重症肌无力患者骨骼肌中减少的25000蛋白即为碳酸酐酶Ⅲ的论证

目的论证重症肌无力(MG)患者骨骼肌中特异性减少的25000蛋白为碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)分子。方法用双向电泳结合免疫Western blot分析25000蛋白抗体和CAⅢ抗体有免疫反应的蛋白质分子的物化特征,分别用免疫Dot blot与免疫Western blot观察两种抗体对纯化的25000蛋白及骨骼肌蛋白匀浆的竞争结合,用免疫Western blot分析健康人与MG患者骨骼肌CAⅢ的蛋白表达。结果双向电泳结合免疫Western blot显示,25000蛋白抗体和CAⅢ抗体识别的蛋白质具有相同的相对分子质量和等电点;免疫Dot blot与免疫Western blot的竞争结合证实25000蛋白与CAⅢ为同一物质;免疫Western blot表明,用25000蛋白抗体与CAⅢ抗体检测健康人与MG患者骨骼肌25000蛋白表达的结果亦几乎是相同的。结论MG患者骨骼肌特异减少的25000蛋白分子就是CAⅢ,这为进一步深入研究CAⅢ与MG的发病奠定了基础。     

重症肌无力患者骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ蛋白减少的原因

目的 分析重症肌无力患者(MG)骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)蛋白和CAⅢ mRNA的表达,并与健康对照组进行比较,探讨MG骨骼肌CAⅢ蛋白缺乏的原因.方法 用Western blot分析17例MG患者与19名健康人骨骼肌CAⅢ蛋白的水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析CAⅢ mRNA的表达.结果 Western blot显示,MG患者骨骼肌CAⅢ蛋白谱带密度低于健康人骨骼肌;经半定量分析,健康人骨骼肌CAⅢ蛋白水平的相对值为1.70±0.29,MG骨骼肌为0.76±0.08,两者差异有统计学意义(P=0.006).RT-PCR半定量结果为:健康人骨骼肌CAⅢ mRNA表达的相对值为0.29±0.04,MG骨骼肌为0.15±0.02,两组间差异亦有统计学意义(P=0.005).分析同一标本CAⅢ蛋白与CAⅢ mRNA表达,约77%的MG患者骨骼肌中两者呈一致性减少.结论 MG骨骼肌CAⅢ蛋白降低的主要原因是其本身CAⅢ mRNA的表达降低所致,骨骼肌CAⅢ mRNA的表达降低与MG发病的关系还需进一步阐明.     

骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ具有磷酸酶活性

目的：探讨骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ／（CAⅢ）是否本身具有磷酸酶活性。方法：用双向电泳结合Western blot方法将分离的大鼠骨骼肌蛋白转移至硝酸纤维膜，利用镜像原理，识别与CAⅢ抗体发生免疫反应的抗原在双向电泳图谱中的确切位置。在此基础上，以同样的方法与原理，对在固相膜上的磷酸酶活性进行原位染色，观察CAⅢ是否磷酸酶活性染色呈阳性。此外，通过磷酸酶抑制剂实验及酶催化反应动力学实验，论证CAⅢ的磷酸酶活性染色特异性及CAⅢ具有磷酸酶的功能。结果：CAⅢ抗体反应显示，利用镜像原理能从复杂的双向电泳图谱中容易识别CAⅢ蛋白；磷酸酶活性染色表明，鉴定的CAⅢ具有磷酸酶活性。磷酸酶特异抑制剂实验表明，CAHI的磷酸酶活性染色具有特异性；酶催化反应动力学研究证实，CAⅢ蛋白具有确凿的磷酸酶功能。结论：骨骼肌的CAⅢ本身具有磷酸酶活性，说明CAⅢ参与了细胞的磷酸化——去磷酸化过程，提示重症肌无力（MG）患者骨骼肌收缩无力和易疲劳可能涉及了MG的非免疫机制。另外，本研究创建的双向电泳结合Westem blot方法可被借鉴用于“功能蛋白质组学”的研究。     

重症肌无力骨骼肌减少的25000蛋白分子鉴定

目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子结构。方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用ImmunoWesternblot分析骨骼肌蛋白与25000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合。结果:质谱和N端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25000的蛋白其精确分子质量为29632.05,该蛋白的N端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的。结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究。     

去神经对大鼠骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ表达和磷酸酶活性的影响

目的 观察去神经对骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ(carbonic anhydrase Ⅲ,CAⅢ)表达及其磷酸酶(phosphatase)活性的影响,探讨神经冲动受阻是否为重症肌无力(myasthenia gravis,MG)骨骼肌CAⅢ减少的原因.方法 定向切断支配大鼠趾长伸肌(extensor digitorum longus,EDL)和比目鱼肌(soleus,Sol)的神经纤维,术后第7、14、28和56天用Western blot分析EDL和Sol的CAⅢ水平,用固相膜上原位酶活性染色方法评估CAⅢ的磷酸酶活性.结果 (1)正常侧(即去神经对侧)Sol的CAⅢ水平远高于EDL,并且两者都表现出随时间增加(动物年龄增长)而增加的趋势.去神经后,EDL的CAⅢ水平随时间的延长而逐渐增加;Sol的CAⅢ水平则以14 d为分界先增加后降低.(2)正常侧Sol的CAⅢ的磷酸酶活性[随时间增加(动物年龄增长)呈逐渐增加的趋势]均高于EDL(变化不明显).去神经后,Sol的CAⅢ磷酸酶活性(第14、28、56天分别为14.39±1.93、11.48±1.46、9.04±1.46)明显低于正常侧(22.75±1.80、25.26±3.15、25.82±2.97,t=0.002、0.005、0.002,均P＜0.05),EDL的CAⅢ磷酸酶活性与正常侧相比亦是降低,但差异无统计学意义.(3)正常侧EDL和Sol的CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性相一致;去神经后CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性发生了背离,即CAⅢ蛋白表达水平增加,但其磷酸酶活性却降低.结论 去神经所致的神经冲动传递障碍与MG自身抗体所致的神经冲动传递障碍对骨骼肌CAⅢ表达水平的影响不同,MG骨骼肌CAⅢ表达水平减少并非是其自身抗体所致的神经冲动传递障碍造成.

Abstract：

Objective To observe the effects of nerve impulses on the expression of carbonic anhydrase Ⅲ ( CAⅢ ) and its phosphatase activity, and to explore whether or not the cause of CAⅢ expressive decreased in skeletal muscles of myasthenia gravis( MG) is resulted from the obstruction of nerve impulse.Methods The motor nerves of extensor digitorum longus (EDL, mainly composed by fast fibers) and soleus (Sol, mainly composed by slow fibers) were cut off by operation of denervation.Levels and phosphatase activities of CAⅢ were analyzed at 7, 14, 28, and 56 d after denervation by Western blot and specific enzyme staining on the membrane following SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively.Results (1) Levels of CAⅢ in Sol of normal side (eg denervated contralateral) were much higher than that in EDL of normal side, and the levels in both Sol and EDL had an enhanced tendency with time (age) increase, especially for Sol.After denervation, the levels of CAⅢ in EDL were gradual increased, however, the level in Sol was 14 d after denervation as the boundary of ascension and then decline.( 2) The phosphatase activities of CAⅢ in Sol of normal sides were much higher than that in EDL of normal sides, and there were an enhanced tendency with time (age) increase in Sol, but no significant changes were found in EDL The enzyme activities in denervated Sol were lower(in the 14, 28, and 56 days after denervation: 14.39 ±1.93, 11.48 ±1.46, 9.04 ±1.46) much than their contralaterals(22.75 ± 1.80, 25.26 ±3.15, 25.82 ± 2.97; t = 0.002, 0.005, 0.002, all P ＜ 0.05), the enzyme activities in denervated EDL were also lower than their contralaterals, however, no significant differences were found.(3)It was consistent for CAⅢ levels and phosphatase activities in both Sol and EDL of normal sides.After denervation, however, the deviation of the CAⅢ levels and phosphatase activities happened, the levels of CAⅢ were increased, but the phosphatase activities were decreased.Conclusions The effect of nerve impulse transferring obstructed by denervation on CAⅢ expression of skeletal muscles is different from that by MG auto-antibody.The decrease of CAⅢ protein in the MG muscles may be not resulted from the nerve impulse transferring obstructed by MG auto-antibody.     

抗骨骼肌抗体与重症肌无力

重症肌无力（M G ）是一种累及神经‐肌肉接头处乙酰胆碱受体（AchR）的自身免疫性疾病。其主要临床表现为骨骼肌的易疲劳性,经休息和服用抗胆碱酯酶药物可部分缓解,80％～90％的全身型MG患者血清中可检测到AchR‐Ab［1］。AchR‐Ab可用于MG的诊断,但其与病情严重程度、是否合并胸腺瘤和发病年龄无相关性,近来研究发现,T itin抗体、RyR抗体、MusK抗体等抗骨骼肌抗体在MG的发病机制中起重要作用,并与病情严重程度、发病年龄、性别、预后具有相关性。     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的：表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finer domain，简称P9-ZFD)编码的蛋白质，制备P9-ZFD多克隆抗体，研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位。方法：应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列，构建pET24a-P9-ZFD表达载体，在E．coli B121(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白，组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb／c小鼠制备其多克隆抗体。ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性。免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布。结果：表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30kD，纯度达95％以上。制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性。免疫组织化学和免疫电镜结果显示，P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布。结论：重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达，是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分。     

重症肌无力患者酪氨酸激酶抗体的检测

目的探讨酪氨酸激酶抗体（MuSKAb）在血清阴性重症肌无力（SNMG）发病中的作用。方法采用放射免疫法检测198例重症肌无力（MG）患者血清中抗乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）水平，筛选出SNMG血清样本再行MuSKAb水平检测。结果MG患者血清AChRAb浓度明显高于对照组（P〈0．05），其阳性率为81．3％，SNMG患者血清MuSKAb均为阴性。结论MuSKAb可能在中国SNMG患者中的检出率较低。     

兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体的制备及其表达

背景：神经系统富亮氨酸重复超家族成员LRRN3是一类富含LRR重复序列的蛋白,可能与神经系统发育、分化和信息传递等功能密切相关,研究其功能对于神经系统发育调控以及损伤修复的机制有着重要意义. 目的：制备大鼠LRRN3多克隆抗体,并初步研究其蛋白表达谱. 设计,时间和设置：相关细胞学和分子生物学实验在中南大学湘雅医学院组织学与胚胎学系和神经生物学系完成,实验时间为2007年到2009年. 材料：免疫用抗原为前期在原核工程菌E.coli BL21（DE3）中表达的大鼠LRRN3 C端结构域重组蛋白;免疫动物为雄性新西兰兔2只. 方法：以前期制备的大鼠LRRN3 C端结构域重组蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔,制备兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,并运用ELISA和Western Blot对抗体进行鉴定.收获并纯化抗体, 应用免疫组织化学技术和Western Blot等实验初步检测LRRN3蛋白在成年大鼠体内的蛋白表达. Main outcome measures: 运用ELISA鉴定抗 LRRN3血清效价;Western blot鉴定抗 LRRN3 多克隆抗体的特异性;免疫组化技术和Western blot检测LRRN3蛋白在大鼠体内的表达. 结果：获得较高纯度的兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,抗血清效价达1：1000;Western Blot检测SD大鼠大脑组织总蛋白,可见在分子量约79kD 处有一清晰的条带,与全长 LRRN3 理论大小一致;运用该抗体检测大鼠体内LRRN3的蛋白表达谱,结果表明该蛋白主要在中枢神经系统表达,阳性部位为大脑皮质多级神经元、海马齿状回和CA1区多级神经元以及小脑蒲肯野细胞,神经胶质细胞中无明显阳性反应. 结论：制备了兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,并对大鼠LRRN3蛋白的表达进行了初步检测. 关键词：多克隆抗体,制备,蛋白表达,LRRN3     

sICAM-1在重症肌无力患者血清及外周血单个核细胞培养上清液中的变化

目的：了解可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）在重症肌无力（MG）患者血清及外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中的变化情况。方法：用酶联免疫吸附法（ELISA）检测正常对照和MG患者，血清及PBMC培养上清液中sICAM-1的水平，并分析激素对上清液中sICAM-1的影响。结果：正常对照组与MG组血清sICAM-1的水平没有显著差异；而在PBMC培养上清液中，MG组高于正常对照组。加入地塞米松培养48h后，7例MG患者PBMC培养上清液中sICAM-1-1水平降低。结论：MG患者PBMC可分泌更多的sICAM-1，升高的sICAM-1可能是体内ICAM-1产生及循环过程的中间产物；ELISA检测MG患者PBMC培养上清液（加FBS）中sICAM-1的水平是一种有效的检测手段；此外，地塞米松可以下调PBMC分泌sICAM-1。     

重症肌无力患者血清Ryanodine受体抗体检测及意义

目的探讨Ryanodine受体（RyR）抗体在重症肌无力（myasthenia gravis，MG）诊断中的临床意义。方法采用ELISA法检测89例MG患者、66例其他神经系统疾病患者和66名正常对照者血清RyR抗体水平。结果MG组血清RyR抗体阳性率显著高于其他神经系统疾病组和正常对照组（P〈0．05），其敏感性和特异性分别为55．0％和91．7％。晚发型MG患者血清RyR抗体阳性率（74．4％）明显高于早发型MG（37．0％，P〈0．05）。MG合并胸腺瘤（MGT）和未合并胸腺瘤（nMGT）患者血清RyR抗体阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。将MG患者根据Osserman评分进行分型，各型血清RyR抗体阳性率及其吸光度值大小与病情严重程度无相关性（P〉0．05）。结论RyR抗体多见于晚发型MG，对诊断MG具有较高的敏感性和特异性。     

重症肌无力患者血清sIL—2R水平检测

对100例临床确诊为重症肌无力（MG）、血清乙酰胆碱受体抗体阳性的患者进行血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL－2R）检测。结果表明：（1）MG患者治疗前血清中sIL-2R水平与正常对照组无显著性差异。其中全身型MG组较正常对照组sIL－2R水平明显增高，但眼肌型MG组与正常对照组间无显著差异；（2）全身型MG组经强的松治疗4周后sIL－2R水平明显下降；（3）胸腺瘤切除术后1年后sIL－2R水平较术前显著降低。上述结果提示sIL－2R水平可能与MG疾病状态有密切关系。     

重症肌无力患者胸腺手术后血清AchRab和CAEab的变化

目的：研究重症肌无力（MG）患者手术后血清乙酰胆碱受体抗体（AchRab）与抗骨骼肌柠檬酸提取物抗体（CAEab）的变化。方法：用固相酶联免疫吸附法测定血清AchRab和CAEab。结果：MG患者血清AchRab和CAEab的水平明显高于对照组（P＜0．01）。AchRab水平在手术后1个月开始下降（P＜0．05）,在手术后1年下降更明显（P＜0．01）;CAEab水平在手术后1个月和6个月下降不明显（P＞0．05）,在手术后1年下降有显著性差异（P＜0．05）。手术后1年患者血清中AchRab和CAEab水平仍高于对照组（P＜0．01）。结论：手术后血清AchRab和CAEab的检测有助于了解患者的病情。     

运动神经元生存蛋白多克隆抗体的制备及该蛋白在脊髓性肌萎缩症患者骨骼肌中的表达

目的制备运动神经元生存（SMN）蛋白多克隆抗体，探讨SMN蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症（SMA）患者骨骼肌中的表达情况。方法构建pET-28a（＋）／SMN原核表达质粒，诱导表达SMN-His融合蛋白，免疫新西兰大白兔制备SMN多克隆抗体。构建pcDNA3．1／myc-HisB-SMN真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母（CHO）细胞。收集骨折患者以及I、Ⅱ、Ⅲ型SMA患者的骨骼肌组织各3份。分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行CHO细胞及骨骼肌组织的SMN蛋白表达研究。结果成功制备了兔抗人全长SMN多克隆抗体，经鉴定其特异性及敏感性均较高。免疫荧光染色显示SMN蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布，以核周较为明显。免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织SMN与内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）条带密度比值（SMN／GAPDH）平均为0．619，Ⅲ、Ⅱ型SMA患者SMN／GAPDH比值较低，均值分别为0．347和0．340，而Ⅰ型SMA患者骨骼肌中SMN／GAPDH比值显著降低，均值仅为0．079。结论高质量的兔抗人全长SMN多克隆抗体的制备为SMA的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础，SMA患者骨骼肌中SMN蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关。     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的:表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finger domain,简称P9-ZFD)编码的蛋白质,制备P9-ZFD多克隆抗体,研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列,构建pET24a-P9-ZFD表达载体,在E.coli BL21(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白,组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb/c小鼠制备其多克隆抗体.ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性.免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布.结果:表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30 kD,纯度达95%以上.制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性.免疫组织化学和免疫电镜结果显示,P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布.结论:重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达,是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分.     

重症肌无力P9—ZFD基因片段表达蛋白的研究

目的:探讨P9-ZFD基因片段在人骨骼肌中表达的蛋白质。方法:以MG骨骼肌RNA为模板,扩增编码P9-ZFD片段的cDNA,构建pFT24a-P9-ZFD表达载体,经BL21(DE3)诱导表达P9-ZFD蛋白和组氨酸亲和层析法进行纯化,并制备P9-ZFD抗体。Western blot鉴定MG和对照组骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白组分。结果:骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白质相对分子质量约40000,在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显高于对照组(P<0.001)。结论:骨骼肌中40 000的蛋白是P9-ZFD基因片段的编码产物,该蛋白在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显上调,可能具有重要的病理生理意义。     

Neurocan基因蛋白表达及其抗体制备与检测的实验研究

目的 制备Neurocan蛋白,用此蛋白免疫动物制备抗血清,并对抗血清进行检测,最终使待参与DNA疫苗构成的Neurocan蛋白所产生的抗体能与脑内创伤Ⅸ的相应抑制性蛋白抗原结合,从而减轻抑制因子对神经生长的抑制作用,促进神经再生. 方法 合成]Weuroc011,基因,构建原核表达质粒PET30a-Neurocan,转化大肠杆菌BL21.异丙基-β-D.硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的 蛋白,并经SDS-PAGE、Western blot鉴定.Neurocan蛋白免疫兔制备免疫血清.ELISA法检测抗血清效价,以兔免疫前血清为阴性对照;Western blot检测抗血清特异性,以免疫血清为一抗,山羊抗兔-AP为二抗,NBT/BCIP显色. 结果 合成的Neurocan基因经酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定,显示序列正确.原核表达Neurocan蛋白经过SDS-PAGE鉴定,条带大小约为55 000,与计算出来的大小一致;经Western blot鉴定.目的 蛋白能与his抗体特异性结合,说明是Neurocan,基因的表达产物.抗血清经ELISA法检测.抗血清效价达到1:100万;经Western blot检测.目的 条带明显. 结论 Neurocan蛋白原核表达成功;通过Neurocan蛋白免疫兔可得到特异性抗体,此抗体能与Neurocan蛋白特异性结合,为DNA疫苗的进一步研制奠定了基础.     

高血压性脑出血急性期血中抗凝及纤溶状态的动态观察

目的探讨高血压性脑出血（HICH）急性期抗凝及纤溶状态的动态变化规律。方法抗凝血酶Ⅲ活性（ATⅢ：A）测定采用凝血酶凝胶空斑法,抗凝血酶Ⅲ抗原含量（ATⅢ：Ag）测定采用免疫火箭电泳法;纤溶酶原活性（PLG：A）测定采用醋蛋白分解法;D－二聚体（D－D）水平测定采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）。结果HICH发病后24小时内及第3天,血中ATⅢ：Ag较正常对照组显著降低,而D—D则显著升高,第7天均与对照组无显著性差异。PLG：A各组均与对照组无显著性差异。结论HICH急性或ATⅢ呈短暂性降低,D－D暂时性升高,是抗凝、纤溶系统对HICH时脑组织损伤引起血中凝血活性升高的一种代偿反应。     

兔抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定

背景：凋亡诱导因子是存在于线粒体膜间隙中的黄素蛋白,它不仅具有氧化还原和电子传递功能,还具有促细胞凋亡功能,从而在维持细胞正常生理活动中具有重要作用。 目的：制备抗凋亡诱导因子多克隆抗体并进行特性鉴定。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2006-09/2008-08在新乡医学院免疫学研究中心完成。 材料：新西兰大白兔雌性2只,体质量1.9~2.1 kg;Jurkat E6-1细胞系购自美国ATCC公司。食管癌组织取自新乡医学院普通外科手术患者。抗原肽-KLH由上海华大天源生物科技公司合成。CNBr活化的Sepharose 4B购自美国Pharmacia公司。 方法：利用美国过敏和感染疾病研究所(NIAID)主办的抗原表位分析网站(http://beta.immuneepitope.org/home.php)的在线软件对凋亡诱导因子蛋白的氨基酸序列进行分析设计凋亡诱导因子抗原肽,制备多克隆抗体并纯化。 主要观察指标：采用间接ELISA、Western blot、免疫组织化学3种方法对获得的多克隆抗体进行特性鉴定。 结果：间接ELISA法检测显示,血清抗凋亡诱导因子抗体的效价达到1∶128 000。Western blot结果显示,存在Mr67 000条带。免疫组织化学检测结果显示,在食管癌细胞的胞质中有棕黄色的阳性颗粒存在,说明此抗体也可以用于免疫组织化学染色。 结论：实验获得了高效价的特异性的抗凋亡诱导因子抗体。     

雷诺丁受体抗体阳性的重症肌无力临床特点

雷诺丁受体（ryanodine receptor, RyR）是存在于内质网/肌质网中的一种重要钙离子通道，在骨骼肌兴奋收缩偶联机制中起重要作用。RyR抗体阳性的重症肌无力（myasthenia gravis, MG）患者常合并胸腺瘤，对常规治疗不敏感，会导致延误临床早期识别及治疗。血清RyR抗体水平与患者临床症状的严重程度显著相关。该文就4例RyR抗体阳性MG患者的临床特点及治疗过程进行讨论并文献复习，旨在提高对RyR抗体阳性MG的认识及诊疗水平。