献血人群中SEN病毒感染的检测分析

目的：了解国内献血人群中一种新的比血传播病毒（SENV）感染的流行状况，方法：以SENV ORF1区核苷酸序列设计引物建立套式聚合酶链反应（nPCR）方法。采用多重PCR法对596份严自3个不同地区无偿和／或有偿献血标本进行SENV DNA（D和H亚型）检测，并对PCR阳性产物进行克隆后测序分析。结果：在体检合格的献血中，SENVDNA检出率为13．5％－21．0％在抗－HCV，HBsAg，抗－HIV，梅毒抗体阳性和ALT异常升高的献血中，SENV DNA检出率分别为35．0％、14．0％，60．0％、28．6％和31．3％，献血中SENV－D亚型等高于SENV－H亚型，不同地域献血SENV DNA检出率的差异无显性（P＞0．05），体检不合格献血（抗－HIV或抗－HCV阳性的SENV－D感染率显高于正常献血人群（P＜0．05）；6份严自不同个体和不同地域之间的SENV分离株部分基因组核苷酸的变异最高达11．9％，与标准标（AX025838）相比变异高达13．2％，结论：在国内献血人群中存在SENV感染。     

聚合酶链反应检测SEN病毒D亚型方法的建立

目的：研究建立SEN病毒D亚型（SENV－D）聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法：选择SENV－D开放读码框1高度保守序列，设计合成2对特异性引物，建立检测SENV－D感染的套式PCR方法。对327例无偿献血和职业献血者进行SENV感染的检测，并对部分PCR阳性产物进行克隆测序，结果：该方法特异性和灵敏度均较高，检测结果显示无偿献血人群SENV－D感染率为5．5％，职业献血人群为6．7％，两者无统计学差异，结论：我国广东部分地区无偿献血和职业献血人群中存在SENV－D亚型感染；建立的该方法适用于SENV感染的检测。     

一种新的早幼粒细胞白血病/维甲酸受体α融合基因S亚型变异易位

目的：逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测早幼粒细胞白血病／维甲酸受体α（PML／RARα）融合基因，筛查变异易位并对变异易位产物测序，以进一步了解变异易位的特点及临床意义。方法：取急性早幼粒细胞白血病（APL）患者骨髓，RT－PCR检测L亚型和S亚型，发现的变异易位经全自动测序仪测定其碱基序列。结果：11例PML／RARα融合基因表达的患者中，S亚型1例、L亚型8例、变异S亚型合并L亚型2例；变异S亚型产物测序得到206bp的碱基序列，检索证实是一种新的变异易位。结论：发现了一种新的S亚型变异易位，证实同一个体可有S和L二种不同亚型并存；提示PML／RARα融合基因的RT－PCR检测中，识别变异易位有重要意义。     

逆转录—半套式—聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA

目的 探讨建立一种更简便，更特异灵敏的逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）单管法。方法 采用蜡隔将RT和PCR扩增2个独立的反应体系在1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来，设计内外引物，优化反应体系及条件，使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成。结果 在60例血透析患者血清中，33例（55％）抗－HCV－IgG阳性和27例抗－HCV－IgG阴性血清用单管RT－PCR分别检出28例（85％）和3例（9％）HCV RNA阳性，并对3份阳性PCR产物作核酸序列测定。本方法的检测灵敏度为10^2拷贝／ml。结论 RT－PCR单管法在保持高灵敏度的前提下，提高了特异性，具有简单高效，杜绝外源性污染等优点。     

乙型肝炎病毒基因型和亚型与病毒感染相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型和亚型与慢性乙型肝炎（CHB）发病的关系。方法对454例CHB患者,定量PCR方法检测HBV DNA为阳性,再以型特异性引物PCR法检测HBV基因型及其亚型。结果 （1）454例HBV DNA阳性的CHB患者其中HBV B基因型68例（14.9%）;其中Ba亚型35例,Bj亚型3例,未分B亚型30例,C基因型338例（74.5%）,C基因型中C1亚型3例,C2亚型285例,未分型50例。B＋C混合基因型48例（10.6%）,均为Ba＋C2基因型;（2）B与C基因型比较,B基因型中HBeAg阴性的患者多于HBeAg阳性的患者（χ^2=17.69,P〈0.001）。CHB患者中C基因型的HBeAg阳性率明显高于B基因型（χ^2=17.025,P=0.000）。（3）定量PCR检测B基因型HBV水平低于其他基因型;C基因型HBV复制高于其他基因型。结论我国CHB患者中HBV基因型以C基因型为主;HBV基因亚型中Ba与C2亚型是主要的亚型,不同的HBV亚型间病毒载量差异有统计学意义;HBeAg阳性或HBeAg阴性的CHB患者中HBV基因型分布不同;HBV基因型和亚型的临床意义值得动态观察。     

非甲非戊型肝炎患者TT病毒感染的检测

目的 了解非甲非戊型肝炎患TT病毒感染状况。方法 采用套式PCR方法对44份临床诊断为急慢性非甲非戊型肝炎患的血清标本,进行TT病毒检测。结果 14例TTV-DNA阳性,检出率31．8％(14／44)。对TTV-DNA阳性标本的PCR产物进行克隆后测序,结果表明该序列与日本株相应位置核苷酸序列同源性为98％。结论 推测TT病毒可能为临床急慢性非甲非戊型肝炎病因之一。     

应用PCR法对临床血标本中人微小病毒B19的检测分析

目的探讨PCR法检测临床血标本中人微小病毒B19(HPV B19)的应用价值。方法根据序列比对结果,在HPV B19核苷酸相对保守区设计引物进行PCR扩增。应用双脱氧链末端终止法对HPV B19阳性PCR产物进行克隆测序。结果应用该法最终检出HPV B19的血清稀释度为10^3。序列比较表明,用本法检出的1株HPV B19阳性标本与标准株(Au株)核苷酸序列同源性为92％。检测肝癌和肝硬化患者血清标本各14例,结果HPV B19阳性分别为8例和5例。结论本法可用于HPV B19的临床诊断和流行病学调查。     

非甲～戊型肝炎患者血清HCV RNA测定及基因型分析

目的 探讨临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中丙型肝炎病毒感染状况及基因型分析。方法 应用逆转录巢式PCR(nPCR)法检测HCV RNA，并对HCV RNA核心区部分序列克隆测序分析。结果 60例临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中，应用nPCR法检测有3例阳性，检出率为5％。3个HCV北京分离株与HCV Ⅱ型核苷酸同源性为94％-96％。基因进化树分析显示3个北京分离株为HCV Ⅱ型。结论 临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中，存在少数丙型肝炎病毒感染，其基因型以HCV Ⅱ型为主。     

乙型肝炎病毒表面大蛋白与HBV DNA检测的对比研究

目的 探讨检测乙型肝炎病毒表面大蛋白（LHBs）用于临床乙型肝炎诊断的实验价值及与乙肝病毒DNA定量的相关性。方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）和荧光定量PCR法对600例HBeAg阳性血清标本进行LHBs及HBV DNA平行检测。结果 ①在600例HBsAg阳性血清中HBV DNA阳性率为76．17％（457／600），LHBs的阳性率为77．33％（464／600），二者无显著差异（Х^2=0．696，P〉0．05）；②300份HBeAg阳性血清中，HBV DNA、LHBs阳性率分别为95．0％（285／300）、96．0％（288／300）；300份HBeAg阴性血清中，HBV DNA、IMBs阳性率分别为57．33％（172／300）、58．67％（176／300），二者差异均无统计学意义（Х^2=0．725，P〉0．05；Х^2=0．253，P〉0．05）。③LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关性，相关系数r=0．948。结论 定量检测LHBs有助于了解乙型肝炎病毒复制情况。     

两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究

目的：建立简便快速准确可推广使用的检测α－地中海贫血（α-Thal)右侧失型（－α^3.7)和左侧缺失型（－α^4.2)的聚合酶链反应（PCR）方法。方法：自行研究设计两组引物。优化PCR反应条件。PCR反应产物用1％琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙啶染色,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱。结果：运用引物A′、B′、C3进行PCR,出现1700bp扩增带表示－α^3.7,出现1900bp扩增带表示α－珠蛋白基因正常或为野生型。二条扩增带同时出现表示是－α^3.7缺失杂合子。无任何扩增带表示是是东南亚型缺失纯合子。运用引物G′、E、F′进行PCR,根据出现1580bp扩增带和1180bp扩增带可诊断为－α^4.2,还可区分杂合子与纯合子。结论：本研究设计的两组引物及优化的PCR条件,可以简便准确地检测出α－Thal标本中有无－α^4.2和－α^3.7。