人细小病毒B19中国株结构蛋白VP1的克隆及表达

目的 :构建人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的重组表达载体 ,探索大量表达VP1蛋白的最佳条件。　方法 :从该科保存的人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的重组克隆载体中获得VP1基因片段 ,将该片段亚克隆入表达载体pQE 30 ,构建VP1 pQE 30原核表达载体 ,并转化至感受态大肠杆菌M1 5中 ,给予不同浓度诱导剂异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)及在不同温度下进行诱导表达。　 结果 :成功构建了融合蛋白VP1 pQE 30的重组表达质粒 ,表达的融合蛋白经 1 5 %SDS PAGE电泳证实其相对分子质量为 2 2 0 0 0。IPTG浓度为 1mmol/L ,诱导表达 5h ,37℃下无表达 ,2 5℃下有表达 ;采用不同的IPTG浓度诱导表达 5h ,0 .0 5mmol/L至 1mmol/L均有表达 ,表达率相近 ,为 (1 6± 1 ) %。　结论 :获得人细小病毒B1 9中国株结构蛋白VP1基因片段的原核表达载体及其产物 ,对进一步研究其纯化及制备单克隆抗体和疫苗有重要意义     

人细小病毒B19 XA株VP1蛋白原核表达及初步鉴定

目的:通过DNA 重组技术,构建B19 病毒XA株VP1全长基因表达载体, 诱导重组VP1融合蛋白表达. 方法:自B19病毒感染患者血清中提取病毒DNA为模板,用PCR法扩增编码VP1蛋白的全长基因片段,以pET28(a)为表达载体,构建重组表达质粒pET28(a)-VP1,转化E. coli. BL21(DE3),获得重组工程菌株.经IPTG诱导培养获得高效表达的VP1融合蛋白,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物;并以该重组融合蛋白为抗原,免疫家兔,ELISA法检测所获抗体效价. 结果:①获得了含重组表达质粒pET28(a)-VP1的正相阳性工程菌株,经IPTG诱导能高效表达VP1融合蛋白.②经ELISA法检测抗VP1多克隆抗体效价为1: 12 800. 结论:重组工程菌可表达VP1融合蛋白,且该蛋白具有良好的免疫原性,对诊断试剂制备及疫苗研制具有重要意义.     

人细小病毒B19

细小病毒 B19(Human parvovirus B19. HPVB19)是由Cossart等 (1974年 )从编号为 B19无症状健康供血员血液中偶然发现。属细小病毒科细小病毒属 ,是该属病毒中唯一能感染人类的病毒 ;也是动物病毒中以对人类具有致病性的最小的单链线状 DNA病毒。是近十余年来发现的一个重要病源体 ,与人类多种疾病密切相关 [1 ] 。1　病毒学B19能独立地自我复制 ,其基因组相对较小 ,长约 5 .5 Kb。电镜下 B19颗粒直径平均为 2 3nm,呈对称二十面体 ,分子含量为 (1.5 5～ 1.97)× 10 6 。 B19是一种热稳定病毒 ,在 6 0℃能存活 12 h[2 ]。B19有两种结构…     

人细小病毒B19中国株VP1蛋白独特区基因片段序列变异分析

目的 研究B19病毒中国株独特区VP1的基因变异。方法 采用聚合酶链反应技术（PCR）从两侧中国再生障碍性贫血患儿血清中扩增VP1独特区基因片段，将其与PUC19连接，酶切鉴定筛选阳性克隆后测序分析。结果 从一个患儿的血清中扩增出约480bp目的片段，并成功构建PUC19－VP1质粒，测序结果显示，与国外已发表的Wi株VP1独特区序列相比，有2处核苷酸发生改变，并可致所编码的氨基酸变化。结论 中国B19病毒VP1独特区有变异。     

人细小病毒B19与疾病相关性研究

人细小病毒Ｂ19(ＨｕｍａｎＰａｒｖｏｖｉｒｕｓＢ19,ＨＰＶＢ19)是近十余年来发现的一个重要病原体 ,文献报告与人类多种疾病相关。为研究梧州及周边地区Ｂ19感染的疾病谱 ,现将我院门诊及住院患者检测情况作一总结报告。1　对象与方法1.1　对象 :1999年 11月 15日～ 2 0 0 1年 6月 2 0日在我院门诊及住院患者中共检测 32 9人 ,年龄 4小时～ 82岁。男 179人、女 15 0人。病种 75种 ,血液系统疾病 4 2人 ,肿瘤患者 71人 ,结缔组织疾病 30人 ,呼吸道感染 5 7人 ,异常妊娠 2 8人 ,其他 10 1人。同期正常人组 14 1人 ,年龄 1天～ 6 0岁 ,男 5 …     

人微小病毒B19 VP1基因原核表达克隆的构建

①目的　构建人微小病毒B19VP1基因的原核高效表达系统。②方法　通过PCR扩增B19病毒主要抗原决定簇VP1区段基因 ,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX 4T 2上 ,IPTG诱导表达融合蛋白 ,产物经亲和层析初步纯化 ,以Western Blot进行鉴定 ,并包被ELISA板 ,对临床血清进行检测。③结果　pGEX 4T 2 VP1可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物经纯化后可得单一目的蛋白条带。ELISA结果表明 ,其灵敏度、特异度等指标与德国Virion试剂盒有较好的符合率。④结论　该重组蛋白具有良好的抗原性 ,为研制和开发具有我国独立知识产权的B19病毒基因工程抗原ELISA诊断试剂盒提供了有价值的资料     

人细小病毒B19感染研究现状

人细小病毒B19于1975年被发现:现已证实,它与人类的多种疾病有关,影响范围遍及世界各地。本文就人细小病毒B19感染有关疾病的临床、发病机理、实验诊断、流行病学及其预防等同题作一综述。     

人微小病毒B19非结构蛋白1损伤细胞机制的研究进展

人微小病毒B19（human parvovirus B19）于1975年在筛选健康献血者血液中乙型肝炎病毒时偶然发现，并因此而得名。该病毒是一种DNA病毒，无被膜，长约5．5kb，分子质量约50-80ku，是对称二十面体，平均直经约25mm，它是微小病毒科微小病毒属的成员（微小病毒科还包括依赖性病毒属和浓核病毒属），是该属病毒中惟一能使人类致病的病毒，     

聚合酶链反应检测人细小病毒B19-DNA

作者业已通过检测血清中特异性IgG,首先在我国证明存在人细小病毒B19感染[王绮云,等.第四军医大学学报 1991;12(2):134～136]。为探索敏感的临床诊断技术,研究B 19病毒的致病性,作者建立了聚合酶链反应检测人细小病毒B 19-DNA方法,并用于临床标本检测。1 材料和方法1.1 PCR引物和试剂 引物选自编码 B19病毒     

细小病毒B19诊断芯片探针的制备

目的 制备细小病毒B19诊断芯片探针。方法 利用Primer Premier5．0软件针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物，纯化扩增产物，克隆鉴定。结果 序列分析表明，扩增片段均为细小病毒B19特异基因。结论 利用PCR扩增产物可制备细小病毒B19诊断芯片探针。     

人细小病毒B19与异位妊娠关系的初步研究

目的　探讨异位妊娠与人细小病毒B1 9(HPVB1 9)的关系。方法用聚合酶连反应 (PCR)检测异位妊娠和妊娠无异常妇女血清中的人细小病毒B1 9DNA。结果　病例组 :76例异位妊娠组的血清中HPVB1 9DNA有 1 8例阳性 ,阳性率为 2 3 .68% ;对照组 :40例妊娠无异常孕妇HPVB1 9DNA ,有 2例为阳性 ,阳性率为 5 .0 0 % ,P <0 .0 5 ,两组有显著性差异。结论　人细小病毒B1 9感染可能是异位妊娠的原因之一。     

应用PCR－SSCP方法初步分析入微小病毒B19基因变异

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法初步分析了从华南地区收集的３份畸胎组织标本中人微小病毒Ｂ１９分离株，其电泳图谱与国外参考株相同，提示两者衣壳蛋白ＶＰ１编码区的基因结构可能无差异。     

人细小病毒B19感染与再生障碍性贫血的关系

探讨人细小病毒Ｂ１９（Ｂ１９）感染与再生障碍性贫轿的关系。方法应用巢式聚合酶链反应技术检测６０例ＡＡ患者血清中Ｂ１９－ＤＮＡ。结果：Ｂ１９－ＤＮＡ阳性１６例，与正常对照组楷较有非常显著性差异；但儿童对照组比较有非常显著差异；但儿童与成人及急性与慢性ＡＡ间，无显著性差异。结论：Ｂ１９感染与ＡＡ的发生有关。可能是引起人类ＡＡ物的重要病因。     

人类微小病毒B19与小儿血液病的关系

目的 :探讨人类微小病毒B19与小儿血液病的关系。 方法 :采用酶联免疫吸附 (ELISA)法 ,对 37例血液病患儿的血清标本进行B19 IgM和B19 IgG检测 ,并与对照组进行比较。 结果 :在 37例患儿血清标本中 ,原发性血小板减少性紫癜 (ITP)B19 IgM的阳性检出率为 4 4 4 7% ,再生障碍性贫血 (AA)B19 IgM阳性检出率为4 1 2 % ,与对照组相比 ,差异均有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,急性白血病 (AL)与对照组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。ITP、AA的B19 IgG的阳性检出率与对照组相比差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 结论 :人类微小病毒B19感染与ITP、AA有关     

国人细小病毒B19感染相关疾病谱

目的：探讨我国人细小病毒Ｂ１９感染引起的相关疾病谱。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术及原位杂交技术对６６例先天性心脏病（ＣＨＤ）心肌组织标本及１０８例血小板减少性紫癜（ＴＰ）、４７例急性再生障碍性贫血（ＡＡＡ）、５例传染性红斑（ＥＩ）及４０例缺铁性贫血（ＩＤＡ）患儿的外周血、骨髓标本进行了Ｂ１９－ＤＮＡ检测,并随机对其中２３例Ｂ１９－ＤＮＡ阳性标本作巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、     

人微小病毒B19感染与Kikuchi病的相关性

目的:研究人微小病毒B19感染与组织细胞性坏死性淋巴结炎(KFD)的相关性.方法:采用双盲法在32例KFD患者及13例正常对照淋巴结活检组织中用原位杂交和免疫组织化学染色方法检测B19病毒基因组DNA和病毒蛋白.并采用原位杂交和免疫组化双标记法确定病毒感染的细胞类型.结果:在32例KFD患者淋巴结中,B19病毒DNA和病毒蛋白阳性率分别为71.9%和59.4%,而在对照淋巴结中,二者阳性率分别为30.8%和23.1%.统计学分析显示B19病毒基因组DNA和病毒蛋白在KFD中有更高感染率(P值分别为0.011和0.027).病毒感染的细胞大部分为淋巴细胞,少数组织细胞也是病毒感染的靶细胞.结论:微小病毒B19在KFD中有更高的感染率,微小病毒B19与KFD的发病有密切关系.     

特发性血小板减少性紫癜患儿血清微小病毒检测

目的 :探讨人微小病毒B19(HPVB19)感染与儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)发病的关系。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)技术对 4 8例ITP患儿和 32例健康儿童的血清标本进行HPVB19-DNA检测 ,并用酶联免疫法 (ELISA)检测血小板相关抗体。结果 :4 8例ITP患儿血清中HPVB19-DNA阳性率 37.5 % (18/48) ,32例健康儿童HPVB19-DNA均为阴性 ,2组间差异有统计学意义 (P <0 .0 0 5 ) ;ITP组中急性型与慢性型之间HPVB19阳性率差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;病毒感染阳性患儿的血小板相关抗体明显高于病毒感染阴性患儿 ,差异有统计学意义(P <0 .0 1)。结论 :ITP患儿血清中HPVB19-DNA阳性率高 ,尤其是急性型 ;HPVB19感染可导致血小板相关抗体升高而致血小板减少