内皮素—1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达

为研究内皮素－1（ET－1）对培养的人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）I、Ⅲ型胶原合成的影响，应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑细胞，应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达。结果显示，加入含10^-8mol/L ET-1的培养液培养48h和72h后，HPASMC I、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强。提示ET－1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原合成增加，其调控机制之一是在转录水平下增强了I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。     

内皮素-1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达

为研究内皮素 1(ET 1)对培养的人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMC )I、Ⅲ型胶原合成的影响 ,应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑肌细胞 ,应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达。结果显示 ,加入含 10 - 8mol LET 1的培养液培养 4 8h和 72h后 ,HPASMCI、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强。提示ET 1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原合成增加 ,其调控机制之一是在转录水平上增强了I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达     

大鼠早期肝纤维化α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA及相应胶原蛋白表达的初步研究

应用Northern杂交及免疫组化方法.观察CC1_4诱导的大鼠肝纤维化形成不同阶段α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达与相应Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白ColⅠ、ColⅢ及前Ⅲ型胶原端肽(PⅢP)表达间的变化规律及其相互关系。结果表明:①肝纤维化时α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达增强,早期以α_1(Ⅲ)mRNA为主;α_1(Ⅰ)及α_1(Ⅲ)前胶原mRNA均于3～4周时呈一过性下降。②Ito细胞是肝纤维化过程中产生Col Ⅰ、ColⅢ及PⅢP的主要来源,肝细胞亦具有一定的合成ColⅢ及PⅢP的能力。③应用Northern杂交技术检测前胶原mRNA表达,能从基因水平了解肝内胶原含量的变化,能更敏感地反映肝纤维化的倾向。     

内源性一氧化碳对低氧大鼠肺动脉胶原代谢的影响

探讨内源性一氧化碳 (CO)对低氧大鼠肺动脉胶原代谢的作用及其机制。采用常压低氧大鼠肺动脉高压模型 ,观察血红素加氧酶 (HO)抑制剂锌原卟啉 9(ZnPP 9)对肺动脉平均压 (PAMP)和肺组织匀浆碳氧血红蛋白 (Hb CO)含量的影响 ,并用免疫组织化学和核酸原位杂交法分别观察Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达和肺动脉Ⅲ型前胶原[Proα1 (Ⅲ )胶原 ]mRNA、间质性胶原酶 (MMP 1)mRNA、金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP)mRNA表达的变化。结果发现ZnPP 9使低氧大鼠PAMP明显升高 ,肺组织匀浆CO含量明显降低 ;ZnPP 9显著促进低氧大鼠肺动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达 (P <0 0 1)和Proα1 (Ⅲ )胶原mRNA表达及MMP 1mRNA与TIMP 1mRNA表达 (P <0 0 1)。内源性CO可能通过抑制胶原蛋白的合成对低氧大鼠肺动脉胶原代谢发挥重要的调节作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成的作用

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化及胶原合成中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为2组(1)对照组;(2)IGF-Ⅰ组培养液中加入终浓度分别为25、50、100、200μg/L的IGF-Ⅰ。用倒置显微镜观察细胞形态变化,以RT-PCR检测HK2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰα和胶原ⅢαmRNA表达的变化。ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅰ的浓度。结果IGF-Ⅰ刺激使HK2细胞由椭圆形变为梭形。不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2细胞48h后,α-SMA、胶原Ⅰα和胶原ⅢαmRNA水平显著升高(P<0.05);ELISA结果显示,100及200μg/LIGF-Ⅰ组中HK2细胞分泌的胶原Ⅰ显著增加(P<0.05)。结论IGF-Ⅰ在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进其胶原的合成。     

ADM和ADT对肺动脉平滑肌细胞胶原合成及磷酸化ERK1/2表达的影响

目的: 检测不同浓度的肾上腺髓质素(ADM)和肾上腺加压素(ADT)对培养的Wistar大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达的影响,探讨PASMCs增殖过程中ERK途径是否被激活。方法: 取健康雄性Wistar大鼠,行大鼠远端PASMCs分离并进行原代培养,采用小鼠抗人平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定;在培养基内分别加入10^-7 mol/L ADM或ADT培养72 h 后加入兔抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原抗体和兔抗大鼠p-ERK1/2抗体,0.01 mol/L PBS作阴性对照,FITC标记山羊抗兔IgG为Ⅱ抗,免疫荧光法观察PASMCs内Ⅰ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达。Western blotting检测10^-7mol/L、10^-8mol/L和10^-9 mol/L ADM或ADT对p-ERK1/2蛋白表达的影响。结果: 经平滑肌α-actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定,其纯度达97%。10^-7 mol/L ADM可抑制PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达(P<0.05,P<0.01);10^-7 mol/L的ADT刺激后大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2的表达增强(P＜0.05,P<0.01)。Western blotting结果显示ADM可呈剂量依赖性抑制p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05);而ADT也可呈剂量依赖性促进p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论: ADM可抑制大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,而ADT可促进PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原及p-ERK1/2表达,提示PASMCs增殖过程中ERK通路被激活,ADM和ADT可能通过ERK1/2信号通路来调节PASMCs增殖。     

成纤维细胞饲养层饲养人角朊细胞的机制研究

目的 探讨人成纤维细胞(HFB)是否可作为饲养层支持人角朊细胞(KC)的生长.方法 分离培养人真皮FB,用丝裂霉素C处理制成饲养层,应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白的表达;在FB饲养层上接种人KC,观察其促进KC贴壁、生长、移行及分化的作用;并设置NIH3T3细胞饲养层为对照组,在其上接种人KC,观察KC贴壁数和膜片完全融合时间.结果 FB饲养层Ⅰ型前胶原mRNA的表达有所增加(P＜0.05)、Ⅲ型前胶原mRNA的表达无明显变化,抗Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白抗体阳性;以适宜密度接种的成纤维细胞饲养层,KC贴壁、生长和分化良好;二种饲养层KC贴壁数和膜片完全融合时间无差异.结论 人真皮FB饲养层能够分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原,促进人KC生长并形成复层细胞.     

槲皮素联合放射线抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成

目的比较槲皮素、放射线以及二者同时干预对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响。方法体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,MTT法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞干预前后的生长曲线;比色法检测细胞上清液中羟脯氨酸含量;免疫细胞化学检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原;RT-PCR及Real-time PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达。结果①槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;②槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平;③放射线联合槲皮素作用后抑制作用更明显。结论槲皮素可增强放射线对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的抑制效应,其作用机制之一是抑制了TGFβ-1基因的转录。     

LPS诱导心肌成纤维细胞HMGB1的释放与Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白分泌的相关性研究

目的:探讨小鼠心肌成纤维细胞(CFs)在LPS刺激下高迁移率族蛋白(HMGB1)释放与Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的相关性。方法:从7～14 d BALB/c小鼠心脏中分离培养心肌成纤维细胞,分别用LPS(500 ng/mL)刺激0,6,12,24,36,48 h后收取细胞及其上清。采用RT-PCR检测HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,通过Western blot检测细胞及其培养上清中HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;采用免疫荧光分析HMGB1在细胞内的定位。结果:LPS刺激CFs 6 h时HMGB1以及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平无明显变化,12、24、36、48 h后HMGB1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量均增加。Western blot检测发现,LPS刺激CFs 24 h后细胞上清可检测到HMGB1蛋白,且细胞中HMGB1的表达呈现先增加后降低的现象。免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着从细胞核到细胞质的转位过程。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的Western blot结果均呈现增加趋势。结论:LPS刺激CFs后HMGB1由细胞核转移到细胞质并可主动分泌到胞外,其作用呈现一定的时间依赖性。与心肌纤维化密切相关的Ⅰ、Ⅲ型胶原在LPS刺激后表达量明显增加,提示内源性HMGB1的定位及分泌可能与脓毒症引起的心功能紊乱后期的心肌纤维化可能有一定的关系。     

核心蛋白聚糖对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为:(1)阴性对照组;(2)10μg/LTGFβ1组;(3)TGFβ1(10μg/L) (10μg/L)核心蛋白聚糖组;(4)TGFβ1(10μg/L) (100μg/L)核心蛋白聚糖组。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的影响。结果:加入刺激因子48h后,(1)组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致,大部分仍为椭圆形;(2)组细胞形态发生明显的变化,大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形;(3)和(4)组,梭形样细胞明显减少,尤其是(4)组梭形样细胞减少更为明显。(2)组HK-2细胞Ⅰ型胶原mRNA表达上升到(1)组的27.86倍,Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到(1)组的21.83倍。(3)和(4)组与(2)组相比,Ⅰ型胶原mRNA的表达分别下降了36.39%、53.36%,Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35%、47.96%(P<0.05),但仍未下降到正常水平。结论:核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一。     

中介素抑制高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织胶原生成

 目的:研究中介素（IMD）对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织胶原生成和沉积的调节作用及其机制。方法: 健康雄性SD大鼠20只,随机分为对照组（n=7）、分流组（n=7）和分流+IMD组（n=6）。对后2组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术。8周后,对分流+IMD组大鼠,皮下埋微量渗透泵持续给予IMD 1.5 μg·kg-1·h-1。继续饲养2周后,比较各组大鼠肺动脉平均压（mPAP）、肺中、小动脉相对中膜厚度（RMT）,肺组织羟脯氨酸、Ⅰ和Ⅲ 型胶原、骨形成蛋白-2（BMP-2）含量和I、III型前胶原mRNA表达水平。结果: 与对照组相比,分流组大鼠mPAP明显上升,肺中、小动脉RMT明显增加,肺组织羟脯氨酸和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显增多,Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达上调,BMP-2含量明显增多。IMD则使分流大鼠肺动脉压力明显回降,肺血管结构改变缓解,胶原沉积减少,BMP-2含量降低,Ⅰ、Ⅲ 型前胶原mRNA表达下调。结论: IMD可通过抑制高肺血流大鼠肺组织胶原生成和沉积,缓解高肺血流性肺动脉高压和肺血管结构重构形成,该作用可能与BMP-2途径有关。     

5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化

目的探讨5-氟尿嘧啶对TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法原代培养人肝内胆管上皮细胞,角蛋白19荧光染色鉴定;细胞分为:对照(normal)组,TGF-β1(TGF-β1)组,5-氟尿嘧啶(TGF-β1+5-FU)组;免疫荧光染色观察CK-19、E-cadherin、vimentin和α-SMA标记蛋白;Western blot检测细胞标记蛋白及TGF-β1表达量;Real-time PCR检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量。结果原代培养的人肝内胆管上皮细胞呈多边形或者锥形,CK-19荧光染色为胞质着色;TGF-β1诱导72 h后,胆管上皮出现间质化表现,与正常组比较,vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显增强(P0.05),CK-19和E-cadherin表达显著减弱(P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量显著升高(P0.05);5-FU抑制胆管上皮间质化,与TGF-β1组比较,CK-19和E-cadherin表达增强(P0.05),vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显减弱(P0.05),TGF-β1 mRNA和Ⅲ型胶原mRNA含量明显降低(P0.05)。结论 5-FU通过下调TGF-β1的表达抑制胆管上皮细胞间质化。     

内源性一氧化碳对低氧大鼠肺动脉转化生长因子-β3和Ⅰ型胶原表达的影响

目的:探讨内源性一氧化碳(CO)对低氧大鼠肺动脉胶原代谢的作用及其机制。方法:采用常压低氧大鼠肺动脉高压模型,观察血红素氧合酶(HO)抑制剂锌原卟啉-Ⅸ(ZnPP-Ⅸ)对肺动脉平均压(PAMP)和肺组织匀浆碳氧血红蛋白(HbCO)含量的影响,并用免疫组织化学和核酸原位杂交法分别观察ZnPP-Ⅸ对肺动脉转化生长因子-β₃(TGF-β₃)、Ⅰ型胶原蛋白的表达和肺动脉TGF-β₃mRNA、Ⅰ型前胶原mRNA和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达的影响。结果:ZnPP-Ⅸ使低氧大鼠PAMP明显升高,肺组织匀浆CO含量明显降低;ZnPP-Ⅸ能促进TGF-β₃蛋白表达和TGF-β₃mRNA表达,显著促进低氧大鼠肺动脉Ⅰ型胶原蛋白表达和Ⅰ型前胶原mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达。结论:内源性CO可能通过抑制TGF-β₃mRNA和TGF-β₃蛋白表达而抑制胶原蛋白的合成,促进胶原的降解,从而对低氧大鼠肺动脉胶原代谢发挥重要的调节作用。     

低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C α mRNA表达的影响

目的：探讨低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C(PKC)αmRNA表达的影响。方法：应用原位杂交技术了大鼠不同节段肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKCαmRNA的分布及低氧对在体和离体肺动脉平滑肌细胞及内皮细胞PKCαmRNA表达的影响。结果：正常大鼠各级肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,腺泡内肺动脉平滑肌细胞中的表达明显高于肌型肺动脉（P＜0．01）,低氧14d和28d肌型动脉和腺泡内肺动脉内皮细胞的表达均明显增高（P＜0．01）,腺泡内腺动脉平滑肌细胞的表达较对照组明显升高（P＜0．01）,低氧14d肌型肺动脉平滑肌细胞表达升高不明显,但低氧28d明显升高（P＜01）,正常条件下离体培养猪肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,低氧1h对其表达无明显影响,48,72h表达明显升高,以72h升高最显著（P＜0．001）,结论：低氧可促进肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKC amRNA 的表达,而以腺泡内肺动脉平滑肌细胞的变化最明显,PCKα在低氧性肺动脉高压的形成中可能起一定作用。     

普伐他汀对人Ⅰ型胶原α 1(Ⅰ)链启动子活性调控的研究

目的研究普伐他汀人Ⅰ型胶原α1(Ⅰ)链启动子活性的调控,从转录水平上了解普伐他汀对Ⅰ型胶原合成的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代、传代培养.构建含人α 1(Ⅰ)前胶原基因5'侧翼序列-2.5kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phCOL2.5,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT-ELISA测定普伐他汀对重组体的作用.结果设对照组的CAT值为1,普伐他汀组的CAT值为0.62±0.04,普伐他汀能明显抑制Ⅰ型胶原α1(Ⅰ)启动子的活性.结论普伐他汀可以在转录水平上调节人α1(Ⅰ)前胶原基因表达.     

止痒软疤擦剂对人成纤维细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的 研究止痒软疤擦剂对人成纤维细胞生物学行为的影响，探讨其对瘢痕形成的抑制作用及其可能机制。方法采用梯度浓度的止痒软疤擦剂对体外培养的人皮肤成纤维细胞进行干预，观察干预后成纤维细胞的组织学改变，并以MTF法检测细胞增殖状态，ELISA法检测TGF-β1的蛋白表达水平，RT—PCR法检测干预后成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果与正常组比较，1：800至1：200各稀释度干预条件下人成纤维细胞的增殖均被显著抑制，1：800稀释度干预后成纤维细胞Ⅲ型前胶原mRNA表达显著降低，TGF-β1的蛋白表达明显升高。结论止痒软疤擦剂可通过抑制人成纤维细胞增殖，并在转录水平下调Ⅲ型前胶原mRNA表达，减少细胞外胶原的沉积，从而减少和／或减轻瘢痕增生的发生。     

槲皮素抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞T型钙通道的表达

目的: 通过观察原代培养的人脐动脉平滑肌细胞在内皮素(ET-1)作用下对T型钙通道(TCC)的影响,进一步探讨槲皮素(Que)对心血管的保护作用。方法: 原代培养人脐动脉平滑肌细胞,经鉴定于2-3代用于实验。将细胞随机分成对照组、Que组、 模型组和实验组。对照组:不加入任何药物;Que组:加入Que 80 μmol/L培养24 h模型组:加入100 nmol/L ET-1培养24 h;实验组:加入Que培养1 h后,再加入100 nmol/L ET-1共同培养24 h,其中Que的浓度为20、40、80 μmol/L。采用RT-PCR和Western blotting检测TCC的主要亚基α_1G在mRNA和蛋白水平的表达。利用全细胞膜片钳技术,检测TCC电流(I_CaT)。结果: 模型组α_1G mRNA和蛋白的表达均强于对照组和实验组(P＜0.05),模型组I_CaT密度明显大于对照组和实验组(P＜0.01),而对照组和Que组的实验结果无明显差别(P＞0.05)。结论: ET-1诱导人血管平滑肌细胞中TCC的表达和I_CaT的增强,Que能抑制这种增强效应。这可能是Que发挥保护心血管功能的机制之一。     

索拉非尼抑制人肝星状细胞胶原合成

目的: 研究索拉非尼(sorafenib)对人肝星状细胞胶原合成的影响。方法: 应用人肝星状细胞株LX-2进行体外研究,采用 -脯氨酸掺入法测定胶原的合成,采用免疫细胞化学法检测I型胶原蛋白表达,采用real-time PCR法测定I型胶原α1 mRNA表达。结果: 免疫细胞化学研究显示血小板源性生长因子(PDGF)刺激可引起LX-2细胞胶原合成增加,10.0 μmol·L^-1索拉非尼作用于LX-2细胞 24 h能明显抑制I型胶原蛋白的合成。无论有无PDGF的刺激,索拉非尼均呈剂量与时间依赖性地抑制LX-2细胞胶原合成(P<0.01);在10.0 μmol·L^-1浓度下,索拉非尼作用于LX-2细胞 12 h、24 h和48 h对胶原合成的抑制率为22.69%、37.52%和71.74%。索拉非尼剂量依赖性地抑制PDGF诱导的I型胶原α1 mRNA表达上调;在2.5 μmol·L^-1、5.0 μmol·L^-1和10.0 μmol·L^-1 索拉非尼作用下,I型胶原α1 mRNA表达较PDGF刺激组分别下调58.66%、 67.06%和81.64%。结论: 索拉非尼在体外能抑制人肝星状细胞胶原的合成,抑制I型胶原的表达,有可能成为一种新型的治疗肝纤维化药物。     

埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的研究新型ATP敏感性钾（KATP）开放剂埃他卡林（IPT）对缺氧诱导原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1（TGF—β1）mRNA表达的影响。方法分离3～4级人肺小动脉,按照组织贴块法原代培养人肺动脉平滑肌细胞,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RQ-RT—PCR）技术检测细胞TGF—B,mRNA表达情况。结果缺氧使原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF—β1 mRNA表达增加;相同条件下,在缺氧的同时,分别在培养基中加入IPT 10^-7、10^-6、10^-5 mol·L^-1,IPT呈浓度依赖性地抑制细胞TGF—β1 mRNA表达;加入IPT 10^-5 mol·L^-1前30min,预先加入格列本脲（GLI）10^-7、10^-6、10^-5 mol·L^-1,GLI呈浓度依赖性地拮抗IPT的作用。结论IPT通过激活细胞KATP通道,浓度依赖性地抑制缺氧诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1 mRNA表达增加。     

miR-2116-3p在人增生性瘢痕中的表达及作用

背景：目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,Ⅰ型胶原与增生性瘢痕成纤维细胞密切相关,猜测miR-2116-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的：探讨miR-2116-3p在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法：收集新疆医科大学第一附属医院6例患者的增生性瘢痕组织与6例患者重睑术后正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-2116-3p与Ⅰ型胶原的表达。取增生性瘢痕组织,原代培养第3-6代成纤维细胞,分为阴性对照组、miR-2116-3p模拟物组和miR-2116-3p抑制物组,分别转染对应的序列,用CCK-8法与EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR法与Western blot法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α平滑肌肌动蛋白的基因与蛋白表达,双荧光素酶实验验证其靶向结合。结果与结论：(1)增生性瘢痕组织中miR-2116-3p的mRNA表达量低于正常皮肤组织(P <0.01),Ⅰ型胶原的mRNA表达量低于正常皮肤组织(P <0.01);(2)转染后24,48,72 h,与阴性对照组比较,miR-21...