PI3K／AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tea8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K／AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tea8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002（5μmol／L,10μmol／L,20μmol／L,40μmol／L）处理Tea8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间（24h、48h、72h、96h）下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tea8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tea8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大（P〈0．01）。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tca8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)处理Tca8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间(24h、48h、72h、96h)下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tca8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大(P<0.01)。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

叶酸受体在食管癌细胞中的表达及其与食管癌生物学行为的关系

目的研究PI3K/AKT信号通路靶向抑制剂LY294002对食管癌细胞EC109中FR的表达的影响,从而了解食管癌生物学行为与叶酸受体的关系。方法将LY294002作用于食管癌细胞株EC109,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测食管癌细胞FR的表达。结果随LY294002浓度的增加及作用时间（12h、24h）的延长,实验组EC109细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关。LY294002干预食管癌细胞24小时后,实验组叶酸受体表达的表达较对照组明显降低。结论阻断PI3K/AKT信号通路可以改变食管癌细胞株EC109中FR的表达,并能明显抑制细胞增殖,其机制可能与其抑制AKT磷酸化,从而改变食管癌细胞的生物学行为有关。     

LY294002对人胃癌HGC-27细胞增殖的影响

目的探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对胃癌HGC-27细胞增殖的影响。方法用不同浓度(0、10、20、40μmol.L-1)的LY294002对细胞进行干预至不同的时间(20、40、60 h),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪(PI染色)检测细胞周期。结果 LY294002作用于HGC-27细胞后,不同浓度的LY294002均对人胃癌HGC-27细胞具有明显的抑制生长作用,并随着剂量的增加而逐渐增强(P=0.000);当LY294002浓度为40μmol.L-1时,LY294002对HGC-27细胞的抑制作用随着培养时间的延长而逐渐增强(P=0.000)。细胞周期分析显示LY294002作用60 h后,呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,G0/G1期细胞比例逐渐上升,S期细胞比例逐渐下降,G2/M期细胞比例逐渐增加,细胞周期发生G0/G1期、G2/M期阻滞。结论 LY294002作用于HGC-27细胞后,能够抑制细胞增殖和细胞周期的进展。     

MicroRNA-141通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进PCOS卵巢颗粒细胞增殖的机制研究

目的　研究microRNA-141（miR-141）对卵巢颗粒细胞增殖的影响,并探讨其在多囊卵巢综合征（PCOS）发生发展中的作用机制。方法　采用实时荧光定量PCR检测20例PCOS患者的卵巢组织、20例对照组的正常卵巢组织、人卵巢颗粒细胞KGN及人正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-141 mRNA表达水平;KGN细胞分为miR-141 minics组、LY294002+miR-141 minics组、雷帕霉素（rapamycin）+miR-141 minics组、NC组、对照组。采用MTT法和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆形成能力,采用Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达水平。结果　PCOS卵巢组织miR-141 mRNA表达水平显著高于正常卵巢组织,人卵巢颗粒细胞KGN miR-141 mRNA表达水平高于人正常卵巢上皮细胞IOSE80（P＜0.05）;miR-141 minics组、LY294002+miR-141 minics组及rapamycin+miR-141 minics组miR-141 mRNA表达水平均高于NC组和对照组（P＜0.05）;LY294002+miR-141 minics组及rapamycin+miR-141 minics组转染后24、48、72、96 h OD值和克隆形成率均低于miR-141 minics组,但高于NC组和对照组（P＜0.05）;LY294002+miR-141 minics组转染后p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平低于miR-141 minics组,但高于NC组、对照组（P＜0.05）。rapamycin+miR-141 minics组转染后p-mTOR蛋白表达水平低于miR-141 minics组,高于NC组、对照组（P＜0.05）。结论　miR-141可通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt (PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义.方法 将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2 h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100 μmol/L预处理2 h+二氮嗪100μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h).Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平.结果 与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).结论 H-R损伤引起MMECs凋亡.线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用.     

1,25(OH)2D3对人肾小球系膜细胞增殖及 mTOR/p70s6K表达的影响

摘要：目的 探讨 1,25-二羟基维生素 D3[1,25(OH)2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对 mTOR/p70s6K 信号通路的作用。方法 体外培养人肾小球系膜细胞, 取传代培养至 3~7 代细胞分为 4组： 正常对照组（加含 5%胎牛血清 DMEM 培养基）, VD 组[加 1,25(OH)2D3 10-8 mol/L], R 组（加雷帕霉素 5 mg/L）, R+VD 组[加雷帕霉素 5 mg/L 及 1,25(OH)2D3 10-8 mol/L], 干预 48 h。采用细胞增殖与活性检测试剂盒 CCK-8 检测细胞增殖情况, 流式细胞术检测细胞周期时相分布, 免疫荧光法检测细胞中 mTOR、 p70s6K 的表达情况。结果 正常对照组、 VD 组、 R 组、 R+VD 组：（1） 吸光度值 （A450） 依次降低, 组间多重比较差异均有统计学意义 （均 P < 0.05）; 抑制率（IR） 依次升高。（2） G1期细胞比例依次增加, S 期、 G2/M 期依次减少, 增殖指数 （PI） 依次降低, 除 R 组与 VD 组比较差异无统计学意义外, 其余组间多重比较差异均有统计学意义。（3） 系膜细胞中 mTOR、p70s6K 蛋白表达强度均依次降低, 除 R 组与 VD 组比较差异无统计学意义外, 其余组间多重比较差异均有统计学意义。结论 1,25(OH)2D3可显著抑制人系膜细胞增殖, 且其可能通过抑制 mTOR/p70s6K 信号通路调控肾小球系膜细胞增殖。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

EGCG 对5-氟尿嘧啶用于食管癌 CaEs-17细胞增加疗效的实验研究

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）体外增强5-氟尿嘧啶（5-Fu）对食管癌CaEs-17细胞化疗敏感性的作用,并探讨可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、5-Fu 组（培养液中5-Fu 终浓度为6μmol/L）,EGCG组（培养液中EGCG终浓度为20 mg/L）、联合组（培养液中EGCG终浓度为20 mg/L,5-Fu浓度为6μmol/L）,4组作用24 h,CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率,金氏公式评价二药的协同效果;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞侵袭力;免疫印迹法检测突变型P53（mtP53）蛋白表达水平。结果 EGCG、5-Fu均可抑制CaEs-17细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力;EGCG、5-Fu均可阻滞细胞于G0/G1期,并能下调mtP53蛋白表达水平（ P ＜0．05）,二药联用上述作用效果更为显著（ P ＜0．01）。结论 EGCG能够增强5-Fu对食管癌CaEs-17细胞的化疗敏感性,这种作用部分是通过下调mtP53蛋白实现的。     

岩大戟内酯B对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用

目的探讨岩大戟内酯B(JB)对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用及可能机制。方法采用不同浓度的JB处理卵巢癌Skov3细胞48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Skov3细胞的增殖抑制率,Hoechst法检测Skov3细胞凋亡指数,Western blot检测Akt、P-Akt(Ser473)、Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白水平。结果 0.1,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的JB可呈剂量依赖的方式抑制Skov3细胞的增殖,IC50为5.28μmol/L;20.0μmol/L JB和30.0μmol/L LY294002(PI3K抑制剂)均可增加Skov3细胞凋亡指数,降低P-Akt(Ser473)/Akt水平,增加促凋亡基因(Bax、Caspase-3)的蛋白水平,降低抑制凋亡基因(Bcl-2)的蛋白水平,且均与对照组有显著差异;而LY294002可增强JB的效应,且与JB组有显著差异。结论 JB可抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路和诱导死亡受体表达来发挥抗肿瘤作用的。     

脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的 探讨脂联素(Adiponectin,ADPN)对高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMCs,human Mesangial Cells) 增殖及氧化应激水平的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用.方法 ①体外培养HMCs:①将HMCs随机分为正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0 mmol/L葡萄糖+2.5 μg/ml脂联素),分别培养24、48、72 h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组不同时间点HMCs的增殖情况.②将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 后运用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中MDA及SOD的含量.③再将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 h,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定HO-1 mRNA的表达,观察细胞氧化应激指标变化.结果 ①24 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖无统计学差异(P>0.05),48、72 h两组比较,高糖组细胞增殖明显受抑制(P<0.05).加入脂联素促进细胞增殖,与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24、48、72 h高糖组MDA含量均升高,SOD含量及HO-1 mRNA的表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05).加入脂联素后,观察上述氧化应激指标均得到明显改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论长期高糖刺激抑制人肾小球系膜细胞增殖,外源性加入脂联素可促进细胞增殖.高糖组均引起氧化应激指标升高,加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激水平,提示其对细胞起保护作用.     

人参皂苷Rh2与P13K/AKT信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响

目的：研究人参皂苷Rh2（GensenosideRh。）与磷脂酰肌醇-3-激酶／丝苏氨酸蛋白激酶（P13K／AKT）信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响。方法：试验分为对照（空白培养液）组、人参皂苷Rh2（80μmol／L）组、LY294002（50gmol／L）组与人参皂苷Rh2（80gmol／L）＋LY294002（50gmol／L）组。人参皂苷Rh：与LY294002体外作用于人乳腺癌细胞MCF7／Adr,Westernblot法检测细胞基质金属蛋白酶（MMP）2、P-糖蛋白（P-gP）、丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）蛋白表达;黏附试验观察细胞与基底膜的黏附力,Transwell法观察细胞侵袭能力和迁移能力。结果：与对照纽比较,人参皂苷Rh2组、LY294002组与人参皂苷Rh2＋LY294002组p—AKT、P—gP、MMP．2蛋白表达显著减弱,细胞与基底膜的黏附力、细胞迁移能力与侵袭能力显著减弱（P〈0．05）;人参皂苷Rh2＋LY294002组与人参皂苷Rh2组、LY294002组比较以上指标差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：抑制P13K／AKT信号通路可有效降低MCF7／Adr侵袭迁移能力,P13K／AKT通路是调控乳腺癌侵袭迁移的重要信号通路之一。     

血管紧张素-（1-7）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的观察血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化的影响。方法将35株体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株EC（HB2Y-1）随机分为对照组9株,低糖组6株,高糖组7株,高糖＋Ang-（1-7）10-6mol/L组6株及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组7株。采用免疫化学染色检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果高糖组细胞α-SMA表达明显高于对照组（P〈0.01）;与高糖组相比,高糖＋Ang-（1-7）10^-6mol/L组及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组α-SMA阳性细胞率明显下降（P〈0.01）,但高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组下调幅度较低。结论Amg-（1-7）呈剂量依赖性抑制高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化。     

LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR的凋亡及细胞周期的影响研究

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对多药耐药急性白血病细胞株HL60/VCR凋亡与细胞周期的影响及可能机制。方法:取耐长春新碱(VCR)的HL60/VCR多药耐药急性白血病细胞株分为未加药的对照组及加入不同浓度的LY294002(其终浓度为1.0、2.5、5.0、10μmol.L-1)组,MTT法检测2种细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期调控分子CyclinD1mRNA表达。结果:与对照组比较,LY294002可明显降低HL60/VCR对VCR的IC50(P<0.05),且与剂量相关;LY294002可显著增加HL60/VCR细胞凋亡率,阻滞细胞于G0/G1期,降低HL60/VCR细胞的Bcl-2、CyclinD1mRNA的表达(P均<0.05)。结论:LY294002可能是通过影响Bcl-2及CyclinD1基因的表达,从而促进HL60/VCR细胞凋亡及抑制细胞增殖。     

木犀草素对肝星状细胞迁移和增殖的影响

目的:研究木犀草素对肝星状细胞迁移的影响。方法:体外培养肝星状T6(HSC-T6)细胞,细胞计数Kit8(CCK-8)法检测0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞增殖的影响;通过划痕实验、Transwell实验观察0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法检测木犀草素对细胞外信号调节激酶(ERK)5蛋白磷酸化水平的影响。结果:20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞划痕的修复(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞穿膜(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制细胞中由血清诱导的去磷酸化(p)-ERK5表达(P<0.05)。结论:木犀草素呈浓度依赖性抑制HSC-T6细胞的增殖和迁移,其机制可能与抑制ERK5蛋白磷酸化水平有关。     

Activation of phosphoinositide 3-kinase in response to high glucose leads to regulation of reactive oxygen species-related nuclear factor-kappaB activation and cyclooxygenase-2 expression in mesangial cells

Hyperglycemia causes glomerular mesangial cell proliferation and increases matrix synthesis, contributing to early diabetic glomerulopathy. Immunohistochemical and functional correlations of renal cyclooxygenase-2 in experimental diabetes have been identified. However, the role of cyclooxygenase-2 in early diabetes-induced mesangial cell proliferation remains unknown. The authors tested the hypothesis that hyperglycemia modulates an intrarenal cyclooxygenase-2 expression, which might mediate the mesangial cell proliferation via a possible phosphoinositide 3-kinase/Akt pathway. Expression of cyclooxygenase-2, but not cyclooxygenase-1, could be induced in mesangial cells cultured under high glucose. Antioxidants (pyrrolidine dithiocarbamate and N-acetyl-l-cysteine) and phosphoinositide 3-kinase inhibitors [2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-1(4H)-benzopyran-4-one hydrochloride (LY294002) and wortmannin] effectively inhibited this high glucose-induced response. Moreover, high glucose markedly triggered the activation of phosphoinositide 3-kinase and Akt in mesangial cells, suggesting that a phosphoinositide 3-kinase/Akt pathway is involved in the high glucose-induced responses. Phosphoinositide 3-kinase inhibitors could also effectively attenuate the high glucose-triggered intracellular reactive oxygen species generation and nuclear factor-kappaB activation. Likewise, blocking the phosphoinositide 3-kinase or Akt activity with the dominant-negative vectors DN-p85 or DN-Akt, respectively, also greatly diminished the high glucose-triggered reactive oxygen species generation and nuclear factor-kappaB activation. Treatment of mesangial cells with LY294002 and cyclooxygenase-2 inhibitors [N-[2-(cyclohexyloxyl)-4-nitrophenyl]-methane sulfonamide (NS398) and aspirin] effectively inhibited the high glucose-induced mesangial cell proliferation. These results suggest that high glucose may trigger the reactive oxygen species-regulated nuclear factor-kappaB activation and cyclooxygenase-2 expression and cell proliferation in mesangial cells through a phosphoinositide 3-kinase-dependent pathway.     

芥子碱硫氰酸盐对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖、上皮间质转化、转移的影响及其机制研究

目的:研究芥子碱硫氰酸盐(ST)对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖、上皮间质转化(EMT)和转移的影响,并考察其可能的作用机制。方法:将人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)和ST不同浓度组(5、10、20μmol/L),分别通过CCK-8实验、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷染色实验、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过Western blot实验和免疫荧光实验分别测定各组细胞中EMT相关指标N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达水平。另将SCL-1细胞分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)、ST单用组(20μmol/L)、ST+NSC228155组[20μmol/L ST+100μmol/L NSC228155(EGFR激动剂)]和ST+SC79组[20μmol/L ST+20μmol/L SC79(PI3K/Akt激动剂)],分别通过CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot实验测定空白对照组(0.1%二甲基亚砜)和ST不同浓度组(5、10、20μmol/L)组细胞中表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平,以验证ST的作用与EGFR/PI3K/Akt信号通路的关系。另将SCL-1细胞和人正常皮肤成纤维细胞WS1分别分为空白对照组(0.1%二甲基亚砜)、ST组(20μmol/L)、ZD1839组(阳性对照,20μmol/L,EGFR抑制剂)和LY294002组(阳性对照,20μmol/L,PI3K/Akt抑制剂),采用CCK-8实验测定各组细胞的增殖能力,以评价ST的细胞毒性。结果:与空白对照组比较,5、10、20μmol/L ST组SCL-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著减弱(P<0.05);Western blot和免疫荧光实验结果显示,5、10、20μmol/L ST组SCL-1细胞中N-cadherin蛋白的表达均显著下调(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达均显著上调(P<0.05),并且细胞中EGFR、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。与ST单用组比较,ST+NSC228155组和ST+SC79组SCL-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.05)。与空白对照组比较,ST组WS1细胞的增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),SCL-1细胞增殖能力显著减弱(P<0.05),ZD1839组和LY294002组两种细胞的增殖能力均显著减弱(P<0.05);与ST组比较,ZD1839组和LY294002组WS1细胞的增殖能力均显著减弱(P<0.05),但SCL-1细胞的增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ST可能通过抑制EGFR/PI3K/Akt信号通路的活化而抑制人皮肤鳞癌SCL-1细胞的增殖、EMT和转移,且其毒副作用较小。     

二甲双胍联合辛伐他汀对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:观察二甲双胍联合辛伐他汀对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的抑制作用.方法:采用肾小球系膜细胞体外培养技术,筛选最佳葡萄糖浓度,在此浓度下,诱导肾小球系膜细胞增殖,在不同浓度二甲双胍联合辛伐他汀浓度,通过MTT法检测并观察不同时间,不同浓度下系膜细胞增殖情况.结果:与其他剂量比较,0.6g·L-1葡萄糖在48、72 h对肾小球系膜细胞增殖刺激作用较强,差异有统计学意义(P＜0.01),选0.6 g·L-1葡萄糖为最佳浓度.与高糖组比较,二甲双胍联合辛伐他汀高、中及低剂量组,均在48、72 h抑制肾小球系膜细胞生长(P＜0.05);其中二甲双胍联合辛伐他汀高剂量组的抑制较强,但与二甲双胍联合辛伐他汀中剂量组、低剂量组比较,差异不显著(P＞0.05).结论:二甲双胍联合辛伐他汀具有抑制肾小球系膜细胞增殖作用,联合用药可治疗糖尿病肾病.