液相色谱-质谱技术对利妥昔单抗及其类似药结构表征和相似性的研究

目的 应用液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectromety,LC/MS)和液相色谱-非数据依赖二级质谱数据采集技术(liquid chromatography-data independent acquisition mass spectromety,LC/MSE)对利妥昔单抗及其类似药进行结构表征和相似性研究.方法 用LC/MS对利妥昔单抗及其类似药的完整蛋白及轻链和重链的相对分子质量进行测定;用基于LC/MSE的肽图分析确定利妥昔单抗及其类似药的氨基酸全序列;用LC/荧光检测法分析利妥昔单抗的糖基化修饰结构及相对含量.结果 LC/MS可准确测定利妥昔单抗的相对分子质量.基于LC/MSE的肽图分析显示,利妥昔单抗的氨基酸序列覆盖率＞99％.LC/荧光检测法对利妥昔单抗的糖谱分析具有较好的重复性.利妥昔单抗类似药与原研药的相对分子质量和糖型信息相符、氨基酸序列完全一致、糖谱相似.结论 LC/MS和LC/MSE可用于利妥昔单抗及其类似药的结构表征和相似性比较,这为今后其他单克隆抗体结构表征平台的建立提供了依据.     

用液相色谱-离子阱质谱联用法检测兔体液中阿普唑仑及其主要代谢产物

建立鉴别体液中阿普唑仑及其主要代谢物的高效液相色谱 电喷雾离子阱质谱联用(LC/MSn)法 .采用LC/MSn联用技术 ,检测家兔灌胃给药后血样和尿样中阿普唑仑原形药及其羟基化代谢物、葡萄糖苷酸型结合物 ,得到了它们的色谱、质谱以及特征碎片离子信息 .阿普唑仑的最低检测限小于 1ng .本法专属性强 ,可推广至其他生物检材的测定 ,尤其适用于需快速响应的临床和法医毒物分析     

LC/MS/MS法测定比格犬血浆中埃克替尼及其在药动学研究中的应用

目的:建立灵敏、快速的液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)法测定比格犬血浆中埃克替尼,并用于药动学研究。方法:健康比格犬32只,随机分成4组后,静脉(10mg/kg)或灌胃(10,20和40mg/kg)给予埃克替尼。采用LC/MS/MS法测定血药浓度,并计算出药动学参数。结果:测定埃克替尼的线性范围是0.5～10000ng/mL,日内和日间精密度(RSD)均小于10。静脉给药后AUC0-t为(27.3±15.3)μg.mL-1.h。灌胃给药后AUC0-t分别为(7.47±3.30)、(23.5±11.5)、(54.5±24.9)μg.mL-1.h,埃克替尼在犬体内的绝对生物利用度是27.4。结论:该分析方法选择性好、灵敏度高、操作简便,并成功应用于埃克替尼的比格犬药动学研究。     

LC/MS/MS法测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪的浓度

目的 建立一种快速、灵敏地测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪(1amotrigine,LTG)的LC/MS/MS方法.方法 采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC/MS/MS)法,色谱柱为Welch Materials XB-C18柱,流动相甲醇-水(95:5,V/V,含5 mmol/L甲酸铵),流速0.3ml/min,柱温...     

动物活体自动采样技术的应用和评价

介绍在动物实验中一种先进的生物样品自动采集与处理系统,该系统结合液相色谱/质谱/质谱(LC/MS/MS)分析方法,可以为临床前药动学研究、药效学研究和安全性评价提供可靠的实验数据。利用该系统能够在清醒的、自由活动的实验大鼠、小鼠等啮齿类动物及灵长类动物完成生物样品的定时自动采集,并进行即时处理。不但节约人力,且大大提高了对少量低浓度生物样品的实验数据准确性;与此同时,还能实时监测实验动物的其他生理参数,从而可减少所用动物数量,改善动物的舒适性。若能把自动生物样品采集技术和现代先进的LC/MS/MS分析方法合并使用,则可显著提高临床前研究的速度和质量,以满足高通量药物筛选的要求。自动采样系统被我们用于大鼠口服卡马西平的药动学实验,结果证实它确实是临床前药动学、药效学研究及安全性评价的有效工具。     

重组人甲状旁腺素1—34肽谱及一级结构的液相色谱／电喷雾离子化质谱法分析

目的：采用液相色谱／电喷雾质谱联用法(LC—ESI—MS／MS)对重组人甲状旁腺素1—34(rh—PTH—34)进行肽谱及一级结构分析。方法：用LC—ESI—MS法测定相对分子质量，并在线分析其胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解质量肽谱；结合质谱源内碰撞诱导电离技术解析酶解肽段的氨基酸序列。结果：相对分子质量测定值与理论值一致；胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解肽段氨基酸序列与理论值基本一致，序列覆盖率分别为97％和88％。结论：LC—ESI—MS／MS联用法为基因重组多肽类药物的一级结构分析和质量控制提供了新途径。     

基于液相色谱飞行时间质谱的炒川楝子化学成分分析

目的通过液相色谱飞行时间质谱(LC/QTOF MS)联用技术定性分析炒川楝子甲醇提取物中的主要化学成分。方法色谱分离采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以1%甲酸—乙腈为流动相梯度洗脱,流速:1.0 mL.min-1,质谱定性采用飞行时间质谱,正负离子模式扫描。结果通过正、负离子质谱信息及元素组成分析并结合相关文献数据对照,鉴定出炒川楝子甲醇提取物中的11个成分。结论建立了一种基于LC/QTOF MS技术对炒川楝子中的化学成分进行鉴别的方法,为中药饮片炒川楝子的质量控制奠定了基础并为其深入研究和应用提供了依据。     

盐酸托烷司琼口腔崩解片在健康人体内的药动学及生物等效性

目的建立测定人血浆中托烷司琼浓度的LC/MS/MS法,并用该法研究托烷司琼在健康人体内的药动学特征及其相对生物等效性。方法采用LC/MS/MS法,测定20名健康男性受试者口服含盐酸托烷司琼10 mg的受试制剂和参比制剂后,不同时刻血浆中托烷司琼的浓度,绘制药动学曲线并计算主要药动学参数。结果受试制剂和参比制剂中托烷司琼的主要药动学参数如下:tmax分别为(2.1±0.8)和(2.1±0.8)h;ρmax分别为(15.7±6.2)和(16.1±6.2)μg.L-1,t1/2分别为(9.9±5.0)和(9.4±5.0)h;用梯形法计算,AUC0-t分别为(213.2±162.7)和(210.1±159.2)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(231.0±190.4)和(231.2±190.9)μg.h.L-1。以AUC0-t计算,盐酸托烷司琼口腔崩解片中托烷司琼的相对生物利用度为(102.2±25.7)%。结论盐酸托烷司琼的两种制剂生物等效。     

UFLC-MS/MS法测定人胎盘灌流液中氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林的浓度及其胎盘透过率

目的 建立测定人胎盘灌流液中氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林浓度的方法并测定胎盘透过率.方法 以格列本脲为内标,采用蛋白沉淀法对样品进行前处理,采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)法检测.以SynergiTM Hydro-RP 80A LC为色谱柱,以水(含0.1％甲酸)-乙腈(含0.1％甲酸)为流动相进行梯...     

乙烷硒啉的临床药物动力学和代谢转化特点研究

目的研究肿瘤患者口服乙烷硒啉(1,2-[bis(1,2Benzisoselenazolone-3(2H)-ketone)]ethane,BBSKE)后的药物动力学及体内代谢转化特征。方法3例肿瘤患者单次口服给药剂量为600mg.d-1,采集各个时间点的血浆样品及尿样,用液相色谱-串联四极杆质谱(LC/ESI-MS/MS)联用技术测定血浆样品中BBSKE的含量,用液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI/MSn)联用技术对尿及血浆中的代谢产物进行分析鉴定。结果得到了BBSKE在血浆中的药时曲线图及主要的药物动力学参数。在尿中共发现了6个BBSKE的氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化代谢产物,在血浆中共发现了2个BBSKE的氧化、葡萄糖醛酸化代谢产物。结论BBSKE的血药浓度较低,表观分布容积大。氧化、甲基化、葡萄糖醛酸化反应是BBSKE在人体内的3种重要代谢途径。     

三叶青地上部分抗炎提取物固体纳米晶生物利用度及药动学研究

目的:建立同时测定大鼠血浆中三叶青地上部分抗炎提取物(THAA)9个效应组分的超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)定量分析方法,评价THAA固体纳米晶血药浓度、药动学特性及口服生物利用度.方法:采用UPLC-MS/MS,CORTECSTM UPLC-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm)...     

固相萃取技术在核苷类逆转录酶抑制剂定量分析研究中的应用概况

固相萃取(Solid-phase extraction,SPE)是近20年来迅速发展起来的一种生物样本预处理技术,是以液相色谱分离机制为基础建立的分离纯化方法。由于生物样品干扰成分较多且其中药物浓度多数较低,应用高效液相色谱(HPLC)和液相色谱/质谱联用(LC/MS)法往往无法实现样品的直接测定分析。SPE与HPLC或LC/MS法联用实现了样品预处理和分离分析的优化组合,在生物样本分析方面具有广泛的适应性和优越性。核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)属核苷类似物,极性较强,故此联用技术在其生物样本分析测定方面应用普遍。为此,本文介绍了近年SPE与HPLC或…     

质谱法及其联用技术在药物分析中的初步应用

本文报道用气相色谱/质谱法(GC/MS)、液相色谱/质谱法(LC/MS)及傅利叶变换质谱法(FTMS)在药物分析中的一些应用。用GC/MS分析了挥发油、香精及中药中的挥发性成分,如薄荷油、百花香精;麻黄、苏合香、青木香、檀香的挥发油;冠心苏合九中的挥发性成分。同时,建立了GC保留指数库、气态红外光谱数据库及在GC/MS条件下的线性程序升温毛细管GC保留指数和质谱相结合的数据库,命名为ESSOX库。由于ESSOX库综合了保留指数和质谱这两类重要的定性数据,所以在化学结构相似的化合物及异构体分析中可得到更正确的结果。对难于直接用常规质谱分析的甙类化合物,采用了热喷雾液相色谱/质谱法(TSPLC/MS)及激光解吸/傅利叶质谱法(LD/F7MS)。文中报道了足叶乙甙及其可能存在的杂质的分离分析及松针中分离所得的黄酮甙的结构鉴定。自身化学离子化(SCI)和FTMS结合是确定未知物分子量的重要方法。SCI/FTMS在合成药物、副反应产物及天然产物中得到了广泛应用。本文报道了这方面的一些结果。文中还报道了用LD/FTMS测定聚合物平均分子量及其分布的结果。测定了壬苯醇醚(外用避孕药)等一系列聚醚化合物。     

盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂家兔体内药动学及生物等效性研究

目的:考察自制盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂在家兔体内的药动学过程,并对其相对生物利用度进行初步研究.方法:采用两周期交叉设计,8只家兔单剂量口服18 mg自制盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂和市售盐酸哌甲酯控释片为参比制剂,分别于服药前、服药后0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24和32 h采血,以HPLC-二级质谱联用法(LC/MS/MS)测定盐酸哌甲酯不同时间点的血浆浓度,并进行统计学处理.结果:LC/MS/MS法测定盐酸哌甲酯血药浓度最低检测限可达到0.06 ng/ml.两种制剂在家兔体内的药-时曲线均呈双峰,其中自制盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂tmax1＝(1.02±0.04) h,tmax2＝(5.98±0.03) h,cmax1＝(0.82±0.22) ng/ml,cmax2＝(1.54±0.33) ng/ml;参比制剂tmax1＝(0.50±0.02) h,tmax2＝(3.96±0.03) h,cmax1＝(0.45±0.12) ng/ml,cmax2＝(1.25±0.29) ng/ml.与参比制剂相比,自制盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂两峰的达峰时间更晚,峰浓度更大,两制剂间有显著性差异(P<0.05).结论:自制盐酸哌甲酯缓释微丸胶囊剂生物利用度优于参比制剂.     

LC/MS/MS法测定人血浆中罗红霉素的血药浓度

目的建立LC/MS/MS法测定人血浆中罗红霉素的浓度。方法采用Diamonsil C18色谱柱,流动相甲醇-水-甲酸(75∶25∶0.5),流速为0.5mL·min-1。质谱检测方式:SIM。克拉霉素为内标,血浆样品用乙醚提取浓集,进行LC/MS/MS分析。结果本方法在0.1～40.0μg·mL-1内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率87.6%,日内和日间RSD<10%。结论本方法快速、准确,适用于罗红霉素的临床药动学研究和血药浓度检测。     

液相色谱-质谱联用分析发酵液中的阿糖腺苷及其有关物质

目的 对发酵液中的阿糖腺苷及其有关物质进行分析. 方法 采用液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用分析技术,色谱柱:Phenomenex C18(4.60mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(5∶95,V/V),流速:0.7mL·min-1,进样量:10μL,柱温:25℃;质谱离子源ESI,雾化气压力:20.00psi,干燥气流速:8L·min-1,干燥气温度:350℃;质谱扫描质量范围:50～1000.采用全扫描一级质谱(full scan)和选择离子全扫描二级质谱(full scan MS2)及三级质谱(full scan MS3)等方式进行测定,正离子方式检测. 结果 初步分析了发酵液中的阿糖腺苷及其有关物质的结构. 结论 该方法可快速、准确地对发酵产物进行初步鉴别.     

LC/MS/MS法测定人血浆中地洛他定:在药代动力学研究中的应用

目的建立LC/MS/MS法测定人血浆中地洛他定浓度,并研究地洛他定在中国男性健康人体内的药代动力学.方法采用LC/MS/MS(APCI源)测定地洛他定的血浆浓度,并计算药代动力学参数.结果地洛他定的定量限为0.2μg.L-1,该法的日内及日间精密度(RSD)均小于10%,准确度(RE)在±3%范围内.20名中国男性健康受试者口服单剂量20mg地洛他定片后,主要药供代动力学参数分别为t为(2.2±0.7)h,t1/2为(16.1±4.6)h,Cmax为(15.1±6.7)μg.L-1,AUC0-4sh为(176.4±70.2)μg.h.L-1,Ke 为(0.046±0.011)h-.结论该法操作简便、快速、灵敏,成功用于测定血浆中地洛他定浓度;并首次报道了地洛他定在中国男性健康人体内的药代动力学参数.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆及组织中贝达喹啉浓度及其药动学考察

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定SD大鼠血液及组织中贝达喹啉的浓度,研究其在大鼠体内的药动学及组织分布.方法:采用UPLC-MS/MS联用技术,测定大鼠血液及组织中贝达喹啉的药物浓度,并利用DAS软件及非房室模型统计矩方法计算药动学参数.结果:贝达喹啉线性范围为0.1～500 ng·mL...     

电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF2)鉴定重组人FKBP12

目的用最新的生物质谱技术-电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF2)鉴定重组蛋白质rhFKBP12.方法通过ESI-MS测定rhFKBP12分子量及ESI-MS/MS测定其胰蛋白酶酶切后肽段的序列和数据库查寻进行结构鉴定.结果 rhFKBP12的测定分子量为11 820.38,与理论值相比测定误差为0.007%.ESI-MS/MS测定出的两个肽段的部分序列分别为QVETMS和EEGVAQMSV,用这两段序列查寻数据库的结果表明rhFKBP12的结构正确.结论 ESI-MS/MS是鉴定蛋白质的灵敏、快速和准确的新方法.     

LC/MS/MS法测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪的浓度

目的建立一种快速、灵敏地测定癫痫患儿血浆中拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)的LC/MS/MS方法。方法采用高效液相色谱串联质谱电喷雾检测(LC/MS/MS)法,色谱柱为Welch Materials XB-C18柱,流动相甲醇-水(95∶5,V/V,含5 mmol/L甲酸铵),流速0.3ml/min,柱温40℃,以碱化的醋酸乙酯:二氯甲烷(4∶1)为提取剂。提取的样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对LTG(m/z 256.0→145.0)和内标阿普唑仑(m/z 309.3→281.1)进行测定。结果 LTG血药浓度在0.05~25μg/ml范围内线性关系良好(r=0.998 9),分析方法的最低检测限为5 ng/ml,其高、中、低(12.5、1.25、0.125μg/ml)3个浓度的平均提取回收率分别为82.97%、80.68%和83.33%,日内(n=5)、日间(n=15)RSD均<15%。结论本方法简单快捷、灵敏、准确、重现性好,可用于癫痫患儿LTG的临床血药浓度监测和药动学研究。