甲胺鸢尾素对H2O2损伤大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响

目的：研究新型化合物甲胺鸢尾素（methyl-amine irisolidone,MMI）预处理对H2O2损伤大鼠心肌细胞线粒体膜电位变化的影响。方法：甲胺鸢尾素预处理心肌细胞12 h后,采用H2O2诱导细胞氧化应激损伤,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化。结果：与正常对照组比较,模型组心肌细胞存活率明显降低（P〈0.01）。MMI0.1μmol/L组与模型组相比细胞存活率相近（P〉0.05）,0.5、1、5、10μmol/L组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。与模型组比较,10μmol/L MMI减轻细胞形态变化,1、5、10μmol/L MMI显著抑制线粒体膜电位下降（P〈0.05,P〈0.01）。结论：甲胺鸢尾素可改善H2O2所致心肌细胞氧化应激损伤,其机制与稳定细胞膜、抑制线粒体膜电位下降,进而抑制心肌细胞凋亡有关。     

水飞蓟宾对H2O2诱导大鼠H9C2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨水飞蓟宾对H2O2诱导状态下H9C2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法将大鼠H9C2心肌细胞分为对照组、H2O2(200μmol/L)干预组以及水飞蓟宾(100、200μmol/L)+H2O2(200μmol/L)干预组,每组设6个复孔.各组经过药物干预6 h后,通过Giemsa染色法观察细胞形态学,通过MTT法测定细胞存活率、流式细胞术测定细胞凋亡率;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)活性和丙二醛(MDA)含量;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 与对照组比较,H2O2干预组H9C2心肌细胞形态明显异常、存活率显著降低且凋亡率显著升高,培养液中LDH、CK、AST活性和MDA含量均显著升高,细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).与H2O2干预组比较,水飞蓟宾(100、200μmol/L)+H2O2(200μmol/L)干预组培养液中AST、CK活性和MDA含量均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);水飞蓟宾(200μmol/L)+H2O2(200μmol/L)干预组H9C2心肌细胞形态明显改善、存活率显著升高、凋亡率显著降低,培养液中LDH活性显著降低,细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 水飞蓟宾能够有效改善H2O2诱导状态下H9C2心肌细胞形态,提高其存活率并降低凋亡率,改善细胞中抗氧化酶活性、降低细胞损伤,提示水飞蓟宾对H2O2诱导H9C2心肌细胞氧化应激损伤具有剂量相关性的保护作用.     

二氢杨梅素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的机制研究

目的 研究CXC趋化因子受体4(CXCR4)在二氢杨梅素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用。方法 喉癌Hep-2细胞分成对照组(0μg·mL^-1二氢杨梅素)、低剂量实验组(20μg·mL^-1二氢杨梅素)、中剂量实验组(40μg·mL^-1二氢杨梅素)、高剂量实验组(80μg·mL^-1二氢杨梅素)、高剂量实验+Vector组(80μg·mL^-1二氢杨梅素+pcDNA3.1)、高剂量实验+CXCR4组(80μg·mL^-1二氢杨梅素+pcDNA3.1-CXCR4)。以蛋白质印迹法检测CXCR4、剪切的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达,以噻唑蓝(MTT)方法检测细胞存活率,以流式细胞术测定细胞凋亡。结果 对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量实验+Vector组、高剂量实验+CXCR4组喉癌细胞中CXCR4蛋白表达水平分别为0.58±0.04,0...     

杨梅素诱导人肝癌HepG2凋亡机制研究

目的对杨梅素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制进行研究。方法采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化。用Western印迹法分析相关蛋白的变化。结果杨梅素明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞调亡。Caspase-3,caspase-9抑制剂可明显抑制100μg/ml杨梅素诱导的凋亡。Western印迹结果显示100μg／ml杨梅素作用于细胞后,细胞色素c水平明显升高。结论杨梅素（100μg／ml）通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

二氢杨梅素诱导人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的实验研究

目的研究二氢杨梅素(dihydromyricetin)对人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的影响及其相关机制。方法采用MTT法检测二氢杨梅素对人肺腺癌细胞AGZY-83-a存活率的影响,应用TUNEL法和Caspase-3活性检测观察二氢杨梅素对AGZY-83-a凋亡的作用,并通过共聚焦显微镜观察二氢杨梅素对肺腺癌细胞内钙的影响。结果MTT结果显示,二氢杨梅素50μmol·L-1对AGZY-83-a的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖关系;TUNEL实验结果显示二氢杨梅素可以引起AGZY-83-a发生凋亡,且具有剂量依赖性;Caspase-3活性检测结果显示二氢杨梅素可增加肺腺癌细胞Caspase-3活性,说明二氢杨梅素可以诱导AGZY-83-a凋亡;二氢杨梅素可升高肺腺癌细胞内钙,平均荧光强度FI可增加20多倍。结论二氢杨梅素可通过增加细胞内钙诱导AGZY-83-a细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。     

异鼠李素通过抑制钙超载和线粒体功能损伤减轻阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨异鼠李素保护阿霉素所致心肌损伤的作用及可能机制。方法除空白对照组外,模型对照组,异鼠李素2.5、5、10 mg·kg~(-1)组,阳性对照组(20 mg·kg~(-1)右丙亚胺)均建立阿霉素心肌损伤模型,每组10只大鼠。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜测定心肌细胞内钙离子浓度;罗丹明123(Rho123)荧光探针标记流式细胞仪检测和分析线粒体跨膜电位(△ψm);蛋白免疫印迹法检测Cyt-c和Caspase-9的表达水平。结果与空白对照组相比,阿霉素心肌损伤模型对照组细胞凋亡率由(1.1±0.22)%明显升高至(17.5±2.03)%、胞浆内钙离子浓度由(115.2±10.07)μmol·L~(-1)明显升高至(478.3±19.45)μmol·L~(-1)、线粒体膜电位△ψmlow的细胞数目占比由(3.63±0.34)%明显升高至(39.86±0.53)%、Cyt-c和Caspase-9表达明显升高;而5、10mg·kg~(-1)异鼠李素明显缓解了上述指标的变化[凋亡率降为(5.6±0.93)%,胞浆内钙离子浓度平均值为降为(298.2±10.54)μmol·L~(-1),线粒体膜电位△ψmlow的细胞数目占比降至(17.64±0.41)%,Cyt-c、Caspase-9蛋白表达明显下降];且与阳性对照组相比结果相近。结论异鼠李素可减少阿霉素所致心肌细胞凋亡率而保护心肌,其机制可能与改善细胞内钙离子稳态、线粒体功能、降低Cyt-c和Caspase-9蛋白表达等线粒体凋亡通路相关指标有关。     

抑制PARP-1表达在棕榈酸诱导大鼠心肌细胞凋亡中的保护作用

目的探讨抑制PARP-1表达缓解棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡效果及其作用机制。方法取H9C2细胞随机分成正常组、PA组和抑制组。PA组接受0.4μmol/L PA干预,抑制组接受20 nmol/L PARP-1抑制剂+0.4μmol/L PA干预,正常组不接受任何干预。干预24 h后测定各组细胞凋亡情况、线粒体电位、ROS水平和凋亡相关蛋白。结果抑制组细胞存活抑制率明显高于PA组(P0.05)。ROS测定结果显示,抑制组ROS水平低于PA组。线粒体膜电位结果显示,抑制组细胞线粒体跨膜电位高于PA组,而弱于对照组。流式细胞仪检测结果显示,PA组活细胞率明显低于对照组(P0.01),而细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),抑制组活细胞率明显高于PA组(P0.01),而细胞凋亡率明显低于PA组(P0.01)。抑制组H9C2细胞的PARP-1蛋白表达(25.84±6.47)明显低于对照组(96.94±8.74)%和PA组(89.72±7.55)%(P0.05),抑制组H9C2细胞的Caspase-3蛋白(44.66±7.72)%和Bax蛋白(48.62±7.58)%表达明显低于PA组(95.44±12.58)%和(88.28±10.25)%(P0.05),但高于对照组H9C2细胞(23.45±6.25)%和(20.57±6.22)%(P0.05)。结论抑制PARP-1表达能缓解PA脂毒性引起H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能为提升心肌细胞线粒体活性,抑制细胞ROS水平和细胞凋亡蛋白表达。     

二氢杨梅素通过上调自噬活性抑制MPP~+诱导的PC12细胞损伤

目的观察二氢杨梅素(DMY)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响并探讨其可能的机制。方法含DMY 5,10,20,40和80μmol·L~(-1)的培养液预处理PC12细胞0.5 h,培养液中加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)10 mmol·L~(-1),再加入MPP+500μmol·L~(-1)培养48 h。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活,丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,透射电镜观察细胞的超微结构,Western蛋白质印迹法检测细胞中自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。结果与细胞对照组比较,MPP+组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著增加(P<0.05),细胞中自噬体的数量明显减少,自噬泡占胞质总面积的百分率显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著降低(均P<0.05),P62的表达显著升高(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 10~80μmol·L~(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞培养液中LDH水平显著降低(P<0.05)。与MPP+组比较,MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组细胞中自噬体数量明显增加,自噬泡占胞质总面积的百分率显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(P<0.05),P62的表达显著降低(P<0.05)。与MPP++DMY 20μmol·L~(-1)组比较,MPP++DMY+3-MA组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞上清液中LDH水平显著增加(P<0.05)。结论 DMY抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调细胞自噬活性有关。     

二氢杨梅素联合小剂量VP16抗肺癌研究

目的：研究二氢杨梅素(DMY)联合小剂量依托泊苷(VP16)治疗非小细胞肺癌的作用及机制,探索减毒高效联合化疗新方案。方法：以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,MTT实验摸索并确定单药作用浓度及时间(IC₂₀),之后分别给予不同药物(对照组、VP16组、DMY组、联合组)干预48 h;倒置显微镜下观察细胞增殖情况;Tunel实验检测各组细胞凋亡情况;Western blot实验检测凋亡相关蛋白PARP、Cleaved PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平。结果：低剂量DMY(80μg·mL^-1)联合低剂量VP16(0.06μg·mL^-1)治疗后,对A549细胞的抑制作用显著增强,镜下可见细胞融合率显著降低,细胞固缩明显;Tunel实验显示联合组凋亡显著增强;Western blot结果显示联合组与单独用药组或与对照组比较Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加,同时PARP、Caspase-3蛋白表达显著下降。结论：小剂量DMY...     

线粒体分裂在甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、凋亡以及侵袭中的作用

目的研究线粒体动力学蛋白Mfn2和Drp1在甲状腺鳞癌SW579细胞中的表达和线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)对SW579细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法采用RT-PCR检测Mfn2和Drp1 m RNA,Westernblot检测Mfn2和Drp1蛋白在Nthy-ori 3-1和SW579两种细胞中的表达;然后将SW579分为对照组(DMSO,0.1%)和Mdivi-1低、中、高剂量组(浓度分别为15、30、45μmol/L),培养16 h,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的变化,用RT-PCR检测细胞色素C(Cyt C)和Caspase-3 m RNA的变化,Westernblot检测Cyt C和Caspase-3蛋白的变化,用Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果与Nthy-ori 3-1细胞系相比,SW579细胞系中Mfn2 m RNA和蛋白表达明显降低,Drp1 m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);与对照组相比,Mdivi-1各组SW579细胞存活率和线粒体膜电位均明显降低,Cyt C和Caspase-3的m RNA及蛋白表达均明显增加,侵袭能力明显减弱(均P<0.01),并且呈药物浓度依赖性。结论甲状腺鳞癌SW579细胞中存在线粒体动力学异常,Mdivi-1可以抑制此细胞的增殖和侵袭,并能诱导其凋亡。