组比较 ,Ⅲ、Ⅳ组双侧的PWTs在术后第 10、13天升高 (P <0 .0 5 )。②Ⅱ组星形胶质细胞在脊髓背角的分布密度 (AD)、平均光密度 (AOD)和积分光密度 (IOD)值显著高于Ⅰ组 (P <0 .0 1) ,Ⅲ、Ⅳ组低于Ⅱ组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1)。③与Ⅱ组比较 ,Ⅲ、Ⅳ组星形胶质细胞在脊髓背角数量、体积依次减少。结论 :慢性神经痛大鼠的脊髓星形胶质细胞被激活 ,丙泊酚可抑制激活 ,抑制程度与剂量有相关性     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤后甲基强的松龙(MP)对星形胶质细胞(AS)增殖和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 雄性SPF级10周龄大鼠48只,制成脊髓右侧半横断损伤模型,分为MP组和对照组,每组24只.术后每4 d进行1次行为学(BBB)评分.MP组通过尾静脉注射MP溶液,对照组同时注射等量生理盐水,两组大鼠分别在3 d、7 d、14 d、28 d处死,应用免疫组化技术观察GFAP的表达,并做灰度值测定和GFAP阳性细胞计数.结果 与对照组相比,MP组在损伤后21 d内行为学方面无显著性差异,在25 d后MP组优于对照组.脊髓损伤后3 d和7 d,MP组活性化AS数目明显少于对照组,14 d后无显著性差异;3 d、7 d、21 d时,MP组胶质性瘢痕中GFAP表达量均明显低于对照组,28 d时两组无显著性差异.结论 急性脊髓损伤后大剂量MP冲击疗法能减少AS活化的数目,减少胶质性瘢痕的形成,并能促进后肢功能的恢复.     

神经病理性疼痛大鼠脊髓中星形胶质细胞GFAP及FGFRs不同表达的观察

目的:观察神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠脊髓成星形胶质细胞(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)以及纤维生长因子受体家族成员1~4(fibroblast growth factor receptor 1~4,FGFR1~4)的表达变化。方法:体重180~200g的SD雄性大鼠40只随机分为2组(n=20),分别制作模型:假手术组(sham)和模型组(SNI)。术后1,3,5,7天使用von Frey纤维针测量大鼠术侧机械痛域值(mechanical pain threshold,MPT),并在相应的时间点取各组大鼠L4~L6脊髓,使用激光共聚焦检测脊髓背角星形胶质细胞GFAP表达水平以及激活状态,实时荧光定量PCR检测GFAP mRNA、FGFRs mRNA表达水平的变化情况。结果:与sham组相比,SNI组大鼠痛域值随时间下降明显,脊髓星形胶质细胞GFAP阳性细胞数和GFAP mRNA表达从术后3天起逐渐升高。FGFRs家族成员间mRNA变化存在差异:与sham组相比SNI大鼠FGFR1 mRNA表达术后第1天高。SNI组和sham组大鼠FGFR2~4 mRNA在术后5天之内维持在低水平,而SNI组大鼠在第7天显著升高,两组之间差异显著。结论:NP中脊髓星形胶质细胞GFAP的改变以及不同FGFRs mRNA的变化可能对于NP的发生与维持有重要意义。     

N-甲基D-天门冬氨酸受体2B亚型反义寡核苷酸鞘内注射对骨癌痛模型大鼠痛行为的改善作用

目的:在大鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸的镇痛效果.方法:将含2 × 105个SHZ-88大鼠乳腺癌细胞注射到SD大鼠左侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n=8).所有大鼠均于接种前1 d,接种后第3、5、7、10、14天检测痛行为学指标.骨癌痛模型制作成功的T组大鼠在接种后第14天,进一步分为鞘内注射反义寡核苷酸(TA组)、正义寡核苷酸(TS组)、生理盐水(TN组),分别鞘内注射相应剂寡核苷酸和溶媒,鞘内注射后第1、3、5天再进行行为学检测.并在最后一次行为学测定后将大鼠处死,取其L4～6脊髓组织,检测术侧的NR2BmRNA.结果:与S组和术前基础值相比.造模后第7天,T组大鼠自由行走痛行为评分显著增高(P＜0.05),机械痛缩足阈值(PWT)显著降低(P＜0.05);在鞘内给药后第3、5天,TA组大鼠自由行走痛行为评分显著降低(P＜0.05),PWT增高(P＜0.05);而TS组和TN组在鞘内注射前后无显著变化(P＞0.05);TA、TS组及TN组L4～6脊髓组织的NR2B mRNA表达均高于S组(P＜0.05,P＜0.01);鞘内注射后5 d,TA组L4～6脊髓组织的NR2B mRNA表达低于TS组和TN组降低(P＜0.01).结论:鞘内注射NR2B反义寡核苷酸能下调脊髓NR2B mRNA表达.有效改善骨癌痛大鼠的痛行为学反应.     

糖尿病早期大鼠海马和皮质星形胶质细胞的变化

目的:观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠早期(6周)海马和皮质星形胶质细胞的变化,探讨星形胶质细胞在糖尿病脑病发病中的重要作用。方法:实验在解放军第四军医大学航空航天医学系病理学实验室完成。在建模前和建模后6周时检测糖尿病大鼠的血糖、尿糖和体质量,应用免疫组织化学方法观察糖尿病组和对照组大鼠海马和皮质星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)的表达情况。结果:对照组大鼠体质量随周龄增加而明显增加;糖尿病组大鼠体质量随周龄的增加不明显。对照组大鼠的血糖始终处于大鼠血糖值正常范围,尿糖检测始终都为阴性,而糖尿病组大鼠的血糖值处于模型要求的标准之上。尿糖自建模后都呈强阳性。GFAP免疫组化标记可见糖尿病大鼠海马和皮质星形胶质细胞明显增生,且增生细胞在CA1区和CA4区最为明显。结论:糖尿病大鼠早期星形胶质细胞增生反映了神经组织对机体糖代谢紊乱的适应性重塑过程,提示神经组织改变在糖尿病脑病的发病中可能起了重要作用。     

STUDIES ON GLYCOGEN NEPHROSIS IN ALLOXAN-TREATED DIABETIC RATS

Two hundred and seven albino rats were injected subcutaneously with alloxan in doses varying from 140 to 200 mg. per cent per kilo of body weight. Fifty-nine animals which developed hyperglycemia (blood sugar levels above 150 mg. per cent) were observed for periods from 5 days to 32 weeks. Postmortem examination of the kidneys of these diabetic animals revealed glycogen deposition in the loops of Henle and convoluted tubules in 26 rats or 44 per cent. Glycogen could not be demonstrated in the glomeruli. Within the time limits of this experiment (32 weeks) no intercapillary glomerulosclerosis was observed. The following facts were revealed regarding glycogen nephrosis in alloxan diabetes: (a) Its appearance in the kidneys of the diabetic rats depended solely upon the terminal blood sugar levels of these animals. A value of 350 mg. per cent was the critical level, above which glycogen nephrosis was almost invariably demonstrable. With terminal levels below 300 mg. per cent no glycogen nephrosis was found. (b) No relationship existed between the postmortem finding of glycogen nephrosis and the initial blood sugar level, or the maximum height of the hyperglycemia attained by individual rats. (c) The results suggest that glycogen nephrosis is a reversible lesion.     

右美托咪啶对糖尿病神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用

目的:探讨腹腔注射右美托咪啶(dexmedetomidine,DEX)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠的镇痛作用以及对脊髓背角P2X3受体表达的影响。方法:建立DNP大鼠模型,检测大鼠机械痛阈;给予腹腔注射DEX(12.5、25、50μg/kg.d)后,观察DEX对DNP大鼠的镇痛作用;免疫组化法检测大鼠L4~6脊髓背角P2X3受体表达变化。结果:糖尿病大鼠建模成功后28 d,糖尿病大鼠与正常大鼠比较机械痛阈值明显下降;从建模后35 d开始,DNP大鼠连续7 d给予腹腔注射DEX后其机械痛阈值显著升高,脊髓背角P2X3受体表达显著下调;机械痛阈值升高幅度以及脊髓背角P2X3受体表达下调幅度与DEX剂量相关。结论:腹腔注射DEX通过下调DNP大鼠脊髓背角P2X3受体表达,对DNP大鼠产生镇痛作用。     

血清脂联素在2型糖尿病肾病不同时期中的变化

目的通过检测2型糖尿病肾病病人血清脂联素、尿清蛋白排泄率水平,探讨血清脂联素在2型糖尿病肾病不同阶段的变化。方法从住院的2型糖尿病病人中选取60例作为实验组,根据24h尿清蛋白排泄量分为3组：正常蛋白尿组、微量清蛋白尿组和大量清蛋白尿组,以健康体检者20例作为对照组。测定血清脂联素水平及尿清蛋白排泄量,同时观察血糖、血脂情况,分析脂联素在各组间的差异及与上述各项指标间的相关关系。结果对照组血清脂联素水平与正常蛋白尿组、大量清蛋白尿组血清脂联素水平与微量清蛋白尿组、微量清蛋白尿组血清脂联素水平与正常蛋白尿组比较,差异均有显著性（F=14.227,q=2.82～3.73,P〈0.05）。血清脂联素水平与尿清蛋白排泄量、血肌酐水平呈正相关（r=0.633、0.316,P〈0.05）,与血糖、三酰甘油水平呈负相关（r=-0.306、-0.295,P〈0.05）。结论2型糖尿病肾病病人血清脂联素水平随着尿蛋白排泄量、血肌酐水平升高而升高,且与糖脂代谢显著相关。     

糖尿病周围神经病变大鼠疼痛模型的建立

目的：探讨建立糖尿病周围神经病变大鼠疼痛模型的可行性，为糖尿病周围神经病变疼痛的发生机制及治疗提供稳定的研究基础。方法：24只SD大鼠随机分为对照组和模型组，模型组腹腔注射60mg／Kg链尿佐菌素。造模前、造模后48小时、6周取尾静脉血测血糖；造模前、造模后1、2、3、4、5、6周测定大鼠50％缩爪机械阈值（PWT）；造模后6周，透视电镜观察腓肠神经超微结构。结果：造模后48h模型组随机血糖高于16．7mmol／L比率为83．3％，与对照组比较，模型组48h,6周时血糖明显增高（P〈0．01）；造模后3周模型组PWT明显低于正常对照组（P〈0．05），5周时PWT下降达高峰（P〈0．01）；模型组腓肠神经有髓纤维普遍出现明显脱髓鞘，髓鞘板层排列紊乱、肿胀。结论：腹腔注射链尿佐菌素建立痛性糖尿病大鼠模型成功率高、简单易行、模型稳定、外周神经病变确切。