大肠癌细胞中C—erbB—2基因扩增与临床的关系

应用差异聚合酶链反应方法检测了２３例大肠癌组织的Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。结果发现在７例（３４．４３％）的大肠癌组织内存在Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增。高－中分化管状腺癌的Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增阳性率（３／３）高于中分化管状腺癌（４／１７）（Ｐ＜０．０５）。在已有淋巴结转移的大肠癌患者，ＣｅｒｂＢ－２扩增的阳性率为５／１３（３８．４６％），而尚无淋巴结转移患者的阳性率为２／１０（２０％），但差异无统计学意     

大肠癌中C—erbB—2基因扩增的研究

应用差异ＰＣＲ技术研究了大肠癌中Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增情况。结果发现,大肠癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因存在明显扩增,该基因的扩增与大肠癌组织学分级、远处转移之间均有非常显著的关联。大肠癌中随着癌组织学分级程度的加重,Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增逐渐向高、低拷贝转移,说明,Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增在一定程度上反映着大肠癌分化状态和生物学行为,可作为大肠癌患者预后的重要参数,并可指导临床治疗。     

C8orf4基因在大肠癌中的表达

目的：筛查大肠癌分化相关分子标志物。方法：应用美国Affymetrix HG-U133寡核苷酸芯片对不同分化程度大肠癌组织和正常大肠黏膜组织的基因表达谱进行检测。采用肿瘤样品分类法（T-class）对各样品进行基因分类。并应用实时荧光定量RT-PCR检测候选基因在不同分化程度大肠癌中的差异表达。结果：T-class分析获得分类精度100%的大肠癌分化差异表达基因＆ ESTs 8个。其中C8orf4基因（chromosome 8 open reading frame 4）经非多元统计分析，在大肠癌组较正常黏膜表达下调。实时荧光定量RT-PCR检测该基因在不同分化程度大肠癌组间表达，其标准化表达值与基因芯片该基因探针组信号值相关性分析，呈线性相关。两种方法检测C8orf4基因在不同分化程度大肠癌组表达趋势相符。结论：C8orf4基因与大肠癌分化密切相关，可作为大肠癌分化的候选分子标志物。     

癌基因C－erbB－2蛋白产物的表达与大肠癌的关系

为探讨癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白产物的表达与大肠癌的关系，本文应用免疫组织化学法对５５例大肠癌粘膜及３５例正常大肠粘膜的Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白产物进行了检测。结果显示，在大肠癌中有４１例（７４．６％）Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达呈阳性，而正常粘膜只有１例（２．９％）Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达呈阳性，且Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达程度与大肠癌的临床分期（Ｄｕｋｅｓ）、病理组织分化及预后密切相关。提示癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白产物的检测可能对判断大肠癌的恶性程度和预后有一定意义。     

食管癌c－myc基因扩增的临床意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４１例食管鳞癌石蜡包埋标本进行了ｃ－ｍｙｃ基因的研究。结果发现：ｃ－ｍｙｃ基因扩增与淋巴结转移及临床病理分期有密切关系（Ｐ＜０．０１）。ｃ－ｍｙｃ基因扩增者，淋巴结转移较多，临床病理分期较晚，同时还发现ｃ～ｍｙｃ基因扩增与预后有明显关系（Ｐ＜０．０５），ｃ－ｍｙｃ基因扩增者预后较差。提示ｃ－ｍｙｃ基因可以作为判断食管鳞癌预后的检测指标之一。     

用改良的竞争性聚合酶链反应测定乳腺癌癌基因HER2、mdm－2和myc的扩增

使用改良的竞争性聚合酶链反应法，对１５例乳腺癌基因ＨＥＲ２、ｍｄｍ－２和ｍｙｃ的扩增进行测定，发现分别有５、６和６例存在扩增。其中ＨＥＲ２和ｍｄｍ－２基因的扩增分别与肿瘤临床分期和淋巴结转移存在相关关系，说明上述基因扩增的测定可以成为对乳腺癌病人进行预后判断和研究乳腺癌生物学行为的指标。这种方法具有准确、操作简单、对ＤＮＡ质量和数量要求不严格、不需使用同位素等优点。     

非同位素PCR－SSCP分析检测结肠腺瘤与腺癌中K－ras基因改变

运用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析检测结肠腺瘤与腺癌中Ｋ－ｒａｓ基因的改变，探讨该基因改变与结肠腺瘤不典型增生、结肠腺癌分期及分化程度之间的关系。结果显示，与自身正常及癌旁粘膜比较，２４例结肠腺场中，５例出现单链带的泳动变位，阳性率为２１％；１８例腺瘤中检出２例有单链带泳动变位，均为伴局部场变的腺瘤组织，提示当腺瘤发生ｒａｓ基因改变时，其恶性倾向增大。但结肠癌的分期及分化程度与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析阳性率无明显相关性。增生性及幼年性息肉均未检出有改变。该法简便快速，不用同位素，可适用于临床标本检测。     

鼻咽癌细胞中MDM2基因扩增与表达的研究

应用斑点杂交和半定量逆转录 多聚酶链反应技术对 3 2例鼻咽癌 (NPC)标本、10例慢性鼻咽炎症粘膜(CINE)标本、NPC细胞株HONE1进行MDM2基因扩增与表达的检测。结果显示 :1例NPC有MDM2基因的扩增 ,NPC细胞株HONE1和 10例NPC有MDM2mRNA高表达 ,CINE无MDM2基因的扩增及mRNA的高表达。MDM2基因的高表达与NPC颈淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,而与NPC的T分期无关。提示MDM2基因在NPC中的主要活化方式是高表达而不是扩增 ,MDM2基因的高表达可能在NPC的发生和转移过程中起着重要作用。     

PCR—RFLP分析人结直肠癌DCC基因杂合性缺失

目的；探讨ＤＣＣ基因在结直肠癌中杂合性缺失情况及其意义。方法；应用ＰＣＲ技术检测了２５例中国人散发型结直肠癌病人正常粘膜及癌组织和３个直肠癌细胞系ＤＣＣ基因Ｍ２位点限制性片断长度多生。结果；１６例（６４％）病人具有杂合生，其中４例（２５％）癌组织表现等位基因杂合性缺失。此４例均有淋巴结或肝转移。细胞系ＨＣＴ，ＨＲ８３４８表现杂合性，ＨＴ２９表现纯合性，结论；ＤＣＣ基因是一个在结直肠肿瘤发生发展中起     

PCR-RFLP分析人结直肠癌DCC基因杂合性缺失

目的：探讨DCC基因在结直肠癌中杂合性缺失情况及其意义。方法：应用PCR技术检测了25例中国人散发型结直肠癌病人正常粘膜及癌组织和3个直肠癌细胞系DCC基因M2位点限制性片断长度多态性。结果：16例（64％）病人具有杂合性，其中4例（25％）癌组织表现出等位基因杂合性缺失。此4例均有淋巴结或肝转移。细胞系HCT，HR8348表现杂合性，HT29表现纯合性。结论：DCC基因是一个在结直肠肿瘤发生发展中起重要作用的抑癌基因，该基因的异常与结直肠癌发生发展有关。     

双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3/PSA mRNA比值及其应用

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值,评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针,PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素,建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法,并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测,评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板,PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0,6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4,7％和4．1％-4,9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862）,当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％,其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度,且节省操作时间、降低实验成本,有望成为PCa早期诊断的有效方法。     

抑癌基因DCC在肺癌中的表达及杂合性丢失

为探讨结肠癌制失基因与肺癌发病的关系，利用半定量的逆转录聚合酶链反应结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了７例肺癌患者癌组织及正常肺组织中ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ的表达，发现４例肿瘤组织中ＤＣＣ基因表达明显低于对照肺组织。     

微小RNA在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究结肠癌组织与对应正常结肠组织微小RNA(miRNA)的表达特征及其在结肠癌诊断中的意义.方法 取天津市肿瘤医院2004至2007年手术切除的15例晚期结肠癌组织标本及其癌旁正常组织标本.通过定量PCR(qRT-PCR)法检测6例结肠癌及其癌旁正常结肠组织的手术标本中200种miRNA的表达情况,应用问题分析(PAM)法对其他9例结肠癌组织及其癌旁正常结肠组织进行定性判断(癌和非癌).结果 6例结肠癌及其癌旁正常结肠组织中存在132种miRNA,其中47种miRNA在结肠癌发生过程中表达量显著下降(＜0.66).应用PAM法对9对结肠癌组织/远端正常结肠组织进行定性判断的结果与病理切片诊断结果基本一致(吻合度准确率11/12).结论 miRNA与结肠癌的发生发展有密切的联系,有可能成为一个有效的肿瘤标志物以进行结肠癌的早期预测和诊断.     

16 SrRNA基因聚合酶链反应检测细菌感染的研究

目的：探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法：通过自行设计合成的细菌１６ＳｒＲＮＡ基因高度保守区引物,对２０ 种标准菌株、１２ 种２７ 株临床分离的细菌株、人基因组ＤＮＡ及巨细胞病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果：对所测细菌株均获得３７１ ｂｐ 扩增产物,而与人基因组ＤＮＡ、巨细胞病毒无交叉阳性反应,ＰＣＲ最低能检测ｌｐｇ 大肠杆菌ＤＮＡ。结论：建立了用共同引物ＰＣＲ扩增以判断是否存在细菌感染的方法,该方法检测快速,敏感性和特异性高。     

用PCR—SSCP方法探讨ras基因,p53基因突变与喉癌的关系

目的：研究ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变与喉鳞状细胞癌发病的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构像多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析４０例喉鳞状细胞癌Ｈ－ｒａｓ,Ｋ－ｒａｓ,和Ｎ－ｒａｓ基因的第１２密码子,ｐ５３基因第５,７外显子中点突变的情况。结果：Ｈ－ｒａｓ基因突变９例,突变率为２２．５％（９／４０）;Ｋ－ｒａｓ基因突变８例,突变率为２０％（８／４０）,Ｎ－ｒａｓ基因突变５例,突变率为１２．５     

恒温扩增技术在分子诊断中的应用

聚合酶链反应(PCR)技术是近年来广泛应用于科学研究和临床检验的一项技术。目前传统的PCR技术中核酸的扩增存在效率不高且需要专用的仪器设备等缺陷,而恒温扩增技术由于引物种类多样,检测方法多变,从而克服了传统PCR核酸扩增技术的缺点,使其越来越多地被应用于分子诊断中。经国内外学者的研究证实,恒温扩增技术有着广泛的应用前景,现着重对恒温扩增技术予以综述。     

无精症及少精症患者的病因学研究

目的:探讨染色体核型异常和DAZ基因缺失与生精障碍的关系。方法:应用多重PCR技术对60例无精、少精患者和60例正常生育力男性进行DAZ基因检测,并对60例无精、少精患者进行外周血染色体检查。结果:在60例无精、少精患者中共发现23例异常,约为38.3%(23/60),其中DAZ基因缺失4例,染色体异常19例,DAZ基因缺失率为6.7%(4/60),染色体异常率为31.7%(19/60),正常生育力男性未检测到DAZ基因缺失。结论:染色体异常和DAZ基因缺失与生精障碍密切相关,是无精、少精的重要原因。     

七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增ＨＥＶ开放读码框架２（ＯＲＦ２）ｃＤＮＡ，并用ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０ＤＮＡ序列分析试剂盒，经双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止直接测序法测定ＲＴ－ｎＰＣＲ扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京５个城市４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶＯＲＦ２ｃＤＮＡ，对其中７株进行了核苷酸序列分析，表明它们与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）的同源性为７８．９％～８０．２％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）流行株（Ｅｐ）的同源性为９３．１％～９５．１％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）散发株（Ｓｐ）的同源性为９２．３％～９４．２％；与ＨＥＶ中国新疆流行株ＣＨ１．１同源性为９６．５％～９８．９％；７株散发性ＨＥＶ间核苷酸序列的同源性为９５．７％～１００％。结论该７株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＨＥＶＣＨ１．１核苷酸序列的同源性较高，均属同一亚型。     

卵巢癌原癌基因c－erbB－2扩增与预后的关系

提取卵巢癌组织ＤＮＡ，限制性内切酶ＥｃｏＲＩ酶解后，经过凝胶电泳，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移至硝酸纤维膜，与￣（３２）Ｐ标记的ｃ－ｅｒｂＢ－２探针进行分子杂交，放射自显影。结果显示，２６例上皮性卵巢癌中，８例（３０．８％）出现了该基因的扩增。这８例均为晚期（ＩＩＩ～ＩＶ期）肿瘤病人，其中５例在术后２～４个月内死亡，说明该基因的扩增在晚期卵巢癌中出现，与病人预后不良有关，该基因的激活在卵巢癌的发生过程中亦起一定的作用。