肿瘤坏死因子α/胞外信号调节激酶途径对HaCaT细胞迁移能力及小鼠全层皮肤缺损的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)/胞外信号调节激酶(ERK)途径对HaCaT细胞迁移能力及小鼠全层皮肤缺损的影响。方法采用实验研究方法。按照随机数字表法(下同)将HaCaT细胞分为常氧组和低氧(氧气体积分数为1%, 下同)条件下培养的低氧组。培养24 h后, 采用微阵列置信度分析软件SAM 4.01筛选出2组细胞的显著差异表达基因, 通过京都基因和基因组百科全书对信号通路中每条基因数目的显著性进行分析以筛选差异显著的信号通路, 样本数为3。另取HaCaT细胞, 在低氧条件下培养0(即刻)、3、6、12、24 h, 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞分泌TNF-α的水平, 样本数为5。另取HaCaT细胞, 分为常氧组、单纯低氧组和加入FR180204(一种ERK抑制剂)并置于低氧条件下培养的低氧+抑制剂组, 培养3、6、12、24 h, 采用划痕试验检测细胞的迁移能力, 样本数为12。另取HaCaT细胞, 在低氧条件下培养0、3、6、12、24 h, 采用蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/...     

原位交联含氧化石墨烯的甲基丙烯酸酐化明胶水凝胶对小鼠全层皮肤缺损创面血管化的影响

目的制备含氧化石墨烯(GO)的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶并探讨原位光聚合GO-GelMA复合水凝胶对小鼠全层皮肤缺损创面血管化的影响。方法采用实验研究方法。将0.2 mg/mL的GO溶液50 μL均匀涂抹于导电胶上, 烘干后于场发射扫描电子显微镜下观察GO的结构和大小。将人皮肤成纤维细胞(HSF)分为采用相应终质量浓度GO处理的0 μg/mL GO(不加GO溶液, 下同)组、0.1 μg/mL GO组、1.0 μg/mL GO组、5.0 μg/mL GO组、10.0 μg/mL GO组, 用酶标仪检测细胞培养48 h的吸光度值, 以此表示细胞增殖活性(样本数为6)。将HSF和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分别分为采用相应终质量浓度GO处理的0 μg/mL GO组、0.1 μg/mL GO组、1.0 μg/mL GO组、5.0 μg/mL GO组, 采用划痕试验检测划痕后24、36 h HSF的迁移率(样本数为5)及划痕后12 h HUVEC的迁移率(样本数为3), 采用酶联免疫吸附测定法检测培养4、6、8 h后HSF分泌的血管内皮生长因子(VEGF)水平(样本数为3)。...     

序列相似性家族134成员B介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖诱导的小鼠树突状细胞凋亡的影响

目的探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)凋亡的影响, 为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法采用实验研究方法。取第3～10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h(不刺激)组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组, 采用1 μg/mL LPS(浓度下同)培养相应时间后, 采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及转运蛋白SEC61B蛋白表达, 并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(样本数为3)。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液(PBS)组与LPS组, 培养24 h, 采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况, 通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组, 转染后72 h, 于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况, 另将仅常规培养的D...     

Krüppel样因子4对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用

目的探讨Krüppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞炎症反应中的表达特点与作用及其对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用, 为烧创伤脓毒症的靶向治疗奠定理论基础。方法采用实验研究方法。取小鼠RAW264.7巨噬细胞与从10只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠中提取的原代腹腔巨噬细胞(PM)进行实验。采用内毒素/脂多糖(LPS)分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0(未处理)、1、2、4、6、8、12、24 h构建巨噬细胞炎症反应模型, 采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、CC趋化因子配体2(CCL2)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达, 据此确定后续部分实验LPS处理时间。用LPS处理RAW264.7巨噬细胞0、8 h, 采用免疫荧光法检测KLF4的定位与蛋白表达;利用高通量测序技术平台对细胞进行转录组测序, 采用DESeq2软件筛选2种处理时间细胞间的差异表达基因(DEG)。采用LPS分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0、1、2、4、6、8、12、24 h, 分别用实时荧光定量RT-PCR法与蛋白质印迹法检测KLF...     

pH值对人真皮微血管内皮细胞成管的影响及其分子机制

目的探讨pH值对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)成管的影响并研究其分子机制, 为促进创面愈合过程中血管新生的研究提供理论依据。方法采用实验研究方法。取第4、5代对数生长期HDMEC进行实验, 制备pH值分别为6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6、7.8的培养液, 用其适应性培养细胞(培养方式下同)24 h后进行后续实验。另培养36 h, 采用流式细胞仪测定胞质pH值的相对荧光值并对胞质pH值的相对荧光值与培养液pH值进行相关分析。另培养1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 d, 采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖活性。采用OrisTM细胞迁移检测试剂盒检测去掉播种塞后0(即刻)、24、48 h细胞迁移剩余面积。进行三维基质胶细胞成管实验, 检测另培养48 h细胞成管的管腔直径。另培养48 h, 采用蛋白质印迹法检测细胞中蛋白激酶B(Akt)磷酸化位点473、308的蛋白表达。样本数均为3。对数据行Pearson相关性分析、单因素方差分析、析因设计方差分析、重复测量方差分析与Bonferroni校正。结果另培养36 h, 与pH值6.4培养液相比, pH值6.8～7....     

过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子的表达

目的 观察过表达核转录因子Kr(u)ppel样因子4(KLF4)是否下调胃癌AGS细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 体外培养人胃癌AGS细胞,分为4组:转染空质粒24 h对照组、转染空质粒48 h对照组、转染KLF4表达质粒24 h组、转染KLF4表达质粒48 h组.构建KLF4表达质粒,脂质体LipofectamineTM2000分别转染空质粒、KLF4表达质粒到AGS细胞,24、48 h后提取总RNA和蛋白,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测KLF4和VEGF mRNA和蛋白水平的表达.结果 AGS细胞在24 h转染率为65%-75%,48 h转染率为40%～45%.实验组与对照组转染24、48 h后,KLF4 mRNA的表达量分别为:563.584±250.744比4.997±5.729(P＜0.05);351.852±212.439比2.4420±1.3770(P＜0.05).VEGF mRNA表达量分别为:0.008 929±0.003 810比0.002 294±0.000720(P＜0.05);0.018 375±0.008 263比0.002 193±0.001 698(P＜0.05);胃癌AGS细胞KLF4蛋白表达量显著性增加,相对应地VEGF蛋白表达水平显著性降低(P＜0.05).结论 体外胃癌AGS细胞过表达KLF4导致VEGF mRNA和蛋白表达下调,KLF4可能参与抑制调节胃癌AGS细胞VEGF的表达.     

猪膀胱脱细胞基质对小鼠骨髓源巨噬细胞运动和极化的影响

目的探讨猪膀胱脱细胞基质(UBM)对小鼠骨髓源巨噬细胞的运动和极化情况的影响, 为临床创面修复中支架的合理选用提供依据。方法采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察猪UBM和可吸收敷料的微观结构。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察2种支架浸提液的蛋白质分布。取6只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠(小鼠周龄、性别、品系下同)并提取骨髓源细胞后诱导原代巨噬细胞并鉴定。取3批次巨噬细胞, 均分为猪UBM浸提液组和可吸收敷料浸提液组, 加入含有相应浸提液的DMEM/F12培养基培养, 行划痕试验检测并计算划痕后1、3、7 d的细胞迁移率;行Transwell实验检测培养12、24 h的细胞迁移数量;培养24 h, 采用流式细胞仪检测CD206或CD86阳性细胞百分比。以上细胞实验样本数均为3。取12只小鼠, 于每只小鼠背部左右两侧各制作1个切口, 左侧切口纳入猪UBM组、右侧切口纳入可吸收敷料组, 分别植入相应支架。术后7、14 d, 行苏木精-伊红染色观测支架中浸润的炎症细胞数量, 采用免疫组织化学法观测支架中F4/80、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白...     

生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT微管乙酰化的调节作用

目的探讨生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT方向性迁移及微管乙酰化水平的调节作用, 以期为临床创面修复提供分子理论依据。方法采用实验研究方法。取HaCaT细胞, 分为置于电场装置中不通电处理3 h的模拟电场组和用强度200 mV/mm电场处理3 h的电场处理组(处理方法下同, 样本数分别为54、52), 在活细胞工作站中观察处理3 h内细胞运动的方向并计算细胞运动的位移速度、轨迹速度及运动方向性cosθ。取2批HaCaT细胞, 分为模拟电场组和用强度200 mV/mm的电场处理相应时间的电场处理1 h组、电场处理2 h组、电场处理3 h组及模拟电场组和用相应强度的电场处理3 h的100 mV/mm电场组、200 mV/mm电场组、300 mV/mm电场组, 采用蛋白质印迹法检测乙酰化α-微管蛋白的表达(样本数均为3)。取HaCaT细胞, 分为模拟电场组和电场处理组, 采用免疫荧光法观测乙酰化α-微管蛋白的表达及定位(样本数为3)。对数据行Kruskal-WallisH检验、Mann-WhitneyU检验、Bonferroni校正、单因素方差分析、LSD检验及独立样本t检验。结果处理3 ...     

改良型富血小板纤维蛋白对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面的作用

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(A-PRF)对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面的作用及其机制。方法采用实验研究方法。招募苏北人民医院40名健康志愿者, 包括32名女性、8名男性, 年龄为60～72岁, 抽取静脉血后制备富白细胞血小板纤维蛋白(L-PRF)和A-PRF膜片, 采用场发射扫描电子显微镜观察2种富血小板纤维蛋白(PRF)膜片的微观结构。以下实验样本数均为3。将L-PRF、A-PRF膜片分别设为L-PRF组、A-PRF组并进行培养, 采用酶联免疫吸附测定法检测培养1、3、7、14 d上清液中血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)和血管内皮生长因子(VEGF)的释放浓度。取小鼠L929成纤维细胞(Fb), 分为L-PRF组、A-PRF组, 并分别加入L-PRF或A-PRF条件培养基培养, 于培养1、3、7 d采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性, 采用划痕试验检测并计算划痕后24 h细胞迁移率。取36只6～8周龄雄性BALB/c裸鼠, 于一侧后腿皮肤制作1个深Ⅱ度烧伤创面后, 按随机数字表法分为生理盐水组、L-PRF组、A-PRF组, 每组12只。生理盐水组裸鼠创面仅行生理盐水冲洗, L-PRF组、...     

低剂量光动力对人脂肪间充质干细胞功能的影响及其机制

目的探讨低剂量光动力对人脂肪间充质干细胞(ADSC)的增殖、调节及分泌功能的作用及其相关机制, 以期为慢性创面的修复探索新方法。方法采用实验研究方法。取2021年2—4月于陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院皮肤科行皮肤外科手术的10例患者(5例男性、5例女性, 23～47岁)捐献的术后废弃脂肪组织, 提取细胞并鉴定表型。取3批ADSC, 各批细胞均分为仅行常规培养的正常对照组, 行海姆泊芬处理后常规培养的单纯光敏剂组, 行红光照射处理后常规培养的单纯光照组, 行海姆泊芬和红光照射处理后再常规培养的光敏剂+光照组, 样本数均为3。第1和2批细胞于处理完成后培养24 h, 分别采用脱氧尿嘧啶核苷染色法检测ADSC增殖水平, Transwell实验检测与ADSC共培养的HaCaT细胞迁移比例;第3批细胞于处理完成后培养7 d, 采用免疫荧光法检测ADSC的细胞外基质蛋白表达。取ADSC分为光动力后0 min组、光动力后15 min组、光动力后30 min组、光动力后60 min组, 每组3孔, 分别于行光动力处理后相应时间点采用蛋白质印迹法检测并计算磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m...     

人脂肪干细胞外泌体对糖尿病周围神经病变的作用及其机制

目的探讨糖尿病周围神经病变(DPN)中神经鞘胚素蛋白表达的变化及人脂肪干细胞(ADSC)外泌体对神经鞘胚素蛋白表达变化的调节作用。方法该研究为前瞻性观察性临床研究联合实验研究。将空军军医大学第一附属医院(以下简称本院)2022年5月—2023年10月收治的13例符合入选标准的DPN患者(男9例、女4例, 年龄32～68岁)作为DPN组, 将本院该段时间收治的5例符合入选标准的非糖尿病患者(男4例、女1例, 年龄29～61岁)作为对照组。采集2组患者清创或截肢后弃用组织中的趾神经或腓肠神经组织, 行苏木精-伊红染色后观察神经组织的病理学变化, 行免疫荧光染色后观察神经组织中S100β、神经鞘胚素的蛋白表达并对神经鞘胚素蛋白表达进行定量, 分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测神经鞘胚素的蛋白和mRNA表达(DPN组样本数均为13, 对照组样本数均为5)。取12只雄性3～5 d龄C57BL/6小鼠, 提取施万细胞, 并将细胞分为常规培养组(常规培养)、单纯高糖组(仅用高浓度葡萄糖溶液培养)、高糖+外泌体组(用高浓度葡萄糖溶液和提取的人ADSC外泌体培养)。培养24 h后, 采...     

白细胞介素4修饰的金纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损的作用

目的探讨白细胞介素4修饰的金纳米酶颗粒(IL-4-AuNP)对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用及其机制。方法采用实验研究方法。改进文献中的方法合成金纳米酶颗粒(AuNP)及IL-4-AuNP, 采用透射电子显微镜拍摄2种颗粒形貌并计算其粒径, 采用纳米粒度电位仪和粒度分析仪分别检测2种颗粒的表面电位和水合粒径。采用过氧化氢检测试剂盒和超氧阴离子检测试剂盒检测IL-4-AuNP的过氧化氢清除率和超氧阴离子清除率。取小鼠成纤维细胞系3T3细胞, 采用随机数字表法(下同)将其分为空白对照组、仅使用过氧化氢处理的单纯过氧化氢组、先使用IL-4-AuNP处理0.5 h再使用过氧化氢处理的过氧化氢+IL-4-AuNP组, 培养24 h后, 采用免疫荧光法检测细胞活性氧水平, 采用细胞计数试剂盒8检测细胞相对存活率。取Raw264.7小鼠巨噬细胞, 将其分为空白对照组和用IL-4-AuNP处理的IL-4-AuNP组, 培养24 h后, 采用免疫荧光法观测细胞中精氨酸酶1(Arg-1)的表达。取12只8～10周龄雄性BALB/c小鼠(小鼠周龄、性别、品系下同), 分为IL-4-AuNP组和空白对照...     

过表达膜联蛋白A1的人脂肪间充质干细胞治疗急性呼吸窘迫综合征小鼠的效果及其机制

目的探索过表达膜联蛋白A1(ANXA1)的人脂肪间充质干细胞(AMSC)治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠的效果及其机制。方法采用实验研究方法。采用流式细胞术鉴定成人AMSC后, 取第3代细胞进行后续实验。采用随机数字表法(分组方法下同), 将细胞分为转染含ANXA1基因RNA序列的质粒的过表达ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组, 另取细胞分为转染含ANXA1基因小干扰RNA序列的质粒的敲减ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组, 转染后72 h, 于荧光显微镜成像系统下观察荧光表达情况, 分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测ANXA1的蛋白和mRNA表达(样本数均为3)。取50只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠, 分为假伤组、单纯ARDS组、正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组, 每组10只。将后4组小鼠均用内毒素/脂多糖制成ARDS肺损伤模型, 假伤组小鼠模拟致假伤。伤后即刻, 假伤组、单纯ARDS组小鼠均经尾静脉注射生理盐水, 正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠对应注射正常AMSC、过表达ANXA1的AMSC、敲减A...     

孤儿核受体Nur77在衣霉素诱导小鼠海马神经元损伤中的作用：与内质网应激的关系

目的评价孤儿核受体Nur77在衣霉素(TM)诱导小鼠海马神经元损伤中的作用及其与内质网应激的关系。方法小鼠HT22细胞, 采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、Nur77特异性激动剂Csn-B组(Csn-B组)、内质网应激诱导剂TM组(TM组)和TM+Csn-B组。C组细胞正常培养24 h;Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10 μg/ml)培养细胞24 h;TM组培养基中加入TM(终浓度为200 ng/ml)培养24 h诱导细胞内质网应激损伤;TM+Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10 μg/ml)预处理细胞15 min后, 给予TM(终浓度为200 ng/ml)共同培养24 h。各组细胞处理结束后采用CCK-8试剂盒检测细胞活力, Western blot法检测内质网应激相关蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和活化的caspase-3(cleaved-caspase-3)的表达。结果与C组比较, TM组细胞活力下降, CHOP、GRP78、Ba...     

来自人骨髓间充质干细胞低表达微小RNA-127-5p的细胞外囊泡促进激素性股骨头坏死疾病进展

目的观察激素性股骨头坏死(SONFH)患者来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的低表达微小RNA(miR)-127-5p细胞外囊泡(EVs)对正常BMSCs增殖及成骨分化的影响。方法骨髓来源于郑州大学第一附属医院10例需行全髋关节置换手术的患者(激素性股骨头坏死5例, 非股骨头坏死5例), 提取其中的BMSCs进行培养。使用差速离心法分离SONFH-BMSCs-EVs并用蛋白质印迹法(Western blot)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)鉴定。将正常BMSCs中加入SONFH-BMSCs-EVs作为实验组, 对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS), 用噻唑蓝(MTT)法检测SONFH-BMSCs-EVs对BMSCs的增殖的影响。分别取两组第3代BMSCs, 提取总RNA, 使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-127-5p的表达差异。取第3代BMSCs进行成骨诱导, 诱导过程中加入miR-127-5p mimic、miR-127-5p NC, 分别用茜素红染色、MTT法、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性细胞凋亡检测, 来检验miR-127-5...     

高迁移率族蛋白B1对严重烧伤大鼠枯否细胞的影响及晚期糖基化终末产物受体的作用

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对严重烧伤大鼠枯否细胞(KC)分泌促炎性细胞因子的影响及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在该过程中的作用. 方法 将32只SD大鼠背部浸于98℃水中12 s,制成30％ TBSAⅢ度烫伤(以下称烧伤).伤后24 h,处死大鼠分离肝脏KC(32个样本),以每孔1×106个接种至24孔板中.(1)取部分细胞按随机数字表法分为2组,每组样本数为8.对照组,加入1 mL PBS液培养;HMGB1组,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激.培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测细胞表面RAGE的表达(结果以灰度值比值表示).(2)取部分细胞采用随机数字表法分为4组,每组样本数为8.对照组,加入1 mL PBS液培养;HMGB1组,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激;HMGB1+抗RAGE抗体组,经1 mL浓度为20 μg/mL抗大鼠RAGE单克隆抗体孵育2h,加入1 mL浓度为100 ng/mL HMGB1刺激;HMGB1+重组大鼠RAGE/Fc嵌合体(rrRAGE/Fc)组,将0.5 mL浓度为100 ng/mL HMGB1与0.5 mL浓度为5μg/mL rrRAGE/Fc孵育2h后,作用于细胞.培养48 h后,采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量,RNA印迹法检测细胞内TNF-α和IL-1β mRNA的表达水平(结果以灰度值比值表示).对数据进行单因素方差分析、t检验及LSD检验. 结果 (1)培养48 h后,HMGB1组细胞RAGE表达水平(1.036 ±0.101)明显高于对照组(0.191 ±0.024,t=-23.158,P=0.000).(2) HMGB1组、HMGB1+抗RAGE抗体组以及HMGB1+ rrRAGE/Fc组细胞培养上清液中TNF-α含量分别为(10.59±1.39)、(9.91±1.68)、(11.51±2.27) ng/mL,IL-1β含量分别为(2.49±0.33)、(2.08±0.32)、(2.42±0.42) ng/mL;细胞内TNF-α mRNA水平分别为0.311 ±0.009、0.301±0.047、0.326±0.016,IL-1βmRNA水平分别为0.237±0.021、0.244±0.041、0.245±0.013,3组间比较差异均无统计学意义(P值均大于0.05),均显著高于对照组[细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β含量分别为(2.69±0.14)、(0.43±0.05) ng/mL,细胞内TNF-α和IL-1β mRNA水平分别为0.140±0.022、0.077±0.005,P值均小于0.01]. 结论 HMGB1可引起严重烧伤大鼠KC分泌促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β,但RAGE在这一过程中未起主导作用.     

乳杆菌源性外囊泡对LPS诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析

目的评价乳杆菌源性细胞外囊泡(Lac-EVs)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析。方法取生长状态较好的小鼠BV2小胶质细胞, 采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS+Lac-EVs组(L+E组)。C组正常培养;L组LPS(终浓度1 μg/ml)孵育24 h;L+E组于LPS处理后24 h加入Lac-EVs(终浓度2.5 μg/ml)孵育24 h。随后采用免疫荧光染色法检测CD86和CD206的表达。取L组和L+E组细胞沉淀, 采用蛋白质组学方法筛选两组差异表达蛋白。对鉴定得到的差异表达蛋白进行生物信息学分析并采用RT-qPCR和Western blot法对载脂蛋白1(Apoa1)和G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(Git2)两个差异表达蛋白进行验证。结果与C组相比, L组CD86表达上调, CD206表达下调(P<0.05);与L组相比, L+E组CD86表达下调, CD206表达上调(P<0.05)。采用蛋白质组学法筛选出125个差异表达蛋白(FC=2.0, P<0.05), 其中66个蛋白表达上调, ...     

制备新型负压材料以构建大鼠全层皮肤缺损创面新生基质的可行性研究

目的探索制备新型负压材料以构建大鼠全层皮肤缺损创面新生基质的可行性。方法采用实验研究方法。取负压治疗中常用的聚氨酯泡沫敷料, 于扫描电子显微镜下观察其微观结构并测定其孔径(样本数为5)。分别以聚己内酯、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)为原材料, 采用熔体纺丝技术, 以测得的聚氨酯泡沫敷料孔径为纺丝间距, 分别以15、25、35 mm/s为纺丝速率制备聚己内酯负压材料和PBS负压材料, 于扫描电子显微镜下观察制备的负压材料微观结构并测定其丝径, 采用拉力试验机与复合材料试验机分别测定制备的负压材料和聚氨酯泡沫敷料的拉伸强度与拉伸模量(样本数均为5), 以筛选后续制备负压材料的纺丝速率。将对数生长期的人皮肤成纤维细胞(Fb)分别与以筛选的纺丝速率制备的聚己内酯负压材料和PBS负压材料共培养, 于共培养1、4、7 d, 用活/死细胞检测试剂盒检测材料中细胞活性与黏附情况, 用细胞计数试剂盒8法检测材料中细胞增殖水平(样本数为5)。于18只5～6周龄雌雄不限的SD大鼠背部各制备1个全层皮肤缺损创面, 伤后即刻, 将致伤大鼠按随机数字表法分为聚己内酯+聚氨酯组、PBS+聚氨酯组、单纯聚氨酯组(每组6只...     

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增...     

脂氧素A4对LPS诱导小胶质细胞活化的影响及SIRT1/NF-κB信号通路在其中的作用

目的评价脂氧素A4(LXA4)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及沉默信息调节因子1(SIRT1)/NF-κB信号通路在其中的作用。方法实验Ⅰ:取生长状态良好的小鼠BV2小胶质细胞, 采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、LXA4组、LPS组和LPS+LXA4组(LL1组)。实验Ⅱ:采用随机数字表法将小胶质细胞分为2组(n=30):LPS+LXA4组(LL2组)、LPS+LXA4+SIRT1抑制剂EX527组(LLE组)。C组正常培养;LXA4组和LPS组分别加入LXA4(终浓度100 nmol/L)、LPS(终浓度100 ng/ml)孵育24 h;LL1组和LL2组于LPS处理前1 h加入LXA4(终浓度100 nmol/L), 其余处理方法同LPS组;LLE组于LXA4处理前30 min加入EX527(终浓度为5 μmol/L), 其余处理方法同LL2组。采用qRT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD32、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206以及IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA表达, ELISA法检测上清液IL-1β、IL...