水蛭素对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 探讨水蛭素对高磷诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）钙化的影响及机制。方法 采用β-甘油磷酸诱导体外培养的大鼠VSMCs,建立钙化模型,加入不同浓度水蛭素进行干预,实验设置5个组：对照组、钙化组、低浓度水蛭素组、中浓度水蛭素组、高浓度水蛭素组。通过茜素红S染色及细胞内钙含量检测各组细胞钙化情况;用qRT-PCR及Western blotting检测各组细胞α-SMA、RUNX2、BMP2的mRNA和蛋白表达量及细胞内碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性以测定各组细胞转分化情况。结果 与对照组比较,高磷诱导的钙化组中茜素红S染色可见明显橘红色钙化结节,钙含量检测显示细胞内钙含量明显增加（P<0.01）,细胞内ALP活性升高（P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量降低（P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量升高（P<0.01）。与钙化组比较,水蛭素组茜素红S染色结果显示的橘红色钙化结节呈浓度依赖性减少,细胞内钙含量及ALP活性呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）,α-SMA的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性升高（P<0.05或P<0.01）,RUNX2、BMP2的mRNA及蛋白表达量呈浓度依赖性降低（P<0.05或P<0.01）。结论 水蛭素通过抑制高磷诱导大鼠VSMCs转分化来减轻VSMCs的钙化,其机制可能与上调α-SMA的表达,下调ALP活性、RUNX2及BMP2的表达有关。     

白细胞介素10对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞成骨样分化 与钙化的影响

目的 探究白细胞介素10(IL-10)对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)成骨分化,钙化和可能的信号传导途径。方法 提取大鼠胸VSMCs,采用钙浓度测定,碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色观察IL-10对钙化的影响。实时聚合酶链反应(Real-Time PCR)探究IL-10对成骨样分化的作用;蛋白质免疫印迹(Western Blot)用于检测成骨分化蛋白,观察IL-10对高钙高磷诱导的VSMCs钙化的作用。结果 IL-10促进高钙高磷引起的VSMCs钙化,上调成骨分化标志物的表达,激活骨形态形成蛋白2/白细胞抑制因子1,5/Runt相关转录因子2通路(BMP2/Smad1,5/RUNX2),并且抑制活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。结论 IL-10能够诱导VSMCs成骨样分化,这可能是临床上观察到IL-10与血管钙化相关的机制之一。IL-10这一作用与其激活BMP2/Smad1,5/RUNX2通路,抑制NFATc1激活有关。     

膦甲酸钠干预高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的研究

目的　观察不同浓度的膦甲酸钠 (PFA)对高磷诱导的牛主动脉血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素 (OC)表达的影响。方法　用不同磷浓度 (正常磷Pi1.5mmol·L-1、高磷Pi2 0mmol·L-1)及含不同浓度膦甲酸钠的培养液 ,体外培养牛主动脉平滑肌细胞 ,观察血管平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达。用甲ο 酚酞络合酮方法测定钙含量 ,BCA法测定蛋白含量。培养上清液中骨钙素浓度用放射免疫法测定 ,用蛋白含量标化钙含量、骨钙素的浓度 ,RT PCR观察骨钙素mR NA的表达。结果　①高磷组较正常磷组平滑肌细胞钙沉积增加 :细胞培养 6d后 ,高磷组 (77 187± 11 6 92 )mg·g-1Pro ,正常磷组 (2 5 76 8± 1 75 0 )mg·g-1Pro ,P <0 0 1;②膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积 :培养 6d ,高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组 (37 72 9± 5 899)mg·g-1Pro ,与高磷未干预组相比 ,P <0 0 1;③高磷组骨钙素表达明显增高。高磷组与正常磷组相比 ,培养上清液中骨钙素水平 :(1 5 0 3× 10 -2 ±2 6 0 1× 10 -3 )mg·g-1Pro对 (2 981× 10 -3 ± 8 382× 10 -4)mg·g-1Pro ,P <0 0 1;平滑肌细胞骨钙素mRNA表达 (OC/GAPDH) :1 886± 0 16 5对 0 75 2± 0 0 5 2 1,P <0 0 1;④膦甲酸钠能有效地抑制骨钙素的表达。高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组与高磷组?     

吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的探讨吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化影响。方法利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备钙化血管平滑肌细胞模型,予不同浓度(10、50、100μmol/L)吡咯咧酮干预。用Von Kossa染色及茜素红S染色观察细胞钙化程度,用甲基百里香酚蓝法测定各组细胞中钙含量,磷酸苯二钠法测定细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。采用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞PPAR-γ、GRP78和caspased-12表达。观察吡咯列酮通过内质网应激致凋亡对大鼠血管平滑肌细胞钙化影响及其可能的分子机制。结果钙化血管平滑肌细胞其钙含量、ALP活性较普通细胞增多(P<0.01),而吡格列酮呈剂量依赖性地促进钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、ALP活性,以及PPAR-γ、GRP78、caspase-12m RNA表达(P<0.05)。结论吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径作用可促进β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与PPAR-γ及GRP78、caspase-12表达上调有关。     

丹参素对血管平滑肌细胞钙化和凋亡的抑制作用

目的：探讨丹参素对血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡和钙化的影响。方法：β-磷酸甘油诱导培养的VSMCs发生钙化;通过细胞钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性测定,判断钙化程度;用Western blot方法检测细胞中骨形成蛋白BMP-2、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase 3的蛋白水平。结果：与正常组相比,β-磷酸甘油引起VSMCs中钙含量和ALP活性明显增加。丹参素显著抑制β-磷酸甘油引起的钙化VSMCs中的钙含量和ALP活性。Western blot结果显示β-磷酸甘油可引起VSMCs中BMP-2,bax和cleaved caspase 3的蛋白水平显著增高,Bcl-2蛋白水平明显降低;丹参素可明显改善钙化的VSMCs中上述蛋白的变化。结论：丹参素可以抑制VSMCs发生钙化和凋亡,此效应可能与抑制BMP-2、bax和cleaved caspase 3的蛋白水平,上调Bcl-2蛋白水平有关。     

尾加压素Ⅱ加重β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)对血管钙化形成的影响。方法利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞(VSMCs),测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、45Ca摄入及骨钙素含量。结果β-甘油磷酸诱导的钙化细胞呈明显的形态转变。生长5～7d后,细胞由长梭形转变为骰子状;9～10d后,细胞聚集成多菊花状的多细胞结节,细胞颜色变暗,vonKossa染色阳性。UⅡ组上述形态变化加重。与对照组相比,用含β-甘油磷酸的钙化培养液处理10d的钙化细胞,其钙含量高2.38倍,ALP活性高6.79倍,45Ca沉积高2.13倍,骨钙素含量高49.3%(P<0.01)。UⅡ(10-10、10-9和10-8mol.L-1)与β-甘油磷酸同时孵育时,钙含量比钙化组分别高22.08%(P<0.05)、49.78%和87.56%(P<0.05),ALP活性高27.41%、56.31%和102.53%(P<0.01),45Ca摄入高68.32%、99.45%和115.36%(P<0.01),骨钙素含量高18.23%(P<0.05)、32.68%和44.65%(P<0.01),表明UⅡ呈浓度依赖性地促进钙化形成。结论尾加压素Ⅱ促进β-甘油磷酸诱导的大鼠VSMCs钙化形成。     

罗格列酮抑制糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化机制

目的探讨罗格列酮抑制糖基化终产物(AGEs)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的可能机制。方法在含10 mmol·L~(-1)β-甘油磷酸培养液中加入200 mg·L~(-1)的AGEs及不同浓度(10~(-7)～10~(-5)mol·L~(-1))的罗格列酮体外培养VSMCs,采用甲-酚酞络合酮方法测定细胞钙含量,real time-PCR检测肿瘤坏死因子α(Tnf-α)、白细胞介素6(Il-6)及糖基化终产物受体(Rage)mRNA表达,Western blotting检测Rage蛋白表达,ELISA法检测细胞上清Tnf-α、Il-6水平。结果 AGEs可使VSMCs钙含量增加,Tnf-α、Il-6及Rage mRNA和蛋白表达增加(P<0.01);罗格列酮组均可降低VSMCs细胞层钙含量,抑制上述影响(P<0.05)。结论罗格列酮可能通过抑制VSMCs Rage表达,降低Tnf-α、Il-6表达和分泌,减轻AGEs诱导的VSMCs钙化。     

菟丝子黄酮对去势雌性大鼠血清雌激素水平和血管平滑肌细胞的影响

目的：观察补肾中药菟丝子的有效成分菟丝子黄酮对老年血管的保护作用，并探讨其作用机制。方法：菟丝子经溶剂提取、聚酰胺柱分离得黄酮提取物。SD雌性大鼠随机分成正常对照组，模型对照组，菟丝子黄酮高、低剂量组及阳性对照组。实验动物按分组造模、给药42d后，观察血清中的雌激素水平和主动脉平滑肌细胞凋亡率的变化。结果：菟丝子黄酮能上调去势雌性大鼠血清雌激素水平（P〈0．01），提高其主动脉平滑肌细胞早期凋亡率（P〈0．01）。结论：菟丝子黄酮通过升高雌激素水平和促进主动脉平滑肌细胞凋亡发挥其对老年血管的保护作用。     

小檗胺对血管平滑肌细胞钙动力学影响

本文以Fluo-3/AM 荧光技术和激光扫描共聚焦显微镜检查法, 研究小檗胺 (Ber) 对培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)内游离钙 ([Ca 2 ]i ) 的影响结果表明：在胞外钙 ([Ca 2 ]o ) 为?.0 mmol·L -1 条件下，Ber 抑制60 mmol·L -1 KCL1 mmol·L -1 哇巴因Ouabain 30 mmol·L -1 去甲肾上腺素 ( NE ) 1 mmol·L -1 5-羟色胺5-HT 和30 mmol·L -1 三磷酸腺苷 (ATP)引起的 [Ca 2 ]i 升高，而且荧光强度达峰时间亦延长。在无胞外钙条件下，Ber 对咖啡因 (Caffeine)引起的[Ca 2 ]i 升高没有作用。结论：Ber 抑制电压依赖性钙通道 (VDCC) 和受体调控性钙通道 (ROCC) 激活引起的外钙内流，对Caffeine 引起的内钙释放没有影响。Ber 可抑制Ouabain 诱导的细胞内钙升高。     

卡维地洛对血管平滑肌细胞DNA合成的影响

目的 :探讨卡维地洛对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其可能机制。方法 :通过贴壁细胞培养法建立豚鼠主动脉血管平滑肌细胞模型 ,应用 [3 H]TDR掺入试验研究卡维地洛对反应性氧族 (reactiveoxygenspecies ,ROS)、血管紧张肽Ⅱ(angiotensinⅡ ,AngⅡ )及胎牛血清 (fetalcalfserum ,FCS)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 :卡维地洛呈剂量依赖性地抑制ROS ,AngⅡ及FCS诱导的血管平滑肌细胞DNA合成 ,最大抑制率分别为 (48± 15 ) % ,(42± 7) %和 (44± 14) %。结论 :卡维地洛对ROS及AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞DNA合成呈剂量相关性的抑制作用 ,提示卡维地洛可能通过抗氧化的途径抑制血管平滑肌细胞增殖     

红景天苷对大鼠血管平滑肌细胞ACE基因表达的影响

目的　检测红景天苷对大鼠血管平滑肌细胞 ACE基因表达的影响。方法　离体培养 SD大鼠 VSMC,应用 RT- PCR方法 ,检测红景天苷对血管平滑肌细胞 ACE基因表达的影响。结果　随红景天苷用药浓度的增加(0 .3～ 0 .5 mmol·L-1) ,ACE m RNA表达逐渐降低。结论　红景天苷可抑制血管 ACE的表达 ,这种作用在心血管病的临床治疗中有潜在的应用价值     

The influence of magnesium on the release of calcium from intracellular depots in vascular smooth muscle cells

Vasoconstrictor responses to prostaglandin F2 alpha and noradrenaline were investigated in ring segments of feline femoral, coronary and cerebral arteries incubated in calcium-free solutions containing different concentrations of magnesium (1.2, 4.4 and 13.2 mM). Contractions produced by prostaglandin F2 alpha and noradrenaline were depressed when calcium was omitted from the incubation solution. The presence of raised concentrations of magnesium (4.4 or 13.2 mM) in the tissue bath further depressed the prostaglandin F2 alpha and noradrenaline contractions in calcium-free medium. In a separate set of experiments the vessel wall contents of cAMP and cGMP were measured before and after the additions of 4.4 or 13.2 mM magnesium; stable relaxations by magnesium were noted but there was no parallel change in the vessel content of cAMP or cGMP. The results indicate that magnesium may interfere with the release of calcium from intracellular depots, and that neither adenylate cyclase, nor guanylate cyclase are involved in the dilator activity of magnesium in isolated arteries.     

多沙唑嗪抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨多沙唑嗪对人血管平滑肌细胞(VSMCS)增殖的抑制作用。方法将0.1、1、10、25μmol/L的多沙唑嗪(Doxazosin,Dox)作用于体外培养的VSMCS,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在1、10、25μmol/L的Dox作用下,VSMCS的3H-TdR的掺入量分别为(983±58.7)cpm、(730±54.9)cpm、(500±64.1)cpm,显著低于对照组的(1270±96.5)cpm(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论多沙唑嗪能够抑制人VSMCS的增殖,对经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄可能有防治作用。     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7极化为M1型巨噬细胞,制备炎症模型即条件培养基(CM),未加LPS诱导组为对照组即非条件培养基(nCM)。体外培养VSMC分为5组,分别予nCM、CM、CM+IGF-1 60 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1 120 ng/ml干预,用噻唑蓝(MTT)法检测各组吸光度(A)值,以A值反应各组VSMC的数量。结果巨噬细胞RAW264.7在LPS 0 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1μg/ml、10μg/ml浓度刺激下各组上清液中IL-6的浓度分别是(6.75±0.12)pg/ml、(7.82±1.53)pg/ml、(44.09±1.58)pg/ml、(155.71±23.93)pg/ml、(436.59±3.15)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);VSMC在5组不同干预下各组A值分别是(0.53±0.07)、(0.26±0.06)、(0.30±0.10)、(0.62±0.09)、(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 M1型巨噬细胞可抑制VSMC增殖,但IGF-1可拮抗M1型巨噬细胞对VSMC增殖的抑制作用,本实验中IGF-1促进VSMC增殖的最适浓度为90 ng/ml。