FKN/CX3CR1信号途径抗凋亡作用的研究进展

不规则趋化因子(fractalkine,FKN)又称为CX3CL1,是CX3C家族的唯一成员,它以膜结合型和可溶型两种活性形式存在。FKN在人体内皮细胞以及大多数器官上均有表达,如心、肝和脑等。近年来发现FKN不仅涉及到趋化、粘附和炎症反应,也参与某些细胞的增殖和凋亡。FKN作为抗凋亡因子,通过其唯一受体CX3CR1,在各种疾病模型中发挥抗凋亡作用,它们介导的生存信号参与调控正常的生理病理过程,且与疾病的发生发展密切相关。FKN/CX3CR1可望成为疾病预防治疗的新靶点。     

Fractalkine与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是由多种原因引起,导致血脂异常及血管壁成分改变的动脉疾病。据调查,目前我国AS发病率仍呈上升趋势,多见于中、老年人。Fractalkine(FKN)作为趋化因子CX3C亚家族的唯一成员,与其受体CX3CR1结合后,导致血管内皮损伤,与此同时,单核细胞、淋巴细胞向血管内皮细胞趋化、粘附,最终促使As的形成。现对FKN与As之间的关系进行简要综述。     

辛伐他汀对缺血再灌注大鼠趋化因子FKN及其受体CX3CR1的影响

目的:探讨趋化因子FKN及受体CX3CR1与缺血再灌注的关系以及辛伐他汀对FKN及受体CX3CR1的影响.方法:建立大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分成假手术组、缺血再灌注组、辛伐他汀干预组,用免疫组化方法观察心肌中的FKN及白细胞中的受体CX3CR1表达的变化.结果:与假手术组比较,缺血再灌注组、辛伐他汀组再灌注后1h FKN蛋白均显著上调,并于2h达高峰,CX3CR1蛋白表达于间质浸润白细胞,并与FKN表达呈现相似的动态变化特征.辛伐他汀组不同时间段FKN和CX3CR1的表达均低于缺血再灌注组.结论:趋化因子FKN及其受体CX3CR1参与了缺血再灌注损伤;辛伐他汀可有效降低FKN及其受体CX3CR1在缺血再灌注中的表达,从而减轻缺血再灌注损伤.     

趋化因子Fractalkine及其受体CX3CR1预测重型急性胰腺炎的价值研究

目的 检测重型急性胰腺炎（SAP）患者血浆中趋化因子Fractalkine（FKN）及其受体CX3CR1的表达水平,判断其能否作为SAP的预测指标。方法 选取2012年12月-2014年9月宁夏医科大学总医院收治的因急性上腹痛起病,症状出现在3 d以内,依据2013年《中国急性胰腺炎诊治指南》诊断为急性胰腺炎的患者65例为研究对象,其中轻型急性胰腺炎（MAP）20例（30.8%）,中型急性胰腺炎（MSAP）25例（38.4%）,SAP 20例（30.8%）,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测患者血浆中FKN及其受体CX3CR1表达水平。比较不同病情程度急性胰腺炎患者FKN及其受体CX3CR1表达水平,绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线）,计算ROC曲线下面积（AUC）,判定预测SAP的最佳截点及其灵敏度、特异度、正确率。结果 不同病情程度急性胰腺炎患者FKN及其受体CX3CR1表达水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中SAP患者FKN及其受体CX3CR1表达水平高于MAP、MSAP患者（P＜0.05）。FKN及其受体CX3CR1预测SAP的AUC分别为0.865、0.897,最佳截点分别为2.08 μg/L和38 μg/L,灵敏度分别为86.96%、90.91%,特异度分别为76.27%、88.24%,正确率分别为79.27%、89.04%。结论 SAP患者FKN及其受体CX3CR1表达水平高于MAP、MSAP患者,FKN及其受体CX3CR1可作为预测急性胰腺炎严重程度的有效指标之一,值得进一步深入研究。     

fractalkine影响动脉粥样硬化信号的转导机制及卡托普利的干预作用

目的:通过鸟苷酸结合蛋白（G-蛋白）对不规则趋化因子fractalkine（FKN）诱导单个核细 胞合成核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨FKN及其受体CX3CR1 可能存在的信号转导机制及卡托普利的干预作用。方法：将抗凝血用Ficoll密度梯度离心 法分离外周血单个核细胞,随机分为空白对照组、FKN组、PTX组、RO31-8220组、PDTC组及 卡托普利组,应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,应用酶联免疫法检测各 组培养液中TNF-α的表达水平。结果：FKN组与空白组比较NF-κB 、TNF-α表达明显增多( P<0.05);G-蛋白阻断剂PTX组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达明显减少(P<0.05); PKC阻断剂RO31-8220组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达减少(P<0.05);NF-κB抑制剂PDTC组TNF-α表达较FKN组明显减少(P<0.05);卡托普利组较FKN组NF-κB 、TNF-α表达部分减少(P<0.05)。结论：FKN/CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、 TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN/CX3CR1诱导单个核细胞合成NF-κB、 TNF-α,抑制炎症反应和抗动脉粥样硬化;FKN/CX3CR1影响动脉粥样硬化的信号转导机制可能是通过以下级联反应实现的：FKN+CX3CR1→G蛋白→PKC→NF-κB→TNF-α。     

FKN与2型糖尿病视网膜病变的相关性

2型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是最常见的糖尿病微血管并发症之一,是目前世界范围内致盲的主要原因之一,严重影响着患者的身体健康和生活质量。通过查阅相关资料,本研究发现不规则趋化因子(fractalkine,FKN)与2型糖尿病视网膜病变的发生具有一定的相关性。DR发生时患者血清及房水内FKN及其受体CX3CR1表达上调,异常表达的FKN趋化因子及其受体可引起视网膜低度炎症、信号通路激活以及新生血管形成,进而导致DR的发生。但FKN在DR中的作用机制仍需进一步研究,为DR患者提供更多的靶向治疗方法。     

Fractalkine参与狼疮性肾炎发病机制的研究进展

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是继发性肾小球疾病,病情复杂、预后不良,发病机制尚未明确。趋化因子Fractalkine(FKN)具有趋化、黏附和介导免疫损伤等多种功能,参与了肾炎症的发生发展。文章就FKN的结构与功能、参与包括狼疮性肾炎在内等多种肾疾病发病机制等方面作一综述。     

Expression of fractalkine and its receptor in acute cardiac allografts rejection

Objective To investigate the expression of fractalkine(FKN) and its receptor CX3CR1 in cardiac allografts and the effect of Cyclosporin A(CsA). Methods Three groups of rats underwent heterotopic cardiac transplantation, 45 cases in each group and 5 cases in control group:SD to SD regarded as isograft group (group A), Wistear to SD divided into CsA untreated allograft group(group B) and CsA treated allograft group (group C), normal SD rats as control group. The FKN mRNA expression was detected by one-step RT-PCR method and the expression of FKN and CX3CR1 protein was detected by standard ABC immunohistochemical technique. Results The expressin of FKN mRNA and protein was weak in both isografts and normal heart specimens. The changes of FKN mRNA expression were correkted with the process of acute allograft rejection. The peak of FKN mRNA expression(0.8 ±0.26) appeared on the seventh day after transplantation, which could be downregulated by CsA significantly ( t = 2.390, P < 0.05). FKN protein was locate     

FKN刺激人单个核细胞Akt活化及Akt活化与PI3K、NF-κB的关系

Fractalkine(FKN)是新发现的一种在动脉粥样斑块中过量表达的趋化因子,与其受体CX3CR1结合,介导白细胞黏附和趋化以及血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移,并刺激炎症因子的表达和血小板的活化,因此被认为参与介导动脉粥样硬化(AS)的炎症反应。蛋白激酶B(PKB,又名Akt)是与炎症和白细胞的趋化过程密切相关的信号分子,通过介导白细胞的黏附和趋化、VSMC的迁移及血小板的活化而在AS的形成和进展中发挥作用。关于FKN/CX3CR1的信号转导机制目前尚不明确,本实验的前期工作已经证实,FKN可以刺激人外周血单个核细胞NF-κB信号分子的活化[1,2],本次通过研究FKN可否刺激人外周血单个核细胞Akt活化,以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、NF-κB与Akt活化的关系,进一步探讨FKN的信号转导机制。     

转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

目的：研究在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向趋化因子Fractalkine（FKN）趋化能力的影响。方法：采用差速贴壁法分离纯化小鼠MSCs,体外培养、传代扩增,流式细胞术检测细胞表面抗原标志和细胞周期;将携带有趋化因子受体CX3CR1基因及绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因的慢病毒（LV-CX3CR1-EGFP）及空载体病毒（LV-CON-EGFP）转染小鼠MSCs细胞,RT-PCR法分别检测空白对照组、实验组、阴性对照组细胞中CX3CR1 mRNA表达情况,Western blot印记法检测CX3CR1蛋白的表达水平,并通过Transwell共培养体系观察不同转染组细胞向趋化因子FKN的迁移情况。结果：成功获得了细胞形态均一,生长状态良好的MSCs;细胞CD29、CD44、CD34有阳性表达;阴性对照组和空白对照组小鼠MSCs不表达CX3CR1基因;构建的慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP能成功转染至小鼠MSCs中,并使转染后的MSCs表达CX3CR1 mRNA及蛋白。在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因的小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化能力明显强于各对照组（P=0.000）,其中阴性对照组浸润至下室的细胞数为：（13.80±2.17）个每高倍镜视野（n=5）。实验组浸润至下室的细胞数为：（35.80±3.34）个每高倍镜视野（n=5）。FKN抗体阻断组浸润至下室的细胞数为（14.80±1.92）个每高倍镜视野（n=5）。结论：转染CX3CR1基因能有效增加小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化的能力。     

CX3CR1基因多态性与颈动脉内-中膜增厚的关系

目的 探讨Fractalkine(FKN)受体CX3CR1 基因多态性V249I和T280M与颈动脉内-中膜增厚(IMT)的相关性.方法 选取117例颈动脉IMT病人和93例无增厚对照者,通过聚合酶联反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)确定基因型.结果 T280M和TM与TT的OR值为1.896,与颈动脉IMT有关(95%CI:1.015～3.542,P=0.043),而V249I和VI与VV之间差异无显著意义(95%CI:0.531～1.600,P=0.772).多变量Logistic回归分析显示,T280M是颈动脉IMT的独立危险因素(95%CI:1.247～8.297,P=0.016).结论 CX3CR1 T280M是颈动脉IMT的一个独立危险因素,而V249I在颈动脉粥样硬化过程中不起主要作用.     

Role of CX3CL1 in the chemotactic migration of all-trans retinoic acid-treated acute promyelocytic leukemic cells toward apoptotic cells

BackgroundPhagocytic clearance of apoptotic neutrophils by tissue macrophages is a crucial component in the resolution phase of acute inflammation. However, the number of tissue macrophages is low and not likely to cope satisfactorily with the excess number of dying neutrophils. Although recent studies have reported that neutrophils are able to engulf apoptotic neutrophils, the mechanisms by which living neutrophils are attracted to apoptotic neutrophils are poorly defined. Increased amounts of CX3CL1 and microparticles (MPs) are rapidly released by apoptotic cells, and are involved in the chemoattraction of mononuclear phagocytes toward apoptotic cells. The current study investigated the role of CX3CL1 in the chemoattraction of all-trans retinoic acid (ATRA)-treated NB4 (ATRA-NB4) cells toward apoptotic cells.MethodsConditioning medium and MPs were harvested from apoptotic ATRA-NB4 cell cultures to determine their effects on living ATRA-NB4 cells by transmigration assay and adhesion assay. The cytokine levels in the conditioning medium were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Expression of CX3CR1 (a receptor of CX3CL1) on ATRA-NB4 cells was determined by flow cytometric analysis.ResultsATRA-NB4 cells transmigrated toward the apoptotic ATRA-NB4 cells, and this chemoattraction was partially inhibited when the CX3CR1 on ATRA-NB4 cells was blocked by its specific antibody. Both exogenous CX3CL1 and MPs released by apoptotic ATRA-NB4 cells were able to enhance the chemoattraction of ATRA-NB4 cells toward apoptotic cells or the adhesion of ATRA-NB4 cells to endothelial cells. CX3CL1 was expressed on the surface of MPs, and blocking this CX3CL1 with its specific antibody was able to partially inhibit the chemoattractive property of MPs.ConclusionCX3CL1, in either the free or MP form, is released rapidly by apoptotic ATRA-NB4 cells after induction of apoptosis to mediate the chemoattraction of living ATRA-NB4 cells toward apoptotic cells.     

趋化因子FKN对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响及ERK、PI3K和NF-κB在其中的作用

目的：通过研究趋化因子Fractalkine（FKN）对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响,以及信号分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）在其中的作用,探讨FKN促进动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞;将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组、PD98059（ERK阻断剂）组、LY294002（PI3K阻断剂）组、PDTC（NF-κB阻断剂）组、FKN＋PD98059组、FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组;分别于培养12 h和24 h后收集细胞培养上清,应用ELISA检测各组单个核细胞中IL-8的表达情况。结果（1）细胞培养12 h或24 h后,PD98059组、LY294002组和PDTC组与空白组比较,IL-8表达有减少趋势,但差异无显著性意义（P＞0.05）。（2）FKN组较空白组IL-8表达明显减少（P＜0.05）,FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组较FKN组IL-8表达明显增加（P＜0.05）,FKN＋PDTC组较FKN组、FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组IL-8表达均明显减少（P＜0.05）。（3）细胞培养24 h后,各组IL-8表达均较12 h明显减少（P＜0.05）。结论趋化因子FKN可能通过ERK、PI3K信号途径抑制单个核细胞IL-8的表达,而通过NF-κB途径促进IL-8的表达,FKN对单个核细胞IL-8的表达具有双向调节作用,但以抑制作用为主。     

脾胃湿热证的临床研究

为探讨脾胃湿热证的临床意义和现代含义,采用流行病学的方法和病理学,细菌学,免疫学和生物化学等多指标的方法进行研究。结果：４００例湿热证中,属炎症性病的４３种,占西医病的５９．７％。在慢性胃炎的研究中发现,湿热证组的活动性炎症和ＨＰ的感染程度均显著高于脾虚证组,湿热证组的ＯＫＴ３,ＯＫＴ４,ＯＫＴ４／ＯＫＴ８,ＬＣＴ,ＩｇＧ,Ｃ３,ＣＩＣ,Ｎａ＾＋Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｃ活性,ＡＴＰ含量,尿１７－ＯＨＣ     

包头市汉族人群CX3CR1基因多态性研究

目的:探讨CX3CR1基因多态性在包头汉族人群中的分布,以了解不同地域和民族CX3CR1基因型及等位基因频率的差异,明确CX3CR1基因多态性的遗传易感性。方法:自2009年1月1日至2009年10月30日前瞻性登记包头医学院第一附属医院住院的包头市汉族缺血性脑卒中患者163例(病例组)和同期门诊的汉族健康体检者100例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测CX3CR1基因T280M、V249I多态性分布。结果:对照组CX3CR1基因T280M表现为TT(95.0%)、TM(5.0%)型,V249I表现为VV(88.0%)、VI(12.0%)型,缺乏MM、II型;病例组CX3CR1基因T280M表现为TT(82.8%)、TM(16.0%)和MM(1.2%)型,V249I表现为VV(73.0%)、VI(25.2%)和II(1.8%)型,两组基因型别比较差异均有统计学意义(P0.05),T、V等位基因在CX3CR1的基因多态性中起着主要作用。结论:包头市汉族缺血性脑卒中人群CX3CR1基因型以TT、VV型为主,健康人群缺乏MM、II型,T280M、V249I中T、V等位基因位点的突变可能增加缺血性脑卒中的易感性。     

辛伐他汀对急性冠脉综合症患者单核细胞CX3CR1表达的影响

目的 观察辛伐他汀对CX3CR1表达的影响,探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用.方法 63例冠状动脉造影确诊为急性冠脉综合征的患者按照处理因素不同分为对照组、10-7～10-5mol/L辛伐他汀不同浓度组和作用4、8、12 h不同时间组,用荧光定量RT-PCR技术检测各组患者中外周血单核细胞CX3CR1的表达情况.结果 不同浓度组中CX3CR1的表达均低于正常对照组(P<0.05),不同作用时间组中CX3CR1的表达均低于正常对照组(P<0.01).结论 辛伐他汀可降低CX3CR1的表达且呈浓度和时间依赖性,从而发挥抗炎及稳定斑块的作用.     

血浆FKN浓度预测冠脉病变严重程度

目的 探讨血浆FKN浓度预测冠心病患者冠脉病变严重程度的价值.方法 对2015年7月至12月于昆明市第一人民医院行冠脉介入诊断和\或治疗的患者89例,按冠脉造影结果,将患者分为3组,其中急性心肌梗死(AMI)患者或血管严重病变患者43例(B组);冠脉血管单支轻度病变患者26例(B1组);冠脉造影正常,排除冠心病患者20例(N组),共计89例.分别收集各组临床基线资料.采用ELISA法测定FKN浓度.用SPSS进行统计分析.结果 研究结果,FKN浓度B组>B1组>N组,各组之间差异有统计学意义(P<0.000).FKN浓度与c Tn T及冠脉Gensini评分呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05).研究中FKN诊断冠心病的ROC曲线下面积(AUC)0.784,诊断冠心病急性心肌梗死的界值为1.996 ng/mL.结论 研究发现血浆FKN浓度随冠脉病变程度逐渐升高.血浆FKN浓度诊断的特异性及敏感性与c Tn T相似,能为冠心病患者预测冠脉病变严重程度提供依据.     

Fractalkine在狼疮性肾炎患者血液和肾组织中的表达及其意义

目的研究Fractalkine（FKN）在狼疮性肾炎（lupus nephritis, LN）患者血液和肾组织中的表达及其意义。方法选取48例
LN患者,根据病理分型分为轻型组22 例、重型组26 例,采用RT-PCR 检测患者血液中FKN mRNA的表达、酶联免疫吸附法
（ELISA）检测患者血液中FKN蛋白的表达,并与26例正常对照比较;同时通过免疫组织化学染色法测定LN患者肾组织FKN
的定位与表达情况。结果与正常对照组相比,LN中轻型组和重型组患者血液中FKN的mRNA和蛋白的表达均明显升高,且重
型组升高更为显著（P<0.01）,重型组FKN mRNA和蛋白的表达也明显高于轻型组。在LN患者肾组织中,FKN主要表达于肾
小球足细胞和肾小管上皮细胞的胞浆中,重型组肾小球FKN阳性细胞数较轻型组明显增多（P<0.01）,但皮质间质的FKN阳性
细胞数无差异（P>0.05）。结论FKN在LN患者血液和肾小球中的表达与LN的肾组织病理损伤表现的程度有关。